Name: Actividad De Las Neuronas Aferentes De La Línea Lateral Posterior Durante La Natación En El Pez Cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 34 s
Description: Aprende electrofisiología de parche para registrar la actividad de neuronas aferentes en tiempo real usando larvas de pez cebra. Este método permite estudiar circuitos de células ciliadas relevantes para trastornos auditivos humanos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos el apoyo del Instituto Nacional de Salud (DC010809), la Fundación Nacional de Ciencias (IOS1257150, 1856237) y el Laboratorio Whitney de Biociencias Marinas a J.C.L. Nos gustaría agradecer a los miembros pasados y presentes del Laboratorio Liao por estimular las discusiones.

<ol><li>Trapani, J. G., Nicolson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+spontaneous+activity+in+afferent+neurons+of+the+zebrafish+lateral-line+organ%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanism of spontaneous activity in afferent neurons of the zebrafish lateral-line organ.</a> The Journal of Neuroscience. 31 (5), 1614-1623 (2011).</li>
<li>Haehnel-Taguchi, M., Akanyeti, O., Liao, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Afferent+and+motorneuron+activity+in+response+to+single+neuromast+stimulation+in+the+posterior+lateral+line+of+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Afferent and motorneuron activity in response to single neuromast stimulation in the posterior lateral line of larval zebrafish.</a> Journal of Neurophysiology. 112 (6), 1329-1339 (2014).</li>
<li>Levi, R., Akanyeti, O., Ballo, A., Liao, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+response+properties+of+primary+afferent+neurons+in+the+posterior+lateral+line+system+of+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Frequency response properties of primary afferent neurons in the posterior lateral line system of larval zebrafish.</a> Journal of Neurophysiology. 113 (2), 657-668 (2015).</li>
<li>Harris, G. G., Fishkopf, L. S., Flock, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+potentials+from+hair+cells+of+the+lateral+line%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Receptor potentials from hair cells of the lateral line.</a> Science. 167 (3914), 76-79 (1970).</li>
<li>Dow, E., Jacobo, A., Hossain, S., Siletti, K., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connectomics+of+the+zebrafish%27s+lateral+line+neuromast+reveals+wiring+and+miswiring+in+a+simple+microcircuit%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Connectomics of the zebrafish's lateral line neuromast reveals wiring and miswiring in a simple microcircuit.</a> eLife. 7, 33988(2018).</li>
<li>Obholzer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+glutamate+transporter+3+is+required+for+synaptic+transmission+in+zebrafish+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Vesicular glutamate transporter 3 is required for synaptic transmission in zebrafish hair cells.</a> The Journal of Neuroscience. 28 (9), 2110-2118 (2008).</li>
<li>Keen, E. C., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+characteristics+of+the+hair+cell%27s+afferent+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Transfer characteristics of the hair cell's afferent synapse.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (14), 5537-5542 (2006).</li>
<li>Li, G., Keen, E., Andor-Ardó, D., Hudspeth, A. J., von Gersdorff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unitary+event+underlying+multiquantal+EPSCs+at+a+hair+cell%27s+ribbon+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The unitary event underlying multiquantal EPSCs at a hair cell's ribbon synapse.</a> The Journal of Neuroscience. 29 (23), 7558-7568 (2009).</li>
<li>Manley, G. A., Robertson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+spontaneous+activity+of+auditory+neurons+in+the+spiral+ganglion+of+the+guinea-pig+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Analysis of spontaneous activity of auditory neurons in the spiral ganglion of the guinea-pig cochlea.</a> The Journal of Physiology. 258 (2), 323-336 (1976).</li>
<li>Kiang, N. Y. S., Watanabe, T., Thomas, E., Clark, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKiang%2C+NYS+%22Discharge+patterns+of+single+fibers+in+the+cat%27s+auditory+nerve%22">Discharge patterns of single fibers in the cat's auditory nerve</a>. , MIT Press. Cambridge MA. (1965).</li>
<li>Corey, D. P., Hudspeth, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionic+basis+of+the+receptor+potential+in+a+vertebrate+hair+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ionic basis of the receptor potential in a vertebrate hair cell.</a> Nature. 281 (5733), 675-677 (1979).</li>
<li>Trapani, J. G., Nicolson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+recordings+from+zebrafish+lateral-line+hair+cells+and+afferent+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Physiological recordings from zebrafish lateral-line hair cells and afferent neurons.</a> Methods in Cell Biology. 100, 219-231 (2010).</li>
<li>Reinig, S., Driever, W., Arrenberg, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+descending+diencephalic+dopamine+system+is+tuned+to+sensory+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">The descending diencephalic dopamine system is tuned to sensory stimuli.</a> Current Biology. 27 (3), 318-333 (2017).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptically+silent+sensory+hair+cells+in+zebrafish+are+recruited+after+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Synaptically silent sensory hair cells in zebrafish are recruited after damage.</a> Nature Communications. 9 (1), 1388(2018).</li>
<li>Pichler, P., Lagnado, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+behavior+selectively+inhibits+hair+cells+activated+forward+motion+in+the+lateral+line+of+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Motor behavior selectively inhibits hair cells activated forward motion in the lateral line of zebrafish.</a> Current Biology. 30 (1), 150-157 (2020).</li>
<li>Olszewski, J., Haehnel, M., Taguchi, M., Liao, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+larvae+exhibit+rheotaxis+and+can+escape+a+continuous+suction+source+using+their+lateral+line%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Zebrafish larvae exhibit rheotaxis and can escape a continuous suction source using their lateral line.</a> PloS One. 7 (5), 36661(2012).</li>
<li>Suli, A., Watson, G. M., Rubel, E. W., Raible, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rheotaxis+in+larval+zebrafish+is+mediated+by+lateral+line+mechanosensory+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rheotaxis in larval zebrafish is mediated by lateral line mechanosensory hair cells.</a> PLoS One. 7 (2), 29727(2012).</li>
<li>Oteiza, P., Odstcil, I., Lauder, G., Portugues, R., Engert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mechanism+for+mechanosensory-based+rheotaxis+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A novel mechanism for mechanosensory-based rheotaxis in larval zebrafish.</a> Nature. 547 (7664), 445-448 (2017).</li>
<li>McHenry, M. J., Feitl, K. E., Strother, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Larval+zebrafish+rapidly+sense+the+water+flow+of+a+predator%27s+strike%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Letters%22%5BJournal%5D)">Larval zebrafish rapidly sense the water flow of a predator's strike.</a> Biology Letters. 5 (4), 477-479 (2009).</li>
<li>Stewart, W. J., Cardenas, G. S., McHenry, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+larvae+evade+predators+by+sensing+water+flow%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish larvae evade predators by sensing water flow.</a> The Journal of Experimental Biology. 216, Pt 3 388-398 (2013).</li>
<li>Mekdara, P. J., Schwalbe, M. A. B., Coughlin, L. L., Tytell, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+lateral+line+ablation+and+regeneration+in+schooling+giant+danios%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The effects of lateral line ablation and regeneration in schooling giant danios.</a> The Journal of Experimental Biology. 221, Pt 8 175166(2018).</li>
<li>Palmer, L. M., Giuffrida, B. A., Mensinger, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+recordings+from+the+lateral+line+in+free-swimming+toadfish%2C+Opsanus+tau%5BTitle%5D)+AND+%22The+Biological+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Neural recordings from the lateral line in free-swimming toadfish, Opsanus tau.</a> The Biological Bulletin. 205 (2), 216-218 (2003).</li>
<li>Ayali, A., Gelman, S., Tytell, E. D., Cohen, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+line+activity+during+undulatory+body+motions+suggests+a+feedback+link+in+closed-loop+control+of+sea+lamprey+swimming%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Lateral line activity during undulatory body motions suggests a feedback link in closed-loop control of sea lamprey swimming.</a> Canadian Journal of Zoology. 87 (8), 671-683 (2009).</li>
<li>Mensinger, A. F., Van Wert, J. C., Rogers, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+line+sensitivity+in+free-swimming+toad+fish+Opsanus+tau%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Lateral line sensitivity in free-swimming toad fish Opsanus tau.</a> The Journal of Experimental Biology. 222, Pt 2 190587(2019).</li>
<li>Montgomery, J., Bodznick, D., Halstead, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindbrain+signal+processing+in+the+lateral+line+system+of+the+dwarf+scorpionfish+Scopeana+papillosus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Hindbrain signal processing in the lateral line system of the dwarf scorpionfish Scopeana papillosus.</a> The Journal of Experimental Biology. 199, Pt 4 893-899 (1996).</li>
<li>Montgomery, J. C., Bodznick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+adaptive+filter+that+cancels+self-induced+noise+in+the+electrosensory+and+lateral+line+mechanosensory+systems+of+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">An adaptive filter that cancels self-induced noise in the electrosensory and lateral line mechanosensory systems of fish.</a> Neuroscience Letters. 174 (2), 145-148 (1994).</li>
<li>Palmer, L. M., Deffenbaugh, M., Mensinger, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+of+the+anterior+lateral+line+to+natural+stimuli+in+the+oyster+toadfish%2C+Opsanus+tau+%28Linnaeus%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Sensitivity of the anterior lateral line to natural stimuli in the oyster toadfish, Opsanus tau (Linnaeus).</a> The Journal of Experimental Biology. 208, Pt 18 3441-3450 (2005).</li>
<li>Russell, I. J., Roberts, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+spontaneous+lateral-line+activity+of+efferent+nerve+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of spontaneous lateral-line activity of efferent nerve stimulation.</a> The Journal of Experimental Biology. 57, 77-82 (1972).</li>
<li>Lunsford, E. T., Skandalis, D. A., Liao, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efferent+modulation+of+spontaneous+lateral+line+activity+during+and+after+zebrafish+motor+commands%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Efferent modulation of spontaneous lateral line activity during and after zebrafish motor commands.</a> Journal of Neurophysiology. 122 (6), 2438-2448 (2019).</li>
<li>Russell, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacology+of+efferent+synapses+in+the+lateral-line+system+of+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The pharmacology of efferent synapses in the lateral-line system of Xenopus laevis.</a> The Journal of Experimental Biology. 54 (3), 643-659 (1971).</li>
<li>Roberts, B. L., Russell, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+activity+of+lateral-line+efferent+neurons+in+stationary+and+swimming+dogfish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The activity of lateral-line efferent neurons in stationary and swimming dogfish.</a> The Journal of Experimental Biology. 57 (2), 435-448 (1972).</li>
<li>Flock, A., Russell, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+post-synaptic+action+of+efferent+fibres+in+the+lateral+line+organ+of+the+burbot+Lota+lota%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The post-synaptic action of efferent fibres in the lateral line organ of the burbot Lota lota.</a> The Journal of Physiology. 235 (3), 591-605 (1973).</li>
<li>Montgomery, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noise+cancellation+in+the+electrosensory+system+of+the+thornback+ray%3B+common+mode+rejection+of+input+produced+by+the+animal%27s+own+ventilatory+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Noise cancellation in the electrosensory system of the thornback ray; common mode rejection of input produced by the animal's own ventilatory movement.</a> Journal of Comparative Physiology. 155, 103-111 (1984).</li>
<li>Tricas, T. C., Highstein, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+the+octavolateralis+efferent+system+upon+the+lateral+line+of+free-swimming+toadfish%2C+Opsanus+tau%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Action of the octavolateralis efferent system upon the lateral line of free-swimming toadfish, Opsanus tau.</a> Journal of Comparative Physiology. 169 (1), 25-37 (1991).</li>
<li>Weeg, M. S., Land, B. R., Bass, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vocal+pathways+modulate+efferent+neurons+to+the+inner+ear+and+lateral+line%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Vocal pathways modulate efferent neurons to the inner ear and lateral line.</a> The Journal of Neuroscience. 25 (25), 5967-5974 (2005).</li>
<li>Elgoyhen, A. B., Johnson, D. S., Boulter, J., Vetter, D. E., Heinemann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B19%3A+an+acetylcholine+receptor+with+novel+pharmacological+properties+expressed+in+rat+cochlear+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">α9: an acetylcholine receptor with novel pharmacological properties expressed in rat cochlear hair cells.</a> Cell. 79 (4), 705-715 (1994).</li>
<li>Masino, M. A., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fictive+swimming+motor+patterns+in+wild+type+and+mutant+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Fictive swimming motor patterns in wild type and mutant larval zebrafish.</a> Journal of Neurophysiology. 93 (6), 3177-3188 (2005).</li>
<li>Hentschke, H. abfload. 1.4.0.0. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHentschke%2C+H+%22MATLAB+Central+File+Exchange%22">MATLAB Central File Exchange</a>. , (2020).</li>
<li>Harris, G. G., Milne, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Input-output+characteristics+of+the+lateral-line+sense+organs+of+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+Acoustical+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Input-output characteristics of the lateral-line sense organs of Xenopus laevis.</a> The Journal of the Acoustical Society of America. 40 (1), 32-42 (1966).</li>
<li>Liao, J. C., Haehnel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+afferent+neurons+in+larval+zebrafish+provides+a+functional+framework+for+lateral+line+somatotopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Physiology of afferent neurons in larval zebrafish provides a functional framework for lateral line somatotopy.</a> Journal of Neurophysiology. 107 (10), 2615-2623 (2012).</li>
<li>Song, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+and+analyses+of+interspike-intervals+of+spontaneous+activity+in+afferent+neurons+of+the+zebrafish+lateral+line%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Science+Reports%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling and analyses of interspike-intervals of spontaneous activity in afferent neurons of the zebrafish lateral line.</a> Nature Science Reports. 8, 14851(2018).</li>
<li>Liao, J. C., Fetcho, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shared+versus+specialized+glycinergic+spinal+interneurons+in+axial+motor+circuits+of+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Shared versus specialized glycinergic spinal interneurons in axial motor circuits of larval zebrafish.</a> The Journal of Neuroscience. 28 (48), 12982-12992 (2008).</li>
<li>von Holst, E., Mittelstaedt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+principle+of+reafference%3A+interactions+between+the+central+nervous+system+and+the+peripheral+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Die+Naturwissenschften%22%5BJournal%5D)">The principle of reafference: interactions between the central nervous system and the peripheral organs.</a> Die Naturwissenschften. 37, 463(1950).</li>
<li>Crapse, T. B., Sommer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corollary+discharge+across+the+animal+kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Corollary discharge across the animal kingdom.</a> Nature Reviews. Neuroscience. 9 (8), 587-600 (2008).</li>
<li>Brichta, A. M., Goldberg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+to+efferent+activation+and+excitatory+response-intensity+relations+of+turtle+posterior-crista+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Responses to efferent activation and excitatory response-intensity relations of turtle posterior-crista afferents.</a> Journal of Neurophysiology. 83 (3), 1224-1242 (2000).</li>
</ol>

Los autores declaran que no hay intereses financieros contrapuestos.

El protocolo experimental descrito proporciona el potencial para monitorear los cambios endógenos en la entrada sensorial a través de los comportamientos motores en un vertebrado intacto y comportándose. Específicamente, detalla un enfoque in vivo para realizar grabaciones extracelulares simultáneas de neuronas aferentes de línea lateral y raíces motoras ventrales en larvas de pez cebra. La actividad aferente espontánea se ha caracterizado previamente en el pez cebra sin tener en cuenta la potencial actividad motora conc...

Las neuronas aferentes de los sistemas mechanosensoriales transmiten información de las células ciliadas al cerebro durante la audición y el equilibrio. La electrofisiología puede revelar la sensibilidad de las neuronas aferentes a través de grabaciones directas. Mientras que el parcheo de células enteras de las células ciliadas puede ser un desafío, el registro de las neuronas aferentes aguas abajo es más fácil y permite la evaluación de los potenciales de acción en respuesta a los estímulos controlados1,2,3. La estimulación de las células ciliadas conduce a su deflexión, lo que modifica las estructuras medenosensoriales, desencadenando así un aumento de los potenciales de acción (picos) en las neuronas aferentes4,5,6. En ausencia de estímulos externos, las neuronas aferentes también se disparan espontáneamente debido a la fuga de glutamato de las células ciliadas a los terminales post-sinápticos aferentes7,8,y se ha demostrado que contribuyen a mantener la sensibilidad9,10. El registro de la abrazadera de parches de la actividad aferente permite la observación de la sensibilidad de las células ciliadas y la dinámica de la señal que no son posibles utilizando técnicas con menor resolución temporal, como en microfonías11, 12 o imágenes funcionales de calcio13,14,15. El siguiente protocolo permitirá el registro de la actividad aferente concurrente con los comandos motores para revelar cambios instantáneos en la sensibilidad de las células ciliadas.
El pez cebra(Danio rerio)utiliza células ciliadas contenidas en neuromastos que componen el sistema de línea lateral para detectar el movimiento del agua en relación con su cuerpo, lo que se traduce en señales neuronales esenciales para la navegación16,17,18,evitación de depredadores, captura de presas19,20,y escolaridad21. El flujo de agua también puede ser autogenerado por los movimientos de natación22,23,24,respiración22,25,26,y alimentación27. Estos comportamientos comprenden movimientos repetitivos que pueden fatigar las células ciliadas y perjudicar la detección. Por lo tanto, es fundamental que el sistema de línea lateral diferencie entre estímulos de flujo externos (exaferentes) y autogenerados (reaferentes). Una descarga corolario atenúa las señales de flujo autogeneradas durante la locomoción en el pez cebra. Esta señal motora predictiva inhibitoria se retransmite a través de neuronas descendentes a los receptores sensoriales para modificar la entrada o interrumpir el procesamiento de la retroalimentación reaferente28,29. El trabajo seminal que contribuyó a nuestra comprensión temprana de este sistema feedforward se basó en preparaciones in vitro donde no se mantuvo la conectividad y la actividad endógena del circuito neuronal28,30,31,32,33,34,35. Este protocolo describe un acercamiento a preservar un circuito de los nervios intacto donde la dinámica endógena de la regeneración se mantiene así permitiendo una mejor comprensión de la descarga del corolario in vivo.
El protocolo descrito aquí describe cómo monitorear la actividad de la neurona aferente de la línea lateral posterior y la neurona motora simultáneamente en el pez cebra larval. La caracterización de la dinámica de señales aferentes antes, durante y después de los comandos motores proporciona información sobre la retroalimentación endógena en tiempo real del sistema nervioso central que modula la sensibilidad de las células ciliadas durante la locomoción. Este protocolo describe qué materiales deberán prepararse antes de los experimentos y luego describe cómo paralizar y preparar las larvas de pez cebra. El protocolo describirá cómo establecer un registro de parches sueltos estables de neuronas aferentes y grabaciones de raíz ventral extracelular (VR) de neuronas motoras. Los datos representativos que se pueden obtener utilizando este protocolo se presentan a partir de un individuo ejemplar y el análisis se realizó en múltiples réplicas del protocolo experimental. El preprocesamiento de datos se realiza utilizando scripts escritos personalizados en MATLAB. En general, este paradigma experimental in vivo está preparado para proporcionar una mejor comprensión de la retroalimentación sensorial durante la locomoción en un sistema modelo de células ciliadas de vertebrados.

<table><tbody><tr><td>Vaso de precipitados de 100 mL</td><td>PYREX</td><td>1000</td><td>receptáculo para grabador</td></tr><tr><td>10x objetivo de inmersión en agua</td><td>Olympus</td><td>UMPLFLN10xW</td><td>bajo aumento para el posicionamiento de larvas y el electrodo de registro</td></tr><tr><td>40x objetivo de inmersión en agua</td><td>Olympus</td><td>LUMPLFLN40XW</td><td>mayor aumento para la posición de la punta del electrodo y el establecimiento de la abrazadera de parche</td></tr><tr><td>abfload.m</td><td></td><td>archivo de codificación suplementario</td><td>script de MATLAB escrito a medida para convertir grabaciones de electrofisiología sin procesar en archivos .mat</td></tr><tr><td>AffVR_preprocess.m</td><td></td><td>Archivo de codificación suplementario</td> script <td>de MATLAB escrito a medida para el preprocesamiento de datos de grabación</td></tr><tr><td>Cables coaxiales BNC</td><td>ThorLabs</td><td>2249-C-12</td><td>conectando canales de amplificador y digitalizador; requiere 4</td></tr><tr><td>capilares de vidrio de borosilicato con filamento</td><td>Warner Instrumentos</td><td>G150F-3</td><td>diámetro interior: 0,86, diámetro exterior: 1,50; vidrio capilar utilizado para formar electrodos de grabación</td></tr><tr><td>burst_detect</td><td></td><td>archivo de codificación suplementario</td><td>Función de MATLAB escrita a medida necesaria para ejecutar AffVR_preprocess.m</td></tr><tr><td></td><td>ordenador N/A</td><td>N/A</td><td>cualquier ordenador debe funcionar</td></tr><tr><td>Fuente de alimentación de CC</td><td>Tenma</td><td>72-420</td><td>utilizada para el grabado eléctrico de clavijas de disección</td></tr><tr><td>digitalizador de electrofisiología</td><td>Axon Instruments, Molecular Devices</td><td>Axon DigiData 1440A</td><td>permite la adquisición de filamentos de datos patch-clamp</td></tr><tr><td></td><td>Sutter Instrument Company</td><td>FB255B</td><td>Filamento de caja de 2,5 mm utilizado en el extractor de micropipetas</td></tr><tr><td>Pinzas finas</td><td>Fine Science Tools</td><td>Dumont #5 (0,05 x 0,02 mm) N.º de artículo 11295-10</td><td>utilizado para manipular larvas e insertar clavijas</td></tr><tr><td>DIC de etapa fija microscopio</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td>microscopio utilizado para visualizar y establecer registros de patch-clamp punta de</td></tr><tr><td>pipeta flexible y cónica</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-169</td><td>puntas flexibles permiten la inserción en el electrodo de registro para dispensar solución extracelular en la punta</td></tr><tr><td>FluoroDish</td><td>World Precision Instruments Inc.</td><td>FD3510-100</td><td>cubierta de vidrio plato de grabación con fondo</td></tr><tr><td>KimWipe</td><td>KimTech</td><td>34155</td><td>toallita de trabajo utilizada para absorber el exceso de líquido de las larvas</td></tr><tr><td>Kwik-Gard</td><td>World Precision Instruments Inc.</td><td>710172</td><td>elastómero sylgard automezclable</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>R2020b</td><td>software de línea de comandos para datos de preprocesamiento</td></tr><tr><td>amplificador de microelectrodos</td><td>Axon Instruments, Molecular Devices</td> Amplificador de pinza de parche <td>MultiClamp 700B</td><td>para grabaciones de doble canal</td></tr><tr><td>microforge</td><td>Narishige</td><td>MF-830 microforge</td><td>para pulir el micromanipulador de electrodos de registro</td></tr><tr><td> unidad de control</td><td>Siskiyou</td><td>MC1000-eR/T</td><td>Coordinador de dial de 4 ejes para el control del micromanipulador</td></tr><tr><td>extractor de micropipetas</td><td>Sutter Instrument Company</td><td>Flaming/Brown P-97</td><td>para la extracción de vidrio capilar en electrodos de registro</td></tr><tr><td>unidad de control para microscopio</td><td>Siskiyou</td><td>MC1000e</td><td>posiciona el microscopio alrededor de la platina fija y la preparación</td></tr><tr><td>micromanipulador</td> <td>motorizadoSiskiyou</td><td>MX7600</td><td>coloca la cabecera y el electrodo de registro adjunto para la grabación de patch-clamp</td></tr><tr><td>MultiClamp</td><td>Commander Molecular Devices</td><td>2.2.2</td><td>descargable desde Axon MultiClamp 700B Commander página de descarga mesa de</td></tr><tr><td>aire óptico</td><td>Newport Corporation</td><td>Mesa de aislamiento de placa de pruebas VH3036W-OPT</td><td>para flotar en el microscopio y minimizar las vibraciones durante las grabaciones</td></tr><tr><td>pCLAMP</td><td>Molecular Devices</td><td>10.7.0</td><td>descargable desde Axon pCLAMP 10 Adquisición de datos de electrofisiología & Software de análisis Descargar página</td></tr><tr><td>marcador de tinta permanente Pedido</td> de <td>Sharpie</td><td>de amazon.com</td><td>para marcar el lado del borde delantero del electrodo VR para garantizar la orientación adecuada al insertarlo en el soporte de pipeta</td></tr><tr><td>placa de Petri</td><td>Falcon</td><td>35-3001</td><td>utilizado para sumergir larvas en</td></tr><tr><td>un soporte de pipeta</td> paralizante <td>Molecular Devices</td><td>1-HL-U</td><td>sujeta el electrodo de registro y conéctalo a la cabecera</td></tr><tr><td>transductor neumático</td><td>Fluke Biomedical Instruments</td><td>DPM1B</td><td>para el control de la presión interna del electrodo</td></tr><tr><td>de registro hidróxido</td><td>de potasio Sigma-Aldrich</td><td>221473-25G</td><td>grabador para grabado clavijas de disección</td></tr> tubo <tr><td>de silicona</td><td>Tygon</td><td>14-169-1A</td><td>tubo para conectar el transductor neumático al soporte de pipeta</td></tr><tr><td>spike_detect</td><td></td><td>archivo</td> <td>de codificación suplementarioFunción de MATLAB escrita a medida necesaria para ejecutar el</td></tr><tr><td>microscopio estereoscópico</td> AffVR_preprocess.m <td>Carl Zeiss</td><td>Stemi 2000-C</td><td>utilizado para visualizar las puntas de los alfileres y durante la preparación de las larvas hoja de</td></tr><tr><td>afeitar de borde recto</td><td>Canopus</td><td>pedido de amazon.com</td><td>corta el alambre de tungsteno mientras hace los pines de disección</td></tr><tr><td>swimbout_detect</td><td></td><td>archivo</td> <td>de codificación complementarioFunción de MATLAB escrita a medida necesaria para ejecutar AffVR_preprocess.m</td></tr><tr><td>jeringa</td><td>Becton Dickinson Compoany</td><td>309602</td><td>llena de solución extracelular para inyectar en electrodos de registro</td></tr><tr><td>pipeta de transferencia</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z135003-500EA</td> de <td>un solo uso, pipeta no estéril para transferir larvas</td></tr><tr><td>tricaína metanosulfonato</td><td>Syndel</td><td>12854</td><td>Anetésico farmacéutico utilizado para eutanasia de larvas con dosis altas.</td></tr><tr><td>alambre de tungsteno</td><td>World Precision Instruments Inc.</td><td>715500</td><td>0,002 pulgadas, 50,8 y mu; m de diámetro; utilizado para fabricar clavijas de disección</td></tr><tr><td>unidad de filtración al vacío</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SCGVU11RE</td><td>unidades de filtración al vacío de un solo uso, estériles utilizadas para esterilizar solución extracelular utilizada para electrofisiología anillo</td></tr><tr><td>de electrodo pinza de voltaje pinza de corriente headstage</td><td>Molecular Devices</td><td>CV-7B</td><td>suministrado con amplificador MultiClamp 700B utilizado como cabeceras izquierda y derecha</td></tr><tr><td>&alpha;-bungarotoxina</td><td>ThermoFisher</td><td>B1601</td><td>para inmovilizar las larvas antes del registro</td></tr></tbody></table>

actividad de las neuronas aferentes de la línea lateral posterior durante la natación en el pez cebra

Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish

Los sistemas sensoriales reúnen señales esenciales para dirigir el comportamiento, pero los animales deben descifrar qué información es biológicamente relevante. La locomoción genera señales reaferentes que los animales deben desentrañar de las señales sensoriales relevantes del entorno circundante. Por ejemplo, cuando un pez nada, el flujo generado a partir de ondulaciones corporales es detectado por los neuromastos mecanorreceptivos, que comprenden las células ciliadas, que componen el sistema de línea lateral. Las células ciliadas luego transmiten información de movimiento fluido desde el sensor al cerebro a través de las neuronas aferentes sensoriales. Simultáneamente, la descarga corolario del comando motor se transmite a las células ciliadas para prevenir la sobrecarga sensorial. Por lo tanto, tener en cuenta el efecto inhibitorio de las señales motoras predictivas durante la locomoción es fundamental a la hora de evaluar la sensibilidad del sistema de línea lateral. Hemos desarrollado un enfoque electrofisiológico in vivo para monitorear simultáneamente la neurona aferente de la línea lateral posterior y la actividad de la raíz motora ventral en larvas de pez cebra (4-7 días después de la fertilización) que pueden durar varias horas. Las grabaciones extracelulares de neuronas aferentes se logran utilizando la técnica de abrazadera de parches sueltos, que puede detectar la actividad de neuronas únicas o múltiples. Las grabaciones de la raíz ventral se realizan a través de la piel con electrodos de vidrio para detectar la actividad de la neurona motora. Nuestro protocolo experimental proporciona el potencial para monitorear los cambios endógenos o evocados en la entrada sensorial a través de los comportamientos motores en un vertebrado intacto y que se comporta.

Después de que las larvas de pez cebra se inmovilizan correctamente y se logra el ganglio aferente de la línea lateral posterior y el registro de VR, la actividad en las neuronas aferentes y motoras se puede medir simultáneamente. Los canales de grabación se muestran utilizando protocolos de grabación sin brechas (paso 1.4) para el monitoreo continuo de la actividad aferente y vr. En tiempo real, se pueden observar disminuciones en la tasa de picos aferentes espontáneos simultáneamente con la actividad de RV indicativa d...

Describimos un protocolo para supervisar cambios en la actividad aferente de la neurona durante comandos del motor en un sistema de la célula de pelo vertebrado modelo.

Actividad De Las Neuronas Aferentes De La Línea Lateral Posterior Durante La Natación En El Pez Cebra

Sensory systems gather cues essential for directing behavior, but animals must decipher what information is biologically relevant. Locomotion generates ...

Este protocolo permite al investigador monitorear la actividad y la respuesta de neuronas sensoriales individuales a una estimulación controlada en una vértebra que se comporta intacta. Esta electrofisiología de parche es una forma rápida y directa de registrar a partir de la actividad de spiking de neuronas individuales en tiempo real. Y eso proporciona una mejor resolución de tiempo y sensibilidad a un costo menor que la mayoría de las técnicas de imagen óptica.Las células ciliadas de la línea lateral son homólogas a las del oído interno humano. Así que esta técnica está preparada para revelar las propiedades de los circuitos de células ciliadas que se aplican a la sordera humana y los trastornos auditivos. La electrofisiología es un arte que utiliza habilidades motoras finas que necesita ser visto e imitado físicamente.Las instrucciones de solo texto dejan demasiado espacio para la interpretación errónea. Para comenzar, dispense una capa delgada de elastómero de silicona automezclado como Sylgard en un plato de cultivo de tejido con fondo de vidrio de cubierta para hacer un plato de grabación de fondo de elastómero de silicona. Para hacer pines de disección, proporcione una carga negativa de cinco voltios a un casto de 100 mililitros de grabador utilizando una fuente de alimentación de CC y conecte un cable de tungsteno a la salida con carga positiva.Sumerja repetidamente la punta del alambre en el baño de grabado hasta que la punta se estreche a un punto agudo. Bajo un microscopio estéreo, corte el cable aproximadamente un milímetro de la punta con una cuchilla de afeitar de borde recto. Repita esto tres veces y luego inserte pines en el plato de grabación curado con pinzas finas.Para preparar electrodos de grabación, tire de tubos capilares de vidrio de borosilicato utilizando un tirador de micropipeta con filamento de caja. El electrodo debe tener una punta de 30 micrómetros de diámetro con un cono que se utilizará para registrar las neuronas aferentes de la línea lateral posterior. Tire de un tubo capilar de vidrio de borosilicato adicional en un par de electrodos con diámetros de punta de uno a cinco micrómetros más pequeños.Sosteniendo un electrodo en cada mano, ejecute suavemente las puntas unas a otras para romper las puntas. Usando un microforge, pula la punta biselada hasta que esté suave. El diámetro final de la punta debe estar entre 30 y 50 micrómetros.Inmovilizar las larvas de pez cebra y transferirlas a una placa de Petri de 35 milímetros utilizando una punta grande para transferir pipeta. Retire la mayor cantidad posible de la solución circundante. Sumerja las larvas en 10 microlitros de 0,1% alfa-bungarotoxina durante aproximadamente cinco minutos.Lave la larva paralizada con solución extracelular durante 10 minutos. Luego, use una pipeta de transferencia para mover la larva desde el baño de solución extracelular hasta el plato de grabación con fondo de silicona. Bajo un microscopio estéreo, coloque suavemente las larvas con pinzas de punta fina por encima del centro de esta estera de silicona, lateralmente hacia arriba con los extremos anterior y posterior del cuerpo corriendo de izquierda a derecha.Usando pinzas de punta fina, inserte el pasador del borde ortogonalmente a la silicona a través de la notocorda dorsal de las larvas directamente dorsal al ano. Inserte el segundo pasador a través de la notocorda cerca del extremo de la cola e inserte el tercer pasador a través de la notocorda dorsal de la vejiga gaseosa. Inserte el cuarto pin a través de la vesícula ótica mientras proporciona una ligera rotación a medida que el pin se inserta en el encapsulante.A medida que se aplica una ligera rotación, observe el tejido entre el cleithrum y la vesícula ótica para revelar el grupo de somata aferente. Coloque la larva del perno debajo del objetivo de 10 veces en una etapa fija del microscopio DIC y oriente las hendiduras mioceptal de los bloques del músculo paralelos al vector izquierdo de la etapa principal. Coloque el cable de tierra en la solución de baño y asegúrese de que esté conectado a la etapa de la cabeza izquierda.Llene el electrodo de grabación VR con 30 microlitros de solución extracelular usando una punta de pipeta flexible de carga de gel e insértela en el soporte de la pipeta de la etapa de la cabeza izquierda. Aumente el aumento a 40 veces y baje la pipeta de grabación en la solución para platos mientras aplica la presión positiva producida por un transductor neumático. Lleve la punta del electrodo sobre un mioseptum entre los dos miómeros ventrales a la línea lateral hasta que la hendidura se centre en la abertura de la punta del electrodo VR Baje la pipeta hasta que el borde rezagado de la abertura de la punta entre en contacto suavemente con el epitelio.Después del contacto inicial, maniobje la pipeta en diagonal para asegurarse de que el borde de ataque hace contacto y puede generar un sello. Aplique presión negativa con el transductor neumático y suba agárralo. En el software de abrazadera de parche, haga clic en el botón Reproducir en la barra de herramientas para monitorear la señal de realidad virtual.Asegúrese de que la grabación de RV se está logrando una vez que se observe la actividad de la neurona motora con la dinámica de la señal de ráfaga estereotipada de Wells. Llene el electrodo de grabación aferente con 30 microlitros de solución extracelular e insértelo en el soporte de la pipeta de la etapa de la cabeza derecha. Luego bájelo en la solución del plato mientras aplica la presión positiva producida por un transductor neumático.Localice el electrodo y lleve la punta del electrodo sobre la muestra. Usando un micromanipulador, baje la punta del electrodo aferente hasta que se mantenga en posición por encima del cleithrum. Aumente el aumento a 40 veces la inmersión y localice la intersección del nervio de la línea lateral posterior y el cleithrum.Lleve la punta del electrodo sobre el ganglio aferente y baje la pipeta hasta que la punta entre en contacto con el epitelio. Suavemente, manipule el electrodo para que toda la circunferencia de la punta entre en contacto con el ganglio aferente. Aplique presión negativa con el transductor neumático y suba agárralo.Después de hacer clic en Reproducir en el software de abrazadera de parche, asegúrese de que la grabación de parches sueltos de toda la célula de las neuronas aferentes se logra cuando los picos ocurren espontáneamente aproximadamente cada 100 a 200 milisegundos. Una vez que se detecta la actividad aferente de la neurona y la neurona motora, haga clic en el botón Grabar en la barra de herramientas en la abrazadera máxima 10 para capturar grabaciones simultáneas libres de brechas en ambos canales. Realice el pre-proceso de los datos según lo descrito en el manuscrito del texto.Utilizando este protocolo de grabación sin brechas, la actividad en tiempo real de las neuronas aferentes y vr se puede medir simultáneamente. Los scripts escritos personalizados y de preprocesamiento generan gráficas para ayudar en la visualización de la detección de picos utilizando parámetros como el umbral, la duración mínima y el intervalo mínimo de interspike. Las señales aisladas se obtuvieron ajustando las variables de detección de límite inferior y límite superior en el script de preprocesamiento.La detección de espigas de raíces ventrales sigue parámetros idénticos con entradas adicionales. Las ráfagas dentro de un comando de motor se definen por un mínimo de dos picos dentro de 0,1 milisegundos que duran al menos cinco milisegundos y se delinean por un mínimo de tres ráfagas con intervalos de interburst de menos de 200 milisegundos Los scripts de preprocesamiento superponerán secciones de actividad aferente ingresadas en un período de interés bien definido. En este caso, la actividad espontánea media muestra cambios dramáticos en respuesta al inicio de la actividad motora representada en el eje X como tiempo igual a cero.Se detectaron diferencias significativas en las tasas de picos aferentes entre las tasas de picos antes de nadar y las tasas de picos de los períodos de natación y post-natación. Las tasas de picos aferentes se correlacionaron negativamente con la duración de la natación. No se ha detectado ninguna correlación entre la tasa de picos relativos y la frecuencia de natación.La salud animal es lo más importante cuando se intenta intentar este procedimiento. Es crucial monitorear el flujo sanguíneo rápido no solo para garantizar el bienestar animal, sino también para aumentar la probabilidad de éxito en el registro neuronal. Al aprovechar las herramientas genéticas disponibles en el pez cebra, este protocolo de electrofisiología puede complementarse con líneas transgénicas para investigar poderosamente la conectividad de circuitos anatómicos y funcionales en sistemas de células ciliadas y más allá.Esta modificación simplificada de la técnica de abrazadera de parche nos permite monitorear cómo funcionan los sistemas sensoriales in vivo.

activity-posterior-lateral-line-afferent-neurons-during-swimming

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Este video describe el ensayo de reotaxis en pez cebra. El método consiste en medir el comportamiento de orientación del pez cebra en respuesta a diferentes caudales de agua bajo la influencia de diferentes campos magnéticos.

Ensayo de reotaxis del pez cebra: un método para medir el comportamiento de orientación en respuesta a diferentes caudales de agua

Este video describe técnicas optogenéticas mediante la activación de neuronas somatosensoriales modificadas genéticamente y el registro de la respuesta conductual provocada con una cámara de video de alta velocidad.

Optogenética del pez cebra: activación de neuronas somatosensoriales modificadas genéticamente para estudiar las respuestas conductuales de las larvas

Este video muestra el registro de señales eléctricas de las neuronas aferentes en una larva de pez cebra paralizada colocando una micropipeta cerca del ganglio de la línea lateral y formando un sello suelto para la captura de señales. La solución extracelular mantiene la viabilidad neuronal durante este proceso.

Monitoreo de señales eléctricas de las neuronas aferentes en una larva de pez cebra inmovilizada

Debido a que muchos modelos de pez cebra de enfermedades neurológicas y no neurológicas se estudian en los peces adultos en lugar de el embrión / larvas, hemos desarrollado un ensayo cuantitativo regenerativa línea lateral que se puede aplicar a modelos de enfermedad de pez cebra adultos. El ensayo implicó resolución en el neuromast 1) y 2) los niveles de células cabello individual.

Un ensayo para la línea lateral de regeneración en adultos de pez cebra

peces cebra son un excelente modelo para estudiar la función muscular y las enfermedades. Durante la embriogénesis temprana, el pez cebra comienza a realizar contracciones musculares regulares produciendo un comportamiento rítmico de natación, que se altera cuando el músculo se interrumpe. Aquí describimos una respuesta evocada por el tacto y un ensayo de locomoción para examinar el rendimiento de la natación como una medida de la función muscular.

Usando respuesta evocada-Touch y la locomoción ensayos para evaluar el rendimiento muscular y la función en el pez cebra

Este manuscrito describe métodos para registros electrofisiológicos de neuronas espinales de embriones de pez cebra y larvas. La preparación mantiene las neuronas in situ y a menudo implica la disección mínimo. Estos métodos permiten para el estudio electrofisiológico de una variedad de neuronas de la médula, de la adquisición inicial de la excitabilidad eléctrica a través de las primeras etapas larvales.

El pez cebra<em&gt; In Situ</em&gt; Médula Espinal Preparación para Registros electrofisiológicos de Spinal Sensory y neuronas motoras

El pez cebra es un modelo de sistema que tiene muchas características valiosas, incluyendo claridad óptica, desarrollo externo rápido y, de especial importancia para el campo de la audición y el equilibrio, situado externamente células de pelo sensoriales. Este artículo describe cómo transgénico pez cebra puede utilizarse para análisis función presináptica y mechanosensation célula de pelo en su totalidad.

En proyección de imagen del calcio Vivo de las células de pelo de la línea Lateral en el pez cebra larvas

La ablación láser es una tecnología ampliamente aplicable para el estudio de la regeneración en sistemas biológicos. El protocolo presentado describe el uso de un microscopio confocal de escaneo láser estándar para la ablación láser y la posterior imagen de lapso de tiempo de las células interneuromas regeneradoras en la línea lateral del pez cebra.

Ensayo de regeneración y ablación láser basado en microscopio confocal en células interneuromas de peces cebra

Capaz de recuperarse funcionalmente después de una lesión de la médula espinal, el pez cebra adulto es un sistema modelo de primer nivel para dilucidar los mecanismos innatos de regeneración neuronal. Aquí, describimos la resistencia a la natación y los ensayos de comportamiento de natación como lecturas funcionales de la regeneración de la médula espinal.

Evaluación de la resistencia a la natación y el comportamiento de natación en peces cebra adultos

Aquí, presentamos un protocolo para realizar imágenes de calcio de dos fotones en el prosencéfalo dorsal de pez cebra adulto.

Imágenes de calcio de dos fotones de la actividad del prosencéfalo en peces cebra adultos que se comportan

La unión neuromuscular de las larvas de pez cebra es un modelo atractivo para el estudio de la fisiología sináptica. Es susceptible de muchas técnicas experimentales, como la electrofisiología y las imágenes ópticas. Aquí, describimos un protocolo para la transmisión sináptica de imágenes utilizando una sonda basada en pHluorin bajo un microscopio de epifluorescencia vertical.

Imágenes en vivo del reciclaje de vesículas sinápticas en la unión neuromuscular de larvas de pez cebra disecadas

Aprende electrofisiología de parche para registrar la actividad de neuronas aferentes en tiempo real usando larvas de pez cebra. Este método permite estudiar circuitos de células ciliadas relevantes para trastornos auditivos humanos.

Actividad De Las Neuronas Aferentes De La Línea Lateral Posterior Durante La Natación En El Pez Cebra

Explorar más videos