Name: Técnicas de manejo para reducir el estrés en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-25T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Aprende la técnica de manipulación 3D para reducir la ansiedad en ratones de laboratorio. Este método mejora el bienestar animal y facilita el manejo rutinario en investigación preclínica.

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Los autores agradecen al Comité de Cuidado Animal de CAMH por apoyar este trabajo, así como a los cuidadores de animales de CAMH que proporcionaron una amplia retroalimentación sobre la utilidad del procedimiento, motivando la ejecución de los experimentos descritos y la presentación del protocolo detallado para otros usuarios. Este trabajo fue financiado en parte por CAMH BreakThrough Challenge, otorgado a TP, y por fondos internos de CAMH.

<ol><li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Housing%2C+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nature Protocols. 1 (2), 936(2006).</li>
<li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mighty+Mouse%3A+the+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Missouri+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li>
<li>Martic-Kehl, M., Ametamey, S., Alf, M., Schubiger, P., Honer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+inherent+variability+and+experimental+parameters+on+the+reliability+of+small+animal+PET+data%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Research%22%5BJournal%5D)">Impact of inherent variability and experimental parameters on the reliability of small animal PET data.</a> EJNMMI Research. 2 (1), 26(2012).</li>
<li>Howard, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Variability%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Control of Variability.</a> ILAR Journal. 43 (4), 194-201 (2002).</li>
<li>Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+the+cage+environment+on+rodent+physiology+and+behavior%3A+Implications+for+reproducibility+of+pre-clinical+rodent+research%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of the cage environment on rodent physiology and behavior: Implications for reproducibility of pre-clinical rodent research.</a> Experimental Neurology. 270, 72-77 (2015).</li>
<li>Golini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Non-invasive+Digital+Biomarker+for+the+Detection+of+Rest+Disturbances+in+the+SOD1G93A+Mouse+Model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Non-invasive Digital Biomarker for the Detection of Rest Disturbances in the SOD1G93A Mouse Model of ALS.</a> Frontiers in Neuroscience. 14 (896), (2020).</li>
<li>Singh, S., Bermudez-Contreras, E., Nazari, M., Sutherland, R. J., Mohajerani, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+solution+for+rodent+home-cage+behaviour+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Low-cost solution for rodent home-cage behaviour monitoring.</a> PLoS One. 14 (8), 0220751(2019).</li>
<li>Stewart, K., Schroeder, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Rodent Handling and Restraint Techniques.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2021).</li>
<li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taming+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+practicality+of+using+non-aversive+handling+methods+to+reduce+background+stress+and+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Improving the practicality of using non-aversive handling methods to reduce background stress and anxiety in laboratory mice.</a> Scientific Reports. 9 (1), 20305(2019).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+reliability+of+mouse+performance+in+behavioural+testing%3A+the+major+role+of+non-aversive+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling.</a> Scientific Reports. 7, 44999(2017).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Wahlsten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+data+from+different+labs%3A+lessons+from+studies+of+gene-environment+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Different data from different labs: lessons from studies of gene-environment interaction.</a> Journal of Neurobiology. 54 (1), 283-311 (2003).</li>
<li>Nature Neuroscience. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Troublesome+variability+in+mouse+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Troublesome variability in mouse studies.</a> Nature Neuroscience. 12 (9), 1075(2009).</li>
<li>Sensini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+handling+technique+and+handling+frequency+on+laboratory+mouse+welfare+is+sex-specific%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17281(2020).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Exploration+Based+Cognitive+Bias+Test+for+Mice%3A+Effects+of+Handling+Method+and+Stereotypic+Behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour.</a> PLoS One. 10 (7), 0130718(2015).</li>
<li>Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Handling+Tutorial%5BTitle%5D)+AND+%22NC3Rs%22%5BJournal%5D)">Mouse Handling Tutorial.</a> NC3Rs. , (2016).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Mouse+Anxiety+during+Handling%3A+Effect+of+Experience+with+Handling+Tunnels%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels.</a> PLoS One. 8 (6), 66401(2013).</li>
<li>Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+obstacles+preventing+the+uptake+of+tunnel+handling+methods+for+laboratory+mice%3A+An+international+thematic+survey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey.</a> PLoS One. 15 (4), 0231454(2020).</li>
<li>Percie Du Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ARRIVE+guidelines+2.0%3A+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLOS Biology. 18 (7), 3000410(2020).</li>
<li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+simple%2C+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li>
<li>Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+behavioral+z-scoring+increases+the+sensitivity+and+reliability+of+behavioral+phenotyping+in+mice%3A+relevance+to+emotionality+and+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).</li>
<li>LaFollette, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Welfare+Meets+Human+Welfare%3A+A+Cross-Sectional+Study+of+Professional+Quality+of+Life%2C+Including+Compassion+Fatigue+in+Laboratory+Animal+Personnel%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li>
<li>Bailoo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Cage+Enrichment+on+Behavior%2C+Welfare+and+Outcome+Variability+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).</li>
<li>Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+welfare+of+laboratory+mice+in+their+home+environment+using+animal-based+measures+-+a+benchmarking+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool.</a> Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).</li>
<li>Theil, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+fighting+in+group-housed+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16649(2020).</li>
<li>Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+in+group-housed+laboratory+mice%3A+why+can%27t+we+solve+the+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem.</a> Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).</li>
<li>Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Playful+handling+as+social+enrichment+for+individually-+and+group-housed+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats.</a> Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).</li>
<li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((50-kHz+chirping+%28laughter%3F%29+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats%3A+effects+of+social+housing+and+genetic+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).</li>
</ol>

Los autores no tienen ningún conflicto de intereses que revelar.

Este estudio y desarrollo de métodos se basan en la observación de que las técnicas de manejo en ratones todavía son pasadas por alto por la comunidad científica, y que algunos laboratorios aún son reacios a implementar técnicas de habituación o manejo para reducir el estrés y la reactividad de sus animales antes de los experimentos. Si bien representa un compromiso de tiempo, el manejo de animales proporciona efectos beneficiosos para los animales que pueden contribuir al éxito de los experimentos a realizar y evita que...

Los ratones y las ratas son activos esenciales para los estudios preclínicos1,2 para múltiples propósitos, incluidos los estudios endocrinos, fisiológicos, farmacológicos o conductuales2. A partir del creciente número de estudios con animales, surgió que las variables ambientales no controladas, incluida la interacción humana, influyen en diversos resultados en la investigación biomédica3,4,5. Esto es responsable de la variabilidad significativa observada en los experimentos y laboratorios de investigación4,5, lo que plantea una advertencia importante en la investigación con animales.
Se han implementado varios enfoques con el objetivo de limitar el impacto de los factores estresantes ambientales y reducir la reactividad a la interacción humana. Por ejemplo, para limitar el impacto de los factores estresantes ambientales, la estandarización de las condiciones de la vivienda y los sistemas de viviendaautomatizados 6,7 se han implementado en todos los laboratorios. Con respecto a la interacción con los seres humanos, los enfoques comúnmente utilizados para el manejo y transporte de animales tenían poca consideración por la incomodidad y el estrés de los animales. Por ejemplo, recoger animales por la cola o usar pórceps8 aumenta la ansiedad basal9,10,11,reduce la exploración9,12 y contribuye en gran medida a la variabilidad interindividual dentro y entre los estudios13,14. Como resultado, se desarrollaron otros enfoques, como la técnica de manejo de copas, que es aplicable a ratones y ratas. En este enfoque, los animales son "ahuecarados" fuera de su jaula, y sostenidos por los experimentadores con sus manos formando una taza9,10,11. Otra alternativa útil al manejo de la cola implica el uso de un túnel de policarbonato para transferir ratones9,10,15. Este enfoque elimina la interacción directa entre el ratón y el experimentador. Tanto los enfoques de copa como de túnel mostraron eficacia en la reducción de comportamientos similares a la ansiedad y el miedo al experimentador que pueden ser exagerados por técnicas de manejo aversivo, como el recogimiento de cola / manejo de cola9,10.
Por lo tanto, la creciente evidencia demuestra la utilidad del manejo adecuado del ratón para reducir la variabilidad entre individuos9,11y mejorar el bienestar animal10. Sin embargo, las técnicas mencionadas anteriormente todavía se enfrentan a limitaciones. La técnica de manejo de copas se ha implementado con horarios que van desde 10 días (10 sesiones durante 2 semanas16)hasta 15 semanas17,que es una cantidad considerable de tiempo para el personal de las instalaciones y los experimentadores. Además, la efectividad del manejo de la copa varía según la cepa9 y el manejo convencional de la copa en manos abiertas puede conducir a ratones ingenuos o cepas particularmente saltarines para saltar de la mano9,18. El manejo del túnel da como resultado resultados más consistentes y generalmente más rápidos en el gentling19. Los túneles también se utilizan como enriquecimiento de jaulas domésticas. Ayudan a los animales a habituar a la manipulación rápida y proporcionan los beneficios adicionales del enriquecimiento. El manejo de túneles, sin embargo, tiene limitaciones al transferir animales entre aparatos. Curiosamente, Hurst y West9,y Henderson et al.20 demostraron que el uso de un manejo manual suave y breve para transferir animales del túnel al aparato no afecta su fenotipo.
Para proporcionar una alternativa a los métodos existentes, con habituación alcanzable en un corto período de tiempo, este artículo describe una técnica novedosa que amplía la técnica de manipulación de la copa, por lo tanto, no requiere ningún equipo en particular. Este enfoque utiliza hitos para medir el nivel de comodidad que tienen los ratones con el proceso de manipulación. Muestra eficacia para disminuir la reactividad y el estrés del ratón (a nivel conductual y hormonal), facilita el manejo rutinario y contribuye a reducir la variabilidad entre animales. Los detalles de esta técnica se proporcionan aquí, y su eficacia para reducir los comportamientos similares a la ansiedad, mejorar la interacción con los experimentadores y limitar la liberación periférica de la hormona del estrés (corticosterona) se demuestra en dos estudios separados (ratones machos y hembras), en comparación con el manejo del túnel (control positivo) y las técnicas de manejo de la cola (control negativo).

<table><tbody><tr><td>23 G x 1 pulg. Aguja hipodérmica estéril de uso general BD PrecisionGlide. Tipo de pared regular y bisel regular.</td><td>BD</td><td>2546-CABD305145</td><td>Agujas para la extracción de sangre</td></tr><tr><td>BD Vacutainer&reg; Extracción de sangre venosa Tubos de EDTA con lavanda BD Hemogard&trade; tapón, 2,0 ml (13x75 mm), 100/paquete</td><td>BD</td><td>367841</td><td>Tubos recubiertos de EDTA para la extracción de sangre</td></tr><tr><td>Bed' o mazorcas y frac14; &rdquo; Mazorca de maíz ropa de cama para animales</td><td>de laboratorio Bed-O-Cobs</td><td>BEDO1/4</td><td>Cama novedosa para la alimentación suprimida por novedad</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>Centrífuga 5424 R</td><td>Para la centrifugación de sangre.</td></tr><tr><td>Kit de corticosterona ELISA</td><td>Arbor Assays</td><td>K003-H1W</td><td></td></tr><tr><td>Cámara digital</td><td>Panasonic</td><td>HC-V770</td><td>Cámara para grabar las interacciones EPM/Experimentador</td></tr><tr><td>Laberinto Elevado Plus Hecho</td><td>en Casa</td><td>n/a</td><td>Laberinto personalizado hecho de cuatro brazos de plexiglás negro (dos brazos abiertos (29 cm de largo por 7 cm de ancho) y dos brazos cerrados (29 cm de largo x 7 cm de ancho con paredes de 16 cm de alto)) que forman una cruz con los dos brazos abiertos opuestos entre sí sostenido a 55 cm del suelo</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Medstore Marca</td><td>House 39753-P016-EA95</td><td>Diluir al 70% con agua destilada, para la limpieza</td></tr><tr><td>Ethovision XT 15</td><td>Noldus</td><td>n/a</td><td>Software automatizado de seguimiento de animales</td></tr><tr><td>Laboratorio Dieta de roedores</td><td>LabDiet LabDiet</td><td>Rodent Diet 5001</td> Tarjeta de memoria <td>estándar de dieta para roedores</td></tr><tr><td></td><td>Kingstone Technology</td><td>SDA3/64GB</td><td>Para grabación de vídeo y transferencia de archivos</td></tr><tr><td>Cámara de alimentación suprimida por novedad Hecho</td><td>en casa</td><td>n/a</td><td>Cámara de prueba de plexiglás personalizada con pisos y paredes transparentes de 62 cm de largo, por 31 cm de ancho por 40 cm de alto.</td></tr><tr><td>Tubos de parlycarbonato</td><td>casero</td><td>n/a</td><td>13 cm de largo y 5 cm de diámetro</td></tr><tr><td>Purina Yesterday' s noticias ropa de cama de periódico reciclado</td><td>Purina</td><td>n/a</td><td>Ropa de cama estándar</td></tr><tr><td>Espectrofotómetro</td><td>Biotek</td><td>Epoch Lector</td><td></td> de microplacas</tr></tbody></table>

técnicas de manejo para reducir el estrés en ratones

Handling Techniques to Reduce Stress in Mice

Los animales de laboratorio son sometidos a múltiples manipulaciones por parte de científicos o proveedores de cuidado de animales. El estrés que esto causa puede tener efectos profundos en el bienestar animal y también puede ser un factor de confusión para variables experimentales como las medidas de ansiedad. A lo largo de los años, se han desarrollado técnicas de manejo que minimizan el estrés relacionado con el manejo con un enfoque particular en las ratas y poca atención a los ratones. Sin embargo, se ha demostrado que los ratones pueden habituarse a manipulaciones utilizando técnicas de manipulación. Habituar a los ratones al manejo reduce el estrés, facilita el manejo de rutina, mejora el bienestar animal, disminuye la variabilidad de los datos y mejora la confiabilidad experimental. A pesar de los efectos beneficiosos del manejo, el enfoque de recogida de cola, que es particularmente estresante, todavía se usa ampliamente. Este documento proporciona una descripción detallada y una demostración de una técnica de manejo de ratones recientemente desarrollada destinada a minimizar el estrés experimentado por el animal durante la interacción humana. Esta técnica manual se realiza durante 3 días (técnica de manipulación 3D) y se centra en la capacidad del animal para habituar al experimentador. Este estudio también muestra el efecto de las técnicas de manipulación de túneles previamente establecidas (utilizando un túnel de policarbonato) y la técnica de recogida de cola. Específicamente se estudian sus efectos sobre comportamientos similares a la ansiedad, utilizando pruebas de comportamiento (Laberinto Elevado-Plus y Alimentación Suprimida por Novedad), interacción voluntaria con experimentadores y medición fisiológica (niveles de corticosterona). La técnica de manejo 3D y la técnica de manejo de túneles redujeron los fenotipos similares a la ansiedad. En el primer experimento, utilizando ratones machos de 6 meses de edad, la técnica de manejo 3D mejoró significativamente la interacción del experimentador. En el segundo experimento, utilizando una hembra de 2,5 meses de edad, redujo los niveles de corticosterona. Como tal, el manejo 3D es un enfoque útil en escenarios donde la interacción con el experimentador es requerida o preferida, o donde el manejo del túnel puede no ser posible durante el experimento.

Se realizaron dos estudios separados con ratones C57BL/6. Los #1 del estudio incluyeron hombres de 6 meses de edad y #2 de estudio incluyeron mujeres de 2,5 meses de edad (N = 36 / estudio) de Jackson Laboratories (Cat #000664). Los ratones llegaron a las instalaciones a la edad de 2 meses. Mientras que las mujeres #2 del Estudio fueron manipuladas y evaluadas dos semanas después de su llegada, el Estudio #1 los hombres solo fueron manipulados y probados a la edad de 6 meses (retraso debido al cierre de la pandemia mundi...

Este artículo describe una técnica de manejo en ratones, la técnica de manejo 3D, que facilita el manejo de rutina al reducir los comportamientos similares a la ansiedad y presenta detalles sobre dos técnicas relacionadas existentes (manejo de túnel y cola).

Técnicas de manejo para reducir el estrés en ratones

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects ...

Mi nombre es Dr.Thomas Prevot. Soy científico en el Centro de Adicciones y Salud Mental, o CAMH, y profesor asistente en la Universidad de Toronto en el Departamento de Psiquiatría. Mi grupo tiene un interés particular en reducir la ansiedad y la reactividad basales en ratones para reducir la variabilidad de los datos y mejorar el bienestar animal.Los ratones han demostrado ser activos invaluables en la ciencia básica y la investigación preclínica, sin embargo, muy pocos laboratorios en todo el mundo controlan la ansiedad de referencia y la reactividad de sus animales de laboratorio, por lo tanto, complican la replicabilidad de los datos entre laboratorios. Un factor importante que contribuye a la ansiedad de referencia son las variables ambientales no controladas, como las condiciones de la vivienda, el enriquecimiento ambiental y la exposición al estrés. Si bien la estandarización de las condiciones de alojamiento y el enriquecimiento ha ayudado a mejorar este problema, la exposición al estrés durante la interacción con los experimentadores aún no se aborda en gran medida en ratones.El manejo de la cola, el proceso de levantar el ratón por la cola, sigue siendo la técnica de manejo del ratón ampliamente utilizada, a pesar de ser particularmente estresante. Aunque han surgido alternativas al manejo de la cola, incluido el manejo de túneles y el manejo de copas. La adopción de estas técnicas ha sido lenta.Aquí describimos una técnica novedosa, similar al manejo de la copa, que se puede implementar con tan solo tres días de habituación, o manejo 3D. Al aumentar gradualmente el grado y la complejidad de la interacción y progresar en respuesta a la reactividad del ratón a ciertos hitos de manejo, podemos reducir el estrés y facilitar el manejo rutinario. Evaluamos la eficacia del manejo 3D en ratones en pruebas de comportamiento, evaluando comportamientos similares a la ansiedad, la interacción con experimentadores y la hormona del estrés periférica, corticosterona, los niveles, y proporcionamos una comparación con el manejo de túneles y las técnicas de manejo de colas.Abra suavemente la jaula y coloque la tapa a un lado. Introduzca su mano enguantada en la jaula de la casa antes de intentar recoger el ratón. Deje que el ratón se habitúe a la presencia de la mano durante unos 30 segundos.Luego intente levantar el mouse con las manos ahuecadas. Si el ratón no se puede recoger fácilmente, junte ambas manos y úselos para guiar al ratón a la esquina de la jaula. Luego use ambas manos para levantar el mouse.Una vez que el ratón se retira de la jaula, mantenga las manos lo más planas y abiertas posible. Permita que el ratón explore libremente. Esto proporciona una plataforma plana para que el ratón pise y limita el riesgo de morder.Sostenga la mano abierta y plana, con la palma hacia arriba. Coloque la otra mano junto al ratón y permita que el ratón se mueva libremente de una mano a otra, sin ninguna restricción. Después de un minuto de manejo con las manos planas, relaje la palma de su mano y coloque ligeramente el mouse en su cabeza, antes de rodar suavemente el mouse entre las manos.Continúe durante cuatro minutos, alternando entre el suave balanceo entre las manos y la exploración libre de sus manos abiertas. Durante los últimos dos minutos, realice una prueba de refugio. Deje que el ratón se mueva hasta el borde de su mano y junte las dos manos.Muy lentamente, tapa tus manos para que el ratón quepa dentro de un refugio formado por las manos. Asegúrese de dejar una abertura, para que el mouse pueda escapar si es necesario. Trate de mantener el ratón en el refugio durante cinco a 10 segundos sin ninguna restricción.Repita la prueba de refugio de tres a cuatro veces en los últimos dos minutos. No apresure el proceso. Si el ratón parece estresado por estar confinado dentro de la mano, continúe rodando entre manos y explorando libremente durante 30 segundos, y luego vuelva a intentar la prueba de refugio.Permita la exploración libre en las manos durante 30 segundos, luego reemplace suavemente el mouse en su jaula. Limpie la mesa de trabajo de las heces y la orina con etanol al 70% o una solución de limpieza adecuada. Limpie los guantes de heces y orina según sea necesario, y cuando cambie a una jaula nueva, enjuague los guantes con etanol al 70% o cámbiese los guantes.Para el segundo día, ya debería ser factible sacar al ratón de la jaula con las manos ahuecadas. Si el ratón parece reactivo, realice la mano plana y la exploración libre de las cabezas abiertas durante 30 segundos a un minuto. De lo contrario, proceda a la prueba de balanceo entre manos y refugio.Realice el papel entre las manos y los pasos del refugio desde el primer día durante dos o tres minutos. Realice cada paso varias veces. Si el ratón parece estar a gusto en la prueba de refugio, intente acariciar al ratón en la espalda y la cabeza.Si el ratón no intenta huir del contacto, proceda a pinchar la nariz. Toque suavemente el mouse en la punta del hocico. Si no muerde o intenta girar la cabeza, esta es una buena señal de habituación.Para la prueba de caricias y golpes en la nariz, no apresure el proceso. Si el ratón aparece estresado por estar confinado dentro de las manos, o no quiere ser tocado, continúe con el rodar entre las manos durante unos minutos y luego vuelva a intentarlo. Detenga esta sesión después de unos tres minutos de manipulación, si el animal reacciona bien al refugio, acaricia la cabeza y asoma la nariz.Y si el animal parece estar dispuesto a explorar sus manos sin ningún signo de estrés, como intentos de escapar, saltar de las manos o evitar el contacto con las manos. Si el ratón continúa mostrando signos de estrés o no está reaccionando bien a la prueba de refugio o a la prueba de golpe de nariz, continúe la sesión hasta que alcance los cinco minutos, como en el primer día. Reemplace el mouse en su jaula y limpie la mesa de trabajo y los guantes.En el tercer día, proceda a través de los mismos pasos que el segundo día. Levante el ratón en la palma de la mano. Transfiera el ratón entre las manos.Confina suavemente el ratón en manos ahuecadas. Si el ratón responde bien a estos pasos, intente acariciar al ratón e intente la prueba de pinchazo en la nariz. En el tercer día, el ratón debe estar lo suficientemente relajado como para sentarse en la palma de su mano sin moverse, y usted debe ser capaz de proceder a través de estos pasos durante aproximadamente dos o tres minutos.Reemplace el mouse en su jaula y limpie la mesa de trabajo y los guantes. Al tercer día. si el animal será restringido con fines experimentales, como sonda oral o inyección intra peritoneal, los ratones pueden ser sometidos a la prueba de pellizco en el cuello.Agarra el ratón por la nuca, entre el pulgar y el índice y levanta el ratón cinco centímetros por encima de la mano durante dos o tres segundos. Esta es normalmente una posición incómoda para los ratones adultos, y si los ratones permanecen casi inmóviles, están bien habituados a la manipulación y serán fáciles de sujetar para las inyecciones. Coloque el mouse de nuevo en su mano plana y permita que explore libremente durante un minuto.Los animales fueron probados por su disposición a interactuar voluntariamente con el experimentador y la facilidad de manejo en un contexto experimental. En el primer estudio, los ratones manejados por el manejo de tubos o el manejo 3D tenían menos probabilidades de huir cuando un experimentador intenta recoger un ratón. Además, un estudio de un ratón manejado utilizando la técnica 3D pasó más tiempo en el mismo cuadrante que la mano del experimentador, lo que indica una mayor disposición a interactuar con el experimentador.En el estudio dos, los ratones manejados por el manejo del tubo o el manejo 3D tenían menos probabilidades de huir cuando un experimentador intenta recoger al ratón en comparación con los ratones con mango de cola. Sin embargo, en el estudio dos, la técnica de manejo no influyó significativamente en el tiempo pasado en el mismo cuadrante que la mano del experimentador. El efecto del manejo en 3D y en túneles se comparó con el manejo de la cola en dos pruebas de comportamientos similares a la ansiedad, la prueba de alimentación suprimida de novedad y el laberinto elevado plus.En el primer estudio, en la prueba de alimentación suprimida por novedad, hubo una tendencia a reducir la ansiedad en ratones manejados por túnel y manipulados en 3D. En el laberinto elevado plus, no hubo un efecto general del manejo. Cuando se resumió como una puntuación Z, hubo una reducción significativa en la ansiedad general en ratones manejados en túnel y manejados en 3D en comparación con ratones manejados con cola.En el estudio dos, no hubo un efecto general del manejo de las medidas de ansiedad en la prueba de alimentación suprimida de novedad o el laberinto elevado plus. Cuando se resume como una puntuación Z, la técnica de manejo no tuvo un efecto general sobre la ansiedad. Como medida fisiológica del estrés, recolectamos suero de ratones manejados con cola, manejados en 3D y manipulados en túnel 15 minutos después de una breve sesión de manejo y probamos los niveles de corticosterona.No hubo un efecto general del manejo en el estudio uno. En el estudio dos, el manejo 3D redujo significativamente los niveles de corticosterona en comparación con el manejo de la cola. Basándonos en las observaciones de que las técnicas de manejo en ratones no son ampliamente reconocidas por la comunidad científica, describimos el uso de una nueva técnica de manejo.En ambos estudios presentados, el manejo en túnel y 3D redujo los intentos de los ratones de huir cuando eran recogidos, lo que podría facilitar el manejo de rutina. Además, en ratones machos mayores, esta técnica redujo los comportamientos similares a la ansiedad y aumentó la interacción con el experimentador. En hembras jóvenes.esta técnica disminuyó los niveles de corticosterona observados en respuesta a la manipulación. La implementación de esta técnica tiene el potencial de reducir la variabilidad de los datos, mejorar el bienestar animal y facilitar el manejo rutinario.

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Investigación

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Comportamiento

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