Técnicas de manejo para reducir el estrés en ratones

Mi nombre es Dr.Thomas Prevot. Soy científico en el Centro de Adicciones y Salud Mental, o CAMH, y profesor asistente en la Universidad de Toronto en el Departamento de Psiquiatría. Mi grupo tiene un interés particular en reducir la ansiedad y la reactividad basales en ratones para reducir la variabilidad de los datos y mejorar el bienestar animal.

Los ratones han demostrado ser activos invaluables en la ciencia básica y la investigación preclínica, sin embargo, muy pocos laboratorios en todo el mundo controlan la ansiedad de referencia y la reactividad de sus animales de laboratorio, por lo tanto, complican la replicabilidad de los datos entre laboratorios. Un factor importante que contribuye a la ansiedad de referencia son las variables ambientales no controladas, como las condiciones de la vivienda, el enriquecimiento ambiental y la exposición al estrés. Si bien la estandarización de las condiciones de alojamiento y el enriquecimiento ha ayudado a mejorar este problema, la exposición al estrés durante la interacción con los experimentadores aún no se aborda en gran medida en ratones.

El manejo de la cola, el proceso de levantar el ratón por la cola, sigue siendo la técnica de manejo del ratón ampliamente utilizada, a pesar de ser particularmente estresante. Aunque han surgido alternativas al manejo de la cola, incluido el manejo de túneles y el manejo de copas. La adopción de estas técnicas ha sido lenta.

Aquí describimos una técnica novedosa, similar al manejo de la copa, que se puede implementar con tan solo tres días de habituación, o manejo 3D. Al aumentar gradualmente el grado y la complejidad de la interacción y progresar en respuesta a la reactividad del ratón a ciertos hitos de manejo, podemos reducir el estrés y facilitar el manejo rutinario. Evaluamos la eficacia del manejo 3D en ratones en pruebas de comportamiento, evaluando comportamientos similares a la ansiedad, la interacción con experimentadores y la hormona del estrés periférica, corticosterona, los niveles, y proporcionamos una comparación con el manejo de túneles y las técnicas de manejo de colas.

Abra suavemente la jaula y coloque la tapa a un lado. Introduzca su mano enguantada en la jaula de la casa antes de intentar recoger el ratón. Deje que el ratón se habitúe a la presencia de la mano durante unos 30 segundos.

Luego intente levantar el mouse con las manos ahuecadas. Si el ratón no se puede recoger fácilmente, junte ambas manos y úselos para guiar al ratón a la esquina de la jaula. Luego use ambas manos para levantar el mouse.

Una vez que el ratón se retira de la jaula, mantenga las manos lo más planas y abiertas posible. Permita que el ratón explore libremente. Esto proporciona una plataforma plana para que el ratón pise y limita el riesgo de morder.

Sostenga la mano abierta y plana, con la palma hacia arriba. Coloque la otra mano junto al ratón y permita que el ratón se mueva libremente de una mano a otra, sin ninguna restricción. Después de un minuto de manejo con las manos planas, relaje la palma de su mano y coloque ligeramente el mouse en su cabeza, antes de rodar suavemente el mouse entre las manos.

Continúe durante cuatro minutos, alternando entre el suave balanceo entre las manos y la exploración libre de sus manos abiertas. Durante los últimos dos minutos, realice una prueba de refugio. Deje que el ratón se mueva hasta el borde de su mano y junte las dos manos.

Muy lentamente, tapa tus manos para que el ratón quepa dentro de un refugio formado por las manos. Asegúrese de dejar una abertura, para que el mouse pueda escapar si es necesario. Trate de mantener el ratón en el refugio durante cinco a 10 segundos sin ninguna restricción.

Repita la prueba de refugio de tres a cuatro veces en los últimos dos minutos. No apresure el proceso. Si el ratón parece estresado por estar confinado dentro de la mano, continúe rodando entre manos y explorando libremente durante 30 segundos, y luego vuelva a intentar la prueba de refugio.

Permita la exploración libre en las manos durante 30 segundos, luego reemplace suavemente el mouse en su jaula. Limpie la mesa de trabajo de las heces y la orina con etanol al 70% o una solución de limpieza adecuada. Limpie los guantes de heces y orina según sea necesario, y cuando cambie a una jaula nueva, enjuague los guantes con etanol al 70% o cámbiese los guantes.

Para el segundo día, ya debería ser factible sacar al ratón de la jaula con las manos ahuecadas. Si el ratón parece reactivo, realice la mano plana y la exploración libre de las cabezas abiertas durante 30 segundos a un minuto. De lo contrario, proceda a la prueba de balanceo entre manos y refugio.

Realice el papel entre las manos y los pasos del refugio desde el primer día durante dos o tres minutos. Realice cada paso varias veces. Si el ratón parece estar a gusto en la prueba de refugio, intente acariciar al ratón en la espalda y la cabeza.

Si el ratón no intenta huir del contacto, proceda a pinchar la nariz. Toque suavemente el mouse en la punta del hocico. Si no muerde o intenta girar la cabeza, esta es una buena señal de habituación.

Para la prueba de caricias y golpes en la nariz, no apresure el proceso. Si el ratón aparece estresado por estar confinado dentro de las manos, o no quiere ser tocado, continúe con el rodar entre las manos durante unos minutos y luego vuelva a intentarlo. Detenga esta sesión después de unos tres minutos de manipulación, si el animal reacciona bien al refugio, acaricia la cabeza y asoma la nariz.

Y si el animal parece estar dispuesto a explorar sus manos sin ningún signo de estrés, como intentos de escapar, saltar de las manos o evitar el contacto con las manos. Si el ratón continúa mostrando signos de estrés o no está reaccionando bien a la prueba de refugio o a la prueba de golpe de nariz, continúe la sesión hasta que alcance los cinco minutos, como en el primer día. Reemplace el mouse en su jaula y limpie la mesa de trabajo y los guantes.

En el tercer día, proceda a través de los mismos pasos que el segundo día. Levante el ratón en la palma de la mano. Transfiera el ratón entre las manos.

Confina suavemente el ratón en manos ahuecadas. Si el ratón responde bien a estos pasos, intente acariciar al ratón e intente la prueba de pinchazo en la nariz. En el tercer día, el ratón debe estar lo suficientemente relajado como para sentarse en la palma de su mano sin moverse, y usted debe ser capaz de proceder a través de estos pasos durante aproximadamente dos o tres minutos.

Reemplace el mouse en su jaula y limpie la mesa de trabajo y los guantes. Al tercer día. si el animal será restringido con fines experimentales, como sonda oral o inyección intra peritoneal, los ratones pueden ser sometidos a la prueba de pellizco en el cuello.

Agarra el ratón por la nuca, entre el pulgar y el índice y levanta el ratón cinco centímetros por encima de la mano durante dos o tres segundos. Esta es normalmente una posición incómoda para los ratones adultos, y si los ratones permanecen casi inmóviles, están bien habituados a la manipulación y serán fáciles de sujetar para las inyecciones. Coloque el mouse de nuevo en su mano plana y permita que explore libremente durante un minuto.

Los animales fueron probados por su disposición a interactuar voluntariamente con el experimentador y la facilidad de manejo en un contexto experimental. En el primer estudio, los ratones manejados por el manejo de tubos o el manejo 3D tenían menos probabilidades de huir cuando un experimentador intenta recoger un ratón. Además, un estudio de un ratón manejado utilizando la técnica 3D pasó más tiempo en el mismo cuadrante que la mano del experimentador, lo que indica una mayor disposición a interactuar con el experimentador.

En el estudio dos, los ratones manejados por el manejo del tubo o el manejo 3D tenían menos probabilidades de huir cuando un experimentador intenta recoger al ratón en comparación con los ratones con mango de cola. Sin embargo, en el estudio dos, la técnica de manejo no influyó significativamente en el tiempo pasado en el mismo cuadrante que la mano del experimentador. El efecto del manejo en 3D y en túneles se comparó con el manejo de la cola en dos pruebas de comportamientos similares a la ansiedad, la prueba de alimentación suprimida de novedad y el laberinto elevado plus.

En el primer estudio, en la prueba de alimentación suprimida por novedad, hubo una tendencia a reducir la ansiedad en ratones manejados por túnel y manipulados en 3D. En el laberinto elevado plus, no hubo un efecto general del manejo. Cuando se resumió como una puntuación Z, hubo una reducción significativa en la ansiedad general en ratones manejados en túnel y manejados en 3D en comparación con ratones manejados con cola.

En el estudio dos, no hubo un efecto general del manejo de las medidas de ansiedad en la prueba de alimentación suprimida de novedad o el laberinto elevado plus. Cuando se resume como una puntuación Z, la técnica de manejo no tuvo un efecto general sobre la ansiedad. Como medida fisiológica del estrés, recolectamos suero de ratones manejados con cola, manejados en 3D y manipulados en túnel 15 minutos después de una breve sesión de manejo y probamos los niveles de corticosterona.

No hubo un efecto general del manejo en el estudio uno. En el estudio dos, el manejo 3D redujo significativamente los niveles de corticosterona en comparación con el manejo de la cola. Basándonos en las observaciones de que las técnicas de manejo en ratones no son ampliamente reconocidas por la comunidad científica, describimos el uso de una nueva técnica de manejo.

En ambos estudios presentados, el manejo en túnel y 3D redujo los intentos de los ratones de huir cuando eran recogidos, lo que podría facilitar el manejo de rutina. Además, en ratones machos mayores, esta técnica redujo los comportamientos similares a la ansiedad y aumentó la interacción con el experimentador. En hembras jóvenes.

esta técnica disminuyó los niveles de corticosterona observados en respuesta a la manipulación. La implementación de esta técnica tiene el potencial de reducir la variabilidad de los datos, mejorar el bienestar animal y facilitar el manejo rutinario.