Infusión de la glándula parótida retrógrada a través del conducto de Stensen en un primate no humano para la entrega de genes vectores

Este protocolo es importante porque demuestra el procedimiento de infusión retrógrada de glándulas salivales en detalle. El procedimiento se puede utilizar por una variedad de razones médicas, como la inmunoprofilaxis vectorial o la terapia génica. Esta técnica es fácil de aprender y reproducir.

Los autores han logrado realizar este procedimiento con éxito en múltiples ocasiones a pesar de no ser cirujanos orales, ni tener tales antecedentes. Después de la anestesia, use pastillas dentales para la ampliación e identifique la papila parótida o la abertura del conducto de Stenson en la mejilla posterior adyacente al segundo molar superior. Dilate suavemente la papila parótida colocando el punto de un dilatador cónico en el centro o la abertura de la papila y gira el dilatador hacia adelante y hacia atrás durante aproximadamente 20 a 30 segundos.

A continuación, con pinzas sostenga el extremo marcado del tubo de polietileno unido a la jeringa que contiene infusato a aproximadamente 0,5 centímetros del extremo distal e inserte suavemente la punta del tubo en la papila dilatada. Avance suavemente el tubo mediante pequeños movimientos giratorios para ayudar a que los tubos se deslicen, seguido de un reajuste de las pinzas 0,5 centímetros proximal al agarre anterior. Repita este proceso hasta que la marca de dos centímetros llegue a la papila parótida.

A continuación, para sellar la papila parótida y reducir el derrame de la infusión en la cavidad oral, aplique un cianoacrilato en la mejilla alrededor de la papila y en el tubo insertado. Una vez que el cianoacrilato se seque, inyecte lentamente la infusión durante cinco minutos a una velocidad de 100 microlitros por minuto. Después de que se complete la infusión, deje el tubo en su lugar durante al menos cinco minutos, manteniendo así el conducto sellado y permitiendo que la infusión permanezca en la glándula parótida.

Finalmente, retire el tubo con una tracción suave y el cianoacrilato se liberará con el tubo. La fluoroscopia mediante una infusión de radioconta contraste demostró la ramificación de la solución a través del conducto de Stenson y hacia la glándula parótida. Inmuno como el análisis químico de la glándula parótida reveló una tinción positiva para EGFP en las células ductal y acinar, lo que indica una transducción y transcripción exitosas en ambos tipos de células.

El principal desafío en este procedimiento es probablemente introducir el tubo de polietileno en la papila, lo que debe hacerse muy suave y lentamente.