Utilizando la mejora de la fluorescencia inducida por proteínas resueltas en el tiempo para identificar conformaciones locales estables un monómero α-sinucleína a la vez

La mejora de la fluorescencia inducida por proteínas de una sola molécula puede complementar las mediciones de FRET de una sola molécula cuando se estudian subpoblaciones y conformaciones estructurales de proteínas, especialmente en los casos en que distintas subpoblaciones estructurales informan sobre estructuras locales estables. La principal ventaja de esta técnica es que captura distintas subtenuciones estructurales específicas del sitio en función de la proximidad del sitio de etiquetado del colorante a las superficies de la proteína. La mejora de la fluorescencia inducida por proteínas de una sola molécula se puede aplicar a cualquier sistema biomolecular de interés para sondear subpoblaciones estructurales distintas, locales.

Comience preparando 25 alfa-sinucleína picomolares marcadas con Sulfo-Cy3 en tampón de medición en un tubo de unión a proteínas bajas. Agregue 100 microlitros de un miligramo por mililitro BSA a la diapositiva de la cubierta de microscopía de 18 cámaras e incube durante un minuto, luego, deseche el BSA. Agregue 100 microlitros de 25 muestras picomolares de alfa-sinucleína etiquetadas con Sulfo-Cy3 en la cámara de la diapositiva de deslizamiento de la cubierta.