Funcionalización de vesículas extracelulares derivadas de plaquetas de implantes ti

La combinación de vesículas extracelulares con biomateriales es un enfoque deseable para los estudios de medicina regenerativa. Por lo tanto, este estudio informa de la funcionalización del titanio con EV como una herramienta práctica para la ortopedia y la regeneración ósea. La funcionalización de la fundición por gota es un método fácil y de bajo costo en comparación con otras estrategias como el atrapamiento polimérico o la unión bioquímica.

Comience la funcionalización de la superficie de titanio lavando los discos de titanio con agua desionizada en un vaso de precipitados de vidrio. Luego deseche el agua antes de lavar los discos con etanol al 70%. Decantar la solución para sonicar los implantes lavados a 50 C durante cinco minutos en agua desionizada.

Después de desechar el agua, incube los implantes de titanio en una solución de hidróxido de sodio al 40% a 50 C durante 10 minutos con agitación y luego sonice los implantes en agua desionizada como se ha demostrado. A continuación, realice al menos cinco lavados de los implantes con agua desionizada. Hasta que el pH sea neutro en el indicador de pH.

Repita el proceso de sonicación e incubación, como se explicó anteriormente, reemplazando el hidróxido de sodio con ácido nítrico al 50%. Realice los lavados y la sonicación con agua desionizada antes de almacenar los implantes en una solución de etanol al 70%. Incubar los implantes de titanio en una solución de ácido nítrico al 30% durante 30 minutos a temperatura ambiente con una agitación suave.

Después de la incubación, realice al menos cinco lavados con agua desionizada hasta que el pH sea neutro en los indicadores de pH. Luego incubar implantes de titanio durante la noche a temperatura ambiente en agua desionizada. Al día siguiente, seque los implantes al vacío a 40 C durante 10 minutos.

Trabajando debajo del gabinete de cultivo celular, coloque los implantes de titanio en una placa de 96 pocillos con el lado de la máquina hacia arriba. Organice la fundición de vesículas extracelulares de EV mediante la descongelación de la solución de EV y la solución de vórtice a un pulso de tres segundos. Después de la mezcla, deposite 40 microlitros de la solución de EV en la superficie de titanio para inmovilizar un máximo de 4 x 10^ 11 EV por implante, de acuerdo con la concentración determinada por el análisis de seguimiento de nanopartículas.

A continuación, coloque las placas en condiciones de vacío a 37 C durante aproximadamente dos horas o hasta que las gotas estén completamente secas. Ajuste el tiempo de secado en función del número de implantes de titanio y el agua presente en la cámara de vacío. La cantidad de vehículos eléctricos liberados de los discos de titanio se midió mediante el análisis de seguimiento de nanopartículas.

El día 2, se lanzaron alrededor de 10^9 EV, seguidos de un lanzamiento sostenido en los días 6, 10 y 14. La biocompatibilidad celular in vitro de los EV de titanio se evaluó con lactato deshidrogenasa, o ensayo de liberación de LDH, a las 48 horas después de la siembra celular en los implantes. Los EV de titanio exhibieron una cantidad menor de LDH que el valor citotóxico máximo aceptado.

Mientras que, el grupo de control de titanio, mostró niveles de actividad de LDH más altos. El paso más importante es el secado al vacío del implante recubierto. Es importante asegurarse de que toda el agua se evapore para obtener una fisisorción óptima.