26 de octubre de 2021
Este trabajo describe un protocolo estándar para pruebas sensoriales cuantitativas mecánicas y térmicas calientes para evaluar el sistema somatosensorial en perros. Los umbrales sensoriales se miden utilizando un anestesiómetro electrónico de von Frey, un algodímetro de presión y un termodo de contacto caliente.
Este protocolo para evaluar los umbrales sensoriales en perros mediante pruebas sensoriales cuantitativas o QST ayudará a estandarizar los estudios, lo que permitirá comparaciones valiosas entre diferentes estudios. Esta técnica proporciona un método no invasivo para medir los umbrales sensoriales en los perros. Nuestro protocolo ayuda a guiar a los investigadores sobre las mejores prácticas para obtener datos precisos y coherentes.
Este protocolo puede proporcionar información sobre los mecanismos de la sensación de dolor en los perros, incluso después de cirugías y para enfermedades asociadas con estados de dolor crónico. El aspecto más importante de esta técnica es ser consciente del comportamiento canino. Para garantizar pruebas seguras y precisas, todos los involucrados deben tener en cuenta el comportamiento y los niveles de ansiedad del perro.
Comience por organizar la configuración del instrumento aplicando suavemente una punta rígida de Von Frey de 0,9 milímetros a la célula de carga, asegurándose de que la célula de carga esté firmemente atornillada en la pieza de mano. A continuación, conecte el cable de la pieza de mano al dispositivo de grabación a través del canal M0. A continuación, encienda el dispositivo de grabación y presione el botón max para registrar y mostrar la fuerza máxima lograda cuando el perro responde al estímulo aplicado.
Ponga a cero el instrumento pulsando el botón CLR. Para recopilar los datos y medir los umbrales, indíquele al perro que se acueste y luego ayúdelo a llegar a la posición de decúbito lateral. Aplique una restricción de mínima a moderada para mantener al perro en la posición y relativamente quieto.
Proporcione un apoyo manual suave a la extremidad del perro que se está examinando para mantener la extremidad alejada del suelo y proporcionar un respaldo estable contra el que aplicar fuerza sin evitar que el perro retire la extremidad. Una vez que el perro esté tranquilo y relajado, con la extremidad probada al 70% de extensión, aplique el estímulo una vez. Coloque la punta de Von Frey perpendicular a la piel del área que se está examinando.
Si el perro muestra movimientos reflejos por la sensación de la punta de Von Frey en la piel, permita que el perro relaje la extremidad nuevamente antes de volver a aplicar la punta de Von Frey. Cuando la piel no provoque movimientos reflejos, tome una medida aplicando la punta de Von Frey. Aplique una fuerza cada vez mayor con la punta de Von Frey a 20 gramos por segundo hasta que el perro retire la extremidad y vocalice.
Se gira para mirar el estímulo, o exhibe otros movimientos o respuestas conductuales que indican la percepción consciente del estímulo. Retire el estímulo cuando el perro retire la extremidad o se alcance la fuerza máxima y registre la fuerza máxima aplicada que se muestra en el dispositivo de grabación. Repita las mediciones durante cinco intentos, dejando un minuto entre cada medición con el perro en decúbito lateral si permanece relativamente tranquilo y relajado sin restricción o con una restricción mínima.
Ponga a cero el instrumento entre cada paso pulsando el botón CLR. A continuación, registre una puntuación de viabilidad de cero a cinco para indicar la facilidad de la recopilación de datos. Dé al perro un descanso de cinco minutos antes de comenzar las mediciones con el algometro de presión con sonda roma.
Mientras configura el instrumento, asegúrese de que la pequeña sonda roma esté bien atornillada en el dispositivo. Luego encienda el dispositivo de grabación y presione el botón max para continuar cuando se le solicite en la pantalla. Presione el botón de la unidad hasta que la unidad se muestre en gramos en la parte superior de la pantalla y presione el botón cero para poner a cero el instrumento.
A continuación, coloque y prepare al perro en decúbito lateral para medir los umbrales como se mencionó anteriormente. Aplique la sonda roma perpendicular a la piel del área que se está examinando para aplicar una fuerza cada vez mayor con la sonda a 20 gramos por segundo hasta que el perro muestre respuestas conductuales que indiquen la percepción consciente del estímulo. Retirar el estímulo cuando el perro retire la extremidad o se alcance la fuerza máxima.
Después de registrar la fuerza máxima aplicada desde el dispositivo de registro, repita las mediciones durante un total de cinco intentos. Permita que el perro permanezca en decúbito lateral para sentarse, pararse o moverse por la sala QST para mantener la comodidad durante el intervalo entre ensayos. A continuación, vuelva a colocar al perro en decúbito lateral antes de la medición posterior.
Registre una puntuación de viabilidad de cero a cinco para indicar la facilidad con la que se recopilaron los datos. Dé al perro un descanso de cinco minutos antes de comenzar las mediciones con la sonda térmica caliente. Antes de comenzar el experimento, prepare al perro como se explicó anteriormente.
A continuación, aplique el termodo sobre la piel de la zona que se está probando y haga clic en el botón de inicio en la esquina inferior izquierda de la pestaña de prueba para iniciar la prueba. Cuando el perro exhiba movimientos o respuestas conductuales que indiquen la percepción consciente del estímulo o cuando se alcance la latencia máxima, retire el termodo mientras detiene simultáneamente el cronómetro. Registre la latencia que se va a retirar.
Repita las mediciones durante un total de cinco ensayos haciendo clic primero en el botón de parada y luego haciendo clic en el botón de prueba previa entre cada medición para detener el calentamiento del termodo. Esto permitirá que el software recalibre el termodo para prepararse para la próxima aplicación. Registre una puntuación de viabilidad de cero a cinco para indicar la facilidad con la que se recopilaron los datos.
El análisis representativo resume los datos de QST mecánicos y térmicos calientes de un grupo de perros sanos e indoloros. Los datos de las mediciones del umbral sensorial del estesiómetro electrónico de Von Frey no mostraron ningún efecto significativo del peso corporal en los umbrales sensoriales. Un impacto similar de los pesos corporales se observó en los datos de los umbrales sensoriales del algometro de presión con sondeo contundente.
Por otro lado, los datos recopilados para la latencia sensorial de la sonda térmica caliente mostraron un efecto significativo del peso corporal en la latencia sensorial. El promedio general, la desviación estándar y el rango de umbrales sensoriales para el QST mecánico y térmico caliente se resumieron en el mismo grupo de perros sanos y sin dolor. Esto proporciona valores de referencia para futuros investigadores que utilicen estas técnicas: Lo más importante es identificar de forma fiable la respuesta conductual del perro que indica la percepción consciente del estímulo, que puede parecer diferente para diferentes perros.
Además de las pruebas sensoriales cuantitativas, la recopilación de información conductual a través de cuestionarios validados para propietarios y pruebas de reactividad emocional puede ayudar a proporcionar una evaluación completa del estado afectivo del perro.
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Este estudio presenta un protocolo estándar para pruebas sensoriales cuantitativas (QST) en perros, con el fin de evaluar el sistema somatosensorial mediante métodos mecánicos y térmicos calientes. Al utilizar herramientas como el algesiómetro electrónico de von Frey y el algesiómetro de presión, el protocolo busca estandarizar las evaluaciones, permitiendo comparaciones entre diversos estudios.
La prueba sensorial cuantitativa (QST) en perros proporciona un enfoque estandarizado y no invasivo para evaluar la función somatosensorial, apoyando la investigación traslacional del dolor y el desarrollo de modelos comparativos. El establecimiento de umbrales sensoriales de referencia y puntos finales conductuales permite una evaluación preclínica más predictiva de candidatos analgésicos y una reducción del riesgo mecanicista en los flujos de trabajo de neurociencia veterinaria y comparativa. Los protocolos estandarizados de QST facilitan la comparabilidad de datos entre estudios y sitios, fortaleciendo la toma de decisiones en carteras durante las fases iniciales del descubrimiento y la investigación traslacional.
QST se integra en el continuo de descubrimiento a preclínico como una lectura funcional para la validación de dianas, la optimización de compuestos líderes y el desarrollo de biomarcadores traslacionales en las líneas de investigación sobre dolor y trastornos sensoriales.