Reconstitution of Msp1 Extraction Activity with Fully Purified Components

Heidi L. Fresenius; Matthew L. Wohlever

doi:10.3791/62928

Reconstitución de la actividad de extracción de Msp1 con componentes totalmente purificados

JoVE Journal
Biochemistry

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Reconstitution of Msp1 Extraction Activity with Fully Purified Components

Reconstitución de la actividad de extracción de Msp1 con componentes totalmente purificados

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05:52 min

August 10, 2021

DOI: 10.3791/62928-v

Heidi L. Fresenius¹, Matthew L. Wohlever¹

¹Department of Chemistry & Biochemistry,University of Toledo

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Aquí, presentamos un protocolo detallado para la reconstitución de la actividad de extracción de Msp1 con componentes totalmente purificados en proteoliposomas definidos.

El uso de AAA-ATPasas para eliminar proteínas de una bicapa lipídica es un tema común en el control de calidad de proteínas. Una comprensión mecanicista de este proceso esencial requiere un sistema reconstituido. La reconstitución previa con AAA-ATPasas fue compleja y heterogénea.

Nuestro sistema es simple y está completamente definido. Esto nos permite manipular la AAA-ATPasa Msp1, el sustrato y el entorno lipídico. Para comenzar, agregue el tampón de reconstitución previamente preparado, las proteínas Msp1 y TA purificadas y los liposomas en un tubo de PCR, luego incube la mezcla en hielo durante 10 minutos.

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