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Uso de la pantalla de fagos para desarrollar moduladores de variantes de ubiquitina para ligasas E3
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JoVE Journal Biochemistry
Using Phage Display to Develop Ubiquitin Variant Modulators for E3 Ligases

Uso de la pantalla de fagos para desarrollar moduladores de variantes de ubiquitina para ligasas E3

Full Text
3,625 Views
06:30 min
August 27, 2021

DOI: 10.3791/62950-v

Olivia Roscow1, Wei Zhang1

1Department of Molecular and Cellular Biology, College of Biological Science,University of Guelph

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

La ubiquitinación es una proteína crítica de modificación post-traduccional, cuya desregulación se ha implicado en numerosas enfermedades humanas. Este protocolo detalla cómo se puede utilizar la visualización de fagos para aislar nuevas variantes de ubiquitina que pueden unirse y modular la actividad de las ligasas E3 que controlan la especificidad, la eficiencia y los patrones de ubiquitinación.

La visualización de fagos no solo nos ayuda a investigar las características de unión de enzimas clínicamente importantes, sino que también desarrolla moduladores para esas enzimas y las enfermedades correspondientes. La pantalla de fagos se puede utilizar para desarrollar nuevos aglutinantes para una amplia gama de proteínas objetivo y también es más fácil de realizar que otros métodos de visualización convencionales. Este procedimiento implicó una gran cantidad de acciones repetitivas, por lo que la clave es no piloto automático y permanecer enfocado en todo momento.

Comience inoculando 30 mililitros de caldo de tetraciclina 2YT con 200 microlitros del cultivo de semillas. Incubarlo durante aproximadamente tres horas a 37 grados centígrados con agitación orbital de 200 RPM hasta que las bacterias estén en la fase de registro medio. Deseche la solución de recubrimiento de la placa en un fregadero.

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