Un ensayo celular basado en reporteros para monitorear la eficiencia del empalme

Este protocolo describe un ensayo celular para monitorear la eficiencia de empalme, utilizando un informador de administración adaptable. Este ensayo reportero se puede utilizar para estudiar los efectos de las mutaciones asociadas a la enfermedad en los sitios Exxon o de empalme, y para diseñar terapia, particularmente una partícula, para mejorar el reconocimiento de los sitios de empalme mutantes a cinco puntos. El paso en las células Hela aspira el medio gastado e incuba las células con tres mililitros de 0,2 5%viajes en la que contienen un milimolar EDTA, a 37 grados centígrados durante tres minutos.

Después de la incubación a siete mililitros de DMEM fresco y transferir la suspensión celular a un tubo de 10 mililitros. Centrifugar las células. Luego resuspenda el pellet celular en 10 mililitros de DMEM fresco y coloque las células en una nueva placa de cultivo de tejidos al 20% de confluencia, para transfección transitoria.