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DOI: 10.3791/63118-v
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This protocol outlines the preparation of cell membrane affinity chromatography (CMAC) columns with functional transmembrane receptors. These columns facilitate the identification of small molecules in complex extracts that interact with immobilized receptors.
El protocolo describe la preparación de columnas de cromatografía de afinidad de membrana celular (CMAC) con fragmentos de membrana celular inmovilizados que contienen proteínas funcionales del receptor B de tropomiosina quinasa transmembrana. También se explica el uso de columnas de CMAC en la identificación de metabolitos vegetales especializados que interactúan con estos receptores y están presentes en mezclas naturales complejas.
Esta vertical presenta pasos importantes en el montaje de columnas de cromatografía de afinidad de membrana celular con receptores transmembrana funcionales. Estas columnas se pueden utilizar para la identificación de pequeñas moléculas presentes en extractos complejos e interactuando con receptores transmembrana inmovilizados. Las columnas de cromatografía de afinidad de membrana celular aceleran la identificación de compuestos biológicamente activos presentes en mezclas complejas.
El uso de columnas de cromatografía de afinidad de membrana celular puede ser de particular interés para aquellos interesados en la identificación de compuestos farmacológicamente activos presentes en matrices naturales complejas, como extractos de plantas, hongos o bacterias. Para comenzar, prepare una solución madre de benzamidina de 200 milimolares disolviendo 120 de benzamidina en cinco mililitros de agua desionizada ultrapura. Prepare una solución madre de PMSF de 10 milimolares disolviendo 0.017 gramos de PMSF en 10 mililitros de etanol en una campana de humos.
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