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DOI: 10.3791/63177-v
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El desarrollo temprano depende de los productos heredados por la madre, y el papel de muchos de estos productos es actualmente desconocido. En este documento, describimos un protocolo que utiliza CRISPR-Cas9 para identificar fenotipos de efecto materno en una sola generación.
El papel de muchos genes expresados por la madre durante el desarrollo temprano es actualmente desconocido. Esta técnica CRISPR materna permite la rápida identificación de genes de efecto materno y su papel en el desarrollo. La multiplexación guía los ARN a un solo gen, permite a los investigadores identificar nuevos fenotipos de efecto materno en una sola generación.
Esta investigación es beneficiosa para comprender la función de las transcripciones de ARNm en los gametos, que son necesarias para la embriogénesis temprana. La clave de esta técnica es microinyectar los embriones al principio de la etapa de una célula, y verificar si la mayoría de los ARN guía pueden producir mutaciones somáticas en los embriones inyectados. Para crear una plantilla de ARN guía para cada oligonucleótido específico del gen, analice el oligonucleótido constante y rellene los voladizos con ADN polimerasa T4.
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