Mantenimiento de cultivos de laboratorio de Gryllus bimaculatus, un modelo versátil de ortópteros para la agricultura de insectos y la fisiología de invertebrados

Estas técnicas representan métodos prácticos y probados para la cría de Gryllus bimaculatus, una mini especie ganadera clave cultivada para la alimentación animal y la alimentación humana y un organismo modelo alternativo cada vez más importante. Estos métodos de laboratorio para el cultivo de Gryllus bimaculatus se derivan de técnicas comunes en toda la industria agrícola de grillos de América del Norte y representan un facsímil a escala de laboratorio de las operaciones de cultivo de grillos. Para comenzar, tara un recipiente limpio en una balanza y pesa una masa de fibra de coco seca aproximadamente del tamaño de un puño humano.

Luego, coloque la fibra de coco en un recipiente limpio y sellable, que pueda acomodar la expansión hasta seis veces el volumen original. Con las manos limpias, rompa suavemente los grupos de fibra de coco de la pieza extraída del bloque más grande. A continuación, utilizando un cilindro graduado de 250 mililitros, mida el volumen correcto de agua desionizada para lograr una proporción de cinco a uno por masa de cinco partes de agua por una parte de fibra de coco seca, y agregue el agua desionizada medida lentamente, hidratando uniformemente todas las partículas de fibra de coco.

Después, macera manualmente los grumos para garantizar una hidratación uniforme y vuelva a tarar el recipiente en el que se pesó previamente la fibra de coco. Pesa 75 gramos de fibra de coco mojada y transfiérela a una placa de Petri de 100 milímetros por 15 milímetros con una cuchara de plástico limpia para asegurarte de que la fibra de coco se extienda uniformemente por el fondo del plato y que no haya grumos. Luego, etiquete el lado de la placa de Petri con cinta de laboratorio con una etiqueta que indique la colonia natal y la fecha del evento de recolección de huevos.

Mida 45 mililitros adicionales de agua desionizada en un cilindro graduado y agregue agua uniformemente sobre la superficie de la fibra de coco envasada en la placa de Petri para garantizar una hidratación uniforme. Una vez que la placa de Petri haya sido empacada, selle la fibra de coco mojada restante en un recipiente hermético para su almacenamiento a menos 20 grados centígrados. Coloque el sustrato de oviposición hidratada en jaulas que contengan las existencias parentales deseadas de grillos lo más lejos posible del alimento, y documente la fecha y la hora.

Luego, coloque un pequeño receptáculo de basura en autoclave en la superficie de trabajo. A continuación, coloque una jaula de plástico limpia y vacía de 29.3 litros en el banco junto al recipiente de basura. Coloque otra jaula de 29.3 litros que contenga las existencias de grillo padre y el sustrato de oviposición en el lado opuesto del recipiente de basura de la jaula vacía.

Después de 24 horas, retire el sustrato de oviposición de la jaula de grillo madre y ubíquelo sobre el recipiente de desechos en autoclave. Inspeccione la parte superior del sustrato de oviposición en busca de partículas de frass o alimento que los grillos puedan haber pateado sobre la superficie de la fibra de coco. A continuación, retire los contaminantes de la fibra de coco en el recipiente de desechos con una cucharada limpia o una cuchara de plástico, y coloque la cuchara de plástico en el recipiente de desechos.

Luego, coloque el sustrato de oviposición limpia en la jaula limpia de 29.3 litros. Después, coloque la jaula en una incubadora a 27 grados Celsius al 60% de humedad relativa en un fotoperíodo de luz oscuro de 12 horas y 12 horas. Devuelva la jaula que contiene el ganado reproductor a la ubicación original y limpie todos los elementos de la superficie de trabajo.

Luego, coloque el recipiente de desechos en un congelador en la instalación dedicado al almacenamiento de artículos potencialmente contaminados con huevos de grillo. A continuación, desinfecte la superficie de trabajo con una solución de lejía al 10% y déjela reposar durante 60 segundos. Seque la superficie de trabajo con una toalla de papel limpia.

Después de abrir el congelador, deseche la toalla de papel en el recipiente de residuos. Seleccione dos planos de cartón de huevos comerciales de 30,8 centímetros por 30,8 centímetros no utilizados. Y con un cuchillo utilitario o tijeras fuertes, córtelas en seis tiras separadas de 10.1 centímetros de ancho de igual tamaño.

Luego, cepille los bordes cortados con las manos para eliminar las partículas colgantes de cartón. A continuación, coloque las seis piezas individuales de cartón de 10,1 centímetros por 30,8 centímetros verticalmente en la parte inferior de la jaula, con el eje más largo del cartón que abarca el eje horizontal más estrecho de una jaula de 29,3 litros. Coloque una séptima pieza de cartón plana en la parte superior de las seis piezas verticales.

Después de seleccionar tres piezas de toalla de papel marrón rugosa de aproximadamente 25 centímetros por 25 centímetros, doble cada una por la mitad. Luego, coloque dos de tal manera que cubran la parte superior del lado proximal de la estructura del cartón y coloque uno sobre la pila de cartón en el lado distal. En el día 11 después de la oviposición, mueva el sustrato de la oviposición en la esquina proximal derecha de la jaula.

Cuando se observe una escotilla, rocíe las toallas de papel colocadas sobre la parte superior de los cartones, hasta que se mojen, pero sin arrojar agua activamente. Luego, limpie bien ambos lados de una tapa de Petri de 100 milímetros con etanol al 70% y deje que se seque. A continuación, cuchara 50 gramos del alimento en una licuadora de una sola porción de 60 vatios y muele a 10, 000 rpm durante un minuto.

Después de medir un gramo del alimento, agítelo sobre la tapa de la placa de Petri en la jaula. Usando el extremo limpio de una cuchara o Scoopula, extienda el alimento de la manera más uniforme posible sobre el fondo del plato. Después, reemplace el alimento cada dos días.

Deseche el alimento viejo en el contenedor de residuos en autoclave. Monitoree el crecimiento de moho en la alimentación. Y si el alimento comienza a aparecer blanco o verdoso, deseche la placa de Petri y alimente de inmediato.

A los 14 días después de la oviposición, use un pincel de 2,54 centímetros para eliminar los grillos que se adhieren al sustrato de la fibra de coco natal cepillando todos los grillos de la superficie de la fibra de coco y los lados de la placa de Petri en la jaula. A continuación, coloque el sustrato de oviposición eliminado en el recipiente de residuos en autoclave y guárdelo en el congelador hasta el autoclave. Luego, reemplace el sustrato natal con un plato de fibra de coco fresco para la hidratación.

Usando una botella de lavado de agua desionizada, agregue agua hasta que la superficie de la fibra de coco brille, pero no se esté acumulando. Los grillos se abastecieron de una población con una masa media de 21 miligramos. Al final del experimento, la masa media de todos los grillos juveniles y adultos combinados fue de 0,724 gramos.

A los 65 días de edad, cuando terminó el experimento, 30 machos adultos estaban presentes, y la masa media era de 0,721 gramos, mientras que para las 58 hembras adultas, la masa media era de 0,841 gramos. La supervivencia entre la siembra y la cosecha fue del 89% y se midió semanalmente por los recuentos totales de todos los grillos individuales en todas las jaulas. En el día 65, aproximadamente el 68% de todos los grillos habían alcanzado el instar adulto.

Evite la formación de gotas de agua en el fondo del recinto al regar o nebulizar. Colocar una toalla de papel sobre los refugios permite un gradiente de humedad y absorbe las gotas de agua de la nebulización. Este procedimiento sirve como plantilla para que los investigadores en muchos campos de las ciencias de la vida retraten a Gryllus bimaculatus como un organismo modelo.

Hasta la fecha, se han publicado pocos protocolos formales para la cría de Gryllus bimaculatus o cualquier otro organismo modelo paurometaboloso. La codificación y estandarización de los métodos de cría de insectos utilizados en la agricultura de insectos permitirá comparar mejor los resultados entre los grupos de investigación.