Name: Caracterización de células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC) de sangre periférica porcina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Aprende a generar células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC) de sangre periférica porcina para aplicaciones en ingeniería de tejidos, terapia celular y modelado de enfermedades. Este protocolo optimiza la viabilidad celular mediante procesamiento rápido.

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Los autores desean reconocer la financiación de NIH / NHLBI R00 HL129068.

Todos los estudios en animales fueron aprobados por los respectivos Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) en el Colegio Médico de Wisconsin y Mayo Clinic.
NOTA: En este estudio, se utilizaron cerdos domésticos cruzados Yorkshire/Landrace/Duroc (Sus domesticus), machos y hembras, 40-80 kg, 3-6 meses de edad.
1. Recolección de sangre periférica porcina
<ol><li>Preparar materiales.<ol><li>Diluir la solución de heparina a 100 U/ml en solución salina estéril.</li>
		<li>Agregue 3-4 ml de solución de heparina a cada uno de los dos tubos cónicos de 50 ml y dos jeringas de 60 ml.</li>
		<li>Extraiga la solución de heparina sin diluir (1,000 U/ml) en un tubo de extensión.</li>
		<li>Conecte una aguja de 19 G a un extremo del tubo de extensión lleno de heparina y una jeringa de 60 ml que contenga heparina al otro extremo.</li>
	</ol></li>
	<li>Anestesiar a un cerdo de acuerdo con las políticas institucionales<ol><li>Administrar una inyección IM de atropina (0,05 mg/kg), tiletamina/zolazepam (2-5 mg/kg) y xilazina (2 mg/kg) para inducir la anestesia. NOTA: la anestesia adecuada se logra una vez que el animal está inconsciente y los músculos mandibulares no son rígidos.</li>
		<li>Coloque al animal en posición supina y coloque toallas enrolladas en ambos lados para proporcionar estabilidad.</li>
		<li>Aplique un ungüento oftálmico en los ojos para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia.</li>
		<li>Proporcione soporte térmico durante la anestesia, incluidas mantas, almohadillas térmicas y / o mesa de procedimiento calentada.</li>
	</ol></li>
	<li>Limpie el área de la ingle femoral con la solución exfoliante de betadina.</li>
	<li>Perfore la vena o arteria femoral con la aguja de 19 G y lentamente (~1-2 ml/s) extraiga 50 ml de sangre en la jeringa. NOTA: Dibujar demasiado rápido puede dañar las celdas.</li>
	<li>Dejando la aguja en su lugar, doblar inmediatamente el tubo de extensión y desconectar la jeringa de 60 ml</li>
	<li>Transfiera lentamente la sangre a un tubo cónico de 50 ml que contenga heparina.</li>
	<li>Tapa herméticamente el tubo cónico de 50 ml, invierte suavemente unas cuantas veces para mezclar y colócalo en hielo.</li>
	<li>Conecte la jeringa restante de 60 ml que contiene heparina al tubo de extensión, desenrosque el tubo de extensión y extraiga lentamente 50 ml adicionales de sangre en la jeringa.</li>
	<li>Retire inmediatamente la aguja de la arteria o vena y extraiga lentamente la sangre restante del tubo de extensión a la jeringa.</li>
	<li>Desconecte la jeringa de 60 ml del tubo de extensión y transfiera lentamente la sangre al tubo cónico restante de 50 ml que contiene heparina.</li>
	<li>Tapa herméticamente el tubo cónico de 50 ml, invierte suavemente unas cuantas veces para mezclar y colócalo en hielo.</li>
	<li>Aplique hemostasia de presión en el área de la ingle femoral del cerdo.</li>
	<li>Recuperar el cerdo de acuerdo con las políticas institucionales. Monitoree continuamente al animal hasta que recupere la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal y regrese al área regular de alojamiento / perrera.</li>
</ol>2. Aislamiento de células mononucleares
<ol><li>Diluir la sangre 1:1 con solución salina tamponada con fosfato (PBS) en cuatro tubos cónicos de 50 ml. NOTA: Este trabajo debe realizarse en una campana de cultivo celular utilizando una técnica aséptica para evitar contaminar el cultivo celular.</li>
	<li>Agregue 25 ml de solución de gradiente de densidad lista para usar a temperatura ambiente a ocho tubos cónicos de 50 ml.</li>
	<li>Pipetear muy lentamente 25 ml de solución sanguinológica/salina a lo largo del interior de cada solución de gradiente de densidad que contenga 50 ml de tubo cónico sosteniendo el tubo en un ángulo agudo con respecto a la punta de la pipeta. NOTA: La solución de sangre debe colocar suavemente capas sobre la solución de gradiente de densidad y mantener una interfaz bien definida.</li>
	<li>Centrifugar los tubos durante 30 min a 560 x g y temperatura ambiente (RT). NOTA: Para obtener los mejores resultados, desactive el freno de la centrífuga si es posible.</li>
	<li>Utilice una pipeta delgada para recoger cuidadosamente la capa leucocitaria (capa turbia de células mononucleares por encima de la solución de gradiente de densidad y por debajo del plasma transparente) de cada tubo y distribuir uniformemente en dos nuevos tubos cónicos de 50 ml. Deseche la solución de gradiente de densidad que contiene tubos. NOTA: Recoja la mayor cantidad posible de la capa leucocitaria mientras recoge la menor cantidad posible de la solución de gradiente de densidad y el plasma.</li>
</ol>3. Lavado y chapado de celdas
<ol><li>Cubra un plato de 6 pocillos con fibronectina.<ol><li>Haga una solución madre de fibronectina plasmática humana diluyéndola a 1 mg/ml en agua estéril. Conservar las alícuotas a -20 °C.</li>
		<li>Hacer 3,6 ml de una solución de trabajo de fibronectina diluyendo 600 μL de solución madre de fibronectina en 3 ml de PBS.</li>
		<li>Transfiera 600 μL de la solución de trabajo de fibronectina a cada pocillo de una placa de 6 pocillos y rocíe suavemente hasta que esté uniformemente recubierto.</li>
		<li>Espere 30 minutos para que la fibronectina cubra los pocillos y aspire suavemente la solución de cada pocillo.</li>
	</ol></li>
	<li>Mientras espera a que la fibronectina se cubra, lave las células mononucleares<ol><li>Rellene los tubos con hasta 45 ml de PBS</li>
		<li>Centrífuga durante 5 min a 560 x g y 4 °C con freno bajo. Aspire el sobrenadante de ambos tubos.</li>
		<li>Resuspender cada pellet celular en 25 mL de PBS.</li>
		<li>Repita para lavar una segunda vez.</li>
	</ol></li>
	<li>Resuspenda cada pellet celular en 5 ml de PBS y agregue 15 ml de solución de cloruro de amonio al 0,8% a cada tubo. NOTA: Este paso es lisar los glóbulos rojos restantes.</li>
	<li>Incubar en hielo durante 10 min.</li>
	<li>Lavar las celdas como antes rellenando los tubos con PBS y centrífuga durante 5 min a 560 x g y 4 °C con freno bajo. Aspire el sobrenadante de ambos tubos.</li>
	<li>Resuspenda cada pellet celular en 25 mL de PBS y repita para lavar una segunda vez.</li>
	<li>Resuspender cada pellet celular en 6 ml de medio de cultivo EGM-2 suplementado con suero bovino fetal al 10% (FBS) y 1x solución antibiótica/antimicótica que contiene 10.000 U/ml de penicilina, 10 mg/ml de estreptomicina y 25 μg/ml de anfotericina. NOTA: El medio de cultivo EGM-2 consiste en un medio de cultivo EBM-2 suplementado con 200 μL de hidrocortisona, 2 ml de factor de crecimiento de fibroblastos humanos (hFGF-B), 500 μL de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), 500 μL de análogo recombinante del factor de crecimiento similar a la insulina (R3 IGF-1), 500 μL de ácido ascórbico, 500 μL de factor de crecimiento epidérmico humano (hEGF), 500 μL de gentamicina/anfotericina y 500 μL de heparina por 500 ml.</li>
	<li>Transfiera suavemente 2 ml de la suspensión celular a cada pocillo de la placa de 6 pocillos recubierta de fibronectina y balancee suavemente hasta que esté uniformemente recubierta. NOTA: El objetivo es sembrar tantas células como sea posible para maximizar el número de colonias endoteliales que se formarán.</li>
</ol>4. Cultivo celular
<ol><li>Incubar las celdas a 37 °C, 5% deCO2 y 100% de humedad.</li>
	<li>Al día siguiente, agregue suavemente 1 ml de medio de cultivo fresco a cada pocillo. NOTA: es importante ser cuidadoso para no alterar las células que se adhieren libremente al recubrimiento de fibronectina.</li>
	<li>Al día siguiente, realice un cambio de medio de cultivo aspirando suavemente 1,5 ml de medio de cultivo de cada pocillo y reemplazándolo con 1,5 ml de medio de cultivo fresco.</li>
	<li>En cada uno de los próximos 5 días, realice suavemente un cambio completo del medio de cultivo en cada pocillo (2 ml de medio de cultivo fresco por pocillo).</li>
	<li>Después de eso, cambie suavemente el medio de cultivo tres veces por semana.</li>
	<li>Visualice regularmente los cultivos celulares bajo microscopía de luz de baja potencia (objetivo 4x). NOTA: Las colonias de células endoteliales de crecimiento sanguíneo adherente (BOEC) comenzarán a aparecer en los pozos 7-10 días después de la placa. Los tipos de células no adherentes se descartarán con cambios en el medio, y otros tipos de células adherentes se disiparán gradualmente a medida que crezcan las colonias BOEC.</li>
	<li>Pasar los BOEC a un matraz T-75 recubierto de fibronectina cuando ~70%-80% confluente y continuar cambiando el medio de cultivo tres veces por semana. NOTA: La densidad de siembra se puede controlar pasando colonias a un matraz T25. Los pasajes posteriores no requieren recubrimiento de fibronectina, y los cambios en el medio de cultivo se pueden reducir a dos veces por semana.</li>
	<li>Las células de los pasajes 1-3 pueden usarse para experimentos o transferirse a un medio de congelación y almacenarse en nitrógeno líquido para su uso futuro.</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Los BOEC son una poderosa herramienta que puede ser utilizada en diversos enfoques científicos y terapéuticos 7,8,16. Los BOEC se han utilizado para analizar la expresión génica de la CE para dilucidar los factores clave responsables del desarrollo de enfermedades vasculares y cáncer 5,19,20,21. Los BO...

El endotelio es una estructura altamente compleja y dinámica y un componente vital de la pared vascular. Recubre la superficie interna de los vasos sanguíneos para proporcionar una interfaz física entre la sangre circulante y los tejidos circundantes. Se sabe que esta estructura heterogénea realiza diversas funciones como angiogénesis, inflamación, vasoregulación y hemostasia 1,2,3,4. Las células endoteliales de la vena umbilical humana son un tipo de célula ampliamente estudiado para evaluar la funcionalidad de las células endoteliales. Sin embargo, la variabilidad del lote específica del paciente, el fenotipo inconsistente y la eficiencia mínima de división sugieren la necesidad de determinar una fuente celular que pueda mejorar todas estas características5.
Obtener una población homogénea de células endoteliales primarias puede ser técnicamente difícil, y las células endoteliales primarias no poseen una alta capacidad proliferativa6. Por lo tanto, para estudiar la regeneración vascular y evaluar los procesos fisiopatológicos, varios grupos han tratado de obtener y evaluar diferentes tipos de células endoteliales derivadas de sangre periférica, por ejemplo, células progenitoras endoteliales (CPE) o células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC)6,7,8,9 . Las EPC tempranas en forma de huso se originan a partir de células madre hematopoyéticas (HSC) y tienen una potencia de crecimiento limitada y una capacidad angiogénica limitada para producir células endoteliales maduras. Además, se parecen mucho a los monocitos inflamatorios. Además, su capacidad para diferenciarse aún más en células endoteliales funcionales, proliferantes y maduras sigue siendo discutible 6,7,9,10. El cultivo continuo de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) puede dar lugar a una población secundaria de células conocidas como EPC de crecimiento tardío, BOEC o células formadoras de colonias endoteliales (ECFC)6,7,9,10. Medina et al. en 2018, reconocieron las limitaciones de los EPC, la ambigüedad de su nomenclatura, junto con una falta general de concordancia con muchos tipos de células distintas agrupadas continuamente bajo EPC11. En contraste, los BOEC han sido reconocidos por su papel en la reparación vascular, la salud y la enfermedad, y la terapia celular. El estudio adicional y el uso terapéutico de estas células se basarán en protocolos para derivar consistentemente estos tipos de células a partir de células progenitoras circulantes.
Las células primarias como los BOEC pueden ser utilizadas como sustituto para obtener células endoteliales maduras altamente proliferativas6. Los BOEC son fenotípicamente distintos de los EPC tempranos y exhiben características endoteliales típicas, como la morfología de los adoquines y la expresión de uniones adherentes y caveolas12. El perfil genético de Hebbel et al.13,14,15 encontró que los BOEC o ECFC son las verdaderas células endoteliales, ya que promueven la formación de vasos microvasculares y grandes. Así, los BOEC pueden ser utilizados como herramienta para evaluar procesos fisiopatológicos y variación genética16. También se consideran una excelente fuente celular para la terapia celular para la regeneración vascular17. Por lo tanto, un protocolo estandarizado para derivar consistentemente estas células altamente proliferativas es esencial.
Mientras que los BOEC proporcionan una herramienta poderosa para estudiar la variación fisiopatológica y genética humana, una fuente más homogénea de BOEC puede proporcionar resultados experimentales y terapéuticos más sólidos y confiables. Se puede lograr una homogeneidad superior utilizando fuentes celulares xenogénicas derivadas de animales genéticamente similares criados en condiciones similares18. Si bien las fuentes de células xenogénicas son propensas a provocar una respuesta inmune del huésped, se están desarrollando estrategias de inmunomodulación con el objetivo de generar animales y productos animales inmunocompatibles, incluidas las células. Los cerdos, en particular, son una fuente abundante de sangre periférica y se usan comúnmente para estudiar dispositivos médicos y otras terapias debido a las similitudes anatómicas y fisiológicas con los humanos. Por lo tanto, este estudio refina el protocolo para el aislamiento y la expansión de BOEC altamente proliferativos de sangre periférica porcina. El protocolo detallado a continuación es un método sencillo y confiable para obtener una gran cantidad de BOEC a partir de un volumen relativamente pequeño de sangre. Los cultivos se pueden expandir a través de varios pasajes para generar millones de células a partir de una sola muestra de sangre.

<table><tbody><tr><td>Aguja de 19 G</td><td>Covidien</td><td>1188818112</td><td></td></tr><tr><td>tubos cónicos de 50 mL</td><td>Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>placa de 6 pocillos</td><td>BD Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>jeringas de 60 mL</td><td>Covidien</td><td>8881560125</td><td></td></tr><tr><td>Solución de cloruro de amonio (0,8%)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>07850</td><td></td></tr><tr><td>Solución antibiótica/antimicótica (100x)</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Thermo Scientific</td><td>75-253-839</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 medio</td><td>de cultivo Lonza Walkersville</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de extensión</td><td>Hanna Pharmaceutical Supply Co.</td><td>03382C6227</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Atlas Biologicals</td><td>F-0500-A</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque 1077</td><td>Cytiva</td><td>17144003</td><td>Solución de gradiente de densidad</td></tr><tr><td>Heparina sódica inyectable (1.000 unidades/mL)</td><td>Pfizer</td><td>00069-0058-01</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectina plasmática humana</td><td>Gibco</td><td>33016-015</td><td></td></tr><tr><td>Ice</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Juego de pipetas</td><td>Eppendorf</td><td>2231300004</td><td></td></tr><tr><td>Agua estéril</td><td>Gibco</td><td>15230-162</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta fina</td><td>Celltreat Scientific</td><td>229280</td><td></td></tr></tbody></table>

caracterización de células endoteliales de crecimiento sanguíneo (boec) de sangre periférica porcina

Characterization of Blood Outgrowth Endothelial Cells (BOEC) from Porcine Peripheral Blood

El endotelio es una estructura dinámica integrada que desempeña un papel importante en muchas funciones fisiológicas como la angiogénesis, la hemostasia, la inflamación y la homeostasis. El endotelio también juega un papel importante en fisiopatologías como la aterosclerosis, la hipertensión y la diabetes. Las células endoteliales forman el revestimiento interno de los vasos sanguíneos y linfáticos y muestran heterogeneidad en estructura y función. Varios grupos han evaluado la funcionalidad de las células endoteliales derivadas de la sangre periférica humana con un enfoque en las células progenitoras endoteliales derivadas de células madre hematopoyéticas o células endoteliales maduras de crecimiento sanguíneo (o células formadoras de colonias endoteliales). Estas células proporcionan un recurso autólogo para la terapéutica y el modelado de enfermedades. Las células xenogénicas pueden proporcionar una fuente alternativa de terapéutica debido a su disponibilidad y homogeneidad logradas mediante el uso de animales genéticamente similares criados en condiciones similares. Por lo tanto, se ha presentado un protocolo robusto para el aislamiento y la expansión de células endoteliales de crecimiento sanguíneo altamente proliferativo de sangre periférica porcina. Estas células se pueden utilizar para numerosas aplicaciones, como ingeniería de tejidos cardiovasculares, terapia celular, modelado de enfermedades, detección de fármacos, estudio de la biología de las células endoteliales y cocultivos in vitro para investigar las respuestas inflamatorias y de coagulación en el xenotrasplante.

La morfología de las células cultivadas se observó desde el inicio del cultivo hasta que se observaron colonias BOEC (Figura 1). Una población más pequeña de células adherentes comenzó a adherirse a las placas de cultivo y crecer, mientras que las células no adherentes se eliminaron con cambios en el medio de cultivo (Figura 1B). Las colonias aparecieron por primera vez el día 6 como una colección de células endoteliales que proliferan radialmente hacia afuera d...

Caracterización de células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC) de sangre periférica porcina

The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

El protocolo proporciona células endoteliales de crecimiento sanguíneo altamente proliferativo que se pueden usar para diversas investigaciones de ingeniería de tejidos, terapia celular y modelado de enfermedades. Esta técnica produce consistentemente muchas células de una sola extracción de sangre. Para que esta técnica tenga éxito, es crucial introducir rápidamente las células en el medio de cultivo y el entorno de la incubadora lo antes posible.Primero, diluya la solución de heparina a 100 unidades por mililitro en solución salina estéril. Agregue de tres a cuatro mililitros de solución de heparina a cada uno de los dos tubos cónicos de 50 mililitros y dos jeringas de 60 mililitros. Luego, extraiga 1, 000 unidades por solución de mililitro de heparina sin diluir en un tubo de extensión.Conecte una aguja de calibre 19 a un extremo del tubo de extensión lleno de heparina y una jeringa de 60 mililitros que contenga heparina al otro extremo del tubo de extensión. A continuación, limpie el área de la ingle femoral de un cerdo anestesiado con una solución exfoliante de Betadine. Perfore la vena o arteria femoral con una aguja de calibre 19 y de uno a dos mililitros por segundo, extrai

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Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Endoteliales que forman colonias células progenitoras (ECFCs) son una herramienta prometedora para estudiar la homeostasis vascular y la reparación.

El aislamiento y la expansión a gran escala de células humanas adultas Colonia progenitoras endoteliales formación

Ofrecemos un método para aislar y cultivar las poblaciones puras de células endoteliales de la válvula del corazón (VEC). VEC puede ser aislada de uno y otro lado de la cúspide o el prospecto e inmediatamente después, las células intersticiales de base (CIV) aislada es muy sencillo.

Aislamiento de células endoteliales valvular

Un método para la siembra de titanio contacto con la sangre de biomateriales con células autólogas y las pruebas de biocompatibilidad se describe. Este método utiliza células progenitoras endoteliales y los tubos de titanio, cabeza de serie en cuestión de minutos de implantación quirúrgica en porcino venas cavas. Esta técnica se puede adaptar a muchos otros dispositivos biomédicos implantables.

Autólogo de células progenitoras endoteliales-Siembra Tecnología y las pruebas de biocompatibilidad para dispositivos cardiovasculares en el modelo animal de gran

Estamos describiendo un método de someter a las células adherentes al esfuerzo cortante de flujo laminar en un circuito de flujo continuo estéril. Adhesión de las células, la morfología puede ser estudiado a través de la cámara transparente, las muestras obtenidas de los circuitos para el análisis de metabolitos y células recolectadas después de la exposición de corte para futuros experimentos o la cultura.

De placas paralelas de flujo y la Cámara de circuito de flujo continuo para evaluar las células progenitoras endoteliales bajo una tensión cortante de flujo laminar

Las células endoteliales formadoras de colonias (ECFCs) son las células endoteliales circulantes con un robusto potencial de proliferación clonal que deben mostrarse...

Caracterización fenotípica y funcional de las células endoteliales Formadoras de Colonias derivados de la sangre del cordón umbilical

En este video, demostramos el aislamiento de células endoteliales de la aorta abdominal de un modelo de cerdo utilizando la digestión de colagenasa en un solo paso. Las células endoteliales se pueden cultivar para aplicaciones posteriores.

Aislamiento de células endoteliales aórticas porcinas (pAEC): un método basado en enzimas para aislar células endoteliales de aorta abdominal porcina recolectada

Este protocolo permite la generación y caracterización fiables de células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOECs) a partir de un pequeño volumen de sangre periférica adulta. Las BOEC se pueden utilizar como sustituto de las células endoteliales de pacientes con trastornos vasculares y como sustrato para la generación de células madre pluripotentes inducidas.

Generación y Cultura de Sangre Consecuencia endoteliales Las células de la sangre periférica humana

células madre y progenitoras hematopoyéticas (HSPC) se derivan de las células endoteliales especializadas (hemogenic) durante el desarrollo, sin embargo, se sabe poco sobre el proceso por el cual algunas células endoteliales especifican a convertirse en la formación de la sangre. Demostramos un método basado en citometría de flujo permite el aislamiento simultáneo de las células endoteliales y hemogenic HSPC de tejidos embrionarios murinos.

Aislamiento de las células murinas embrionarias Hemogenic endoteliales

El objetivo de este protocolo es aislar las células progenitoras endoteliales de cordón umbilical. Algunas de las aplicaciones incluyen el uso de estas células como un biomarcador para identificar pacientes con riesgo cardiovascular, tratamiento de enfermedades isquémicas, y construye creando ingeniería de tejido vascular y del corazón la válvula.

Aislamiento de células endoteliales progenitoras de la sangre de cordón Umbilical humano

Se presenta un modelo en vitro que permite el estudio y análisis de la coagulación en sangre no anticoagulada todo. Anticoagulación en el sistema depende el efecto de anticoagulación natural de las células endoteliales sanas y activación de células endoteliales resultará en la coagulación.

Evaluación de las propiedades anticoagulantes y antiinflamatorias de las células endoteliales mediante cultivo celular 3D y sangre no anticoagulada

Este protocolo describe la generación de vasos sanguíneos autoorganizados a partir de células madre pluripotentes humanas y pluripotentes inducidas. Estas redes de vasos sanguíneos exhiben una red endotelial extensa y conectada rodeada de pericitos, actina del músculo liso y una membrana basal continua.

Generación de organoides de vasos sanguíneos humanos a partir de células madre pluripotentes

Aprende a generar células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC) de sangre periférica porcina para aplicaciones en ingeniería de tejidos, terapia celular y modelado de enfermedades. Este protocolo optimiza la viabilidad celular mediante procesamiento rápido.

Caracterización de células endoteliales de crecimiento sanguíneo (BOEC) de sangre periférica porcina

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