Name: Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Aprende a inducir hipertensión ocular mediante cauterización del plexo vascular limbal en ratas. Este modelo reproducible permite estudiar la patofisiología del glaucoma y la neurodegeneración retinal in vivo con bajo costo.

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Agradecemos a nuestros técnicos de laboratorio José; Nilson dos Santos, Daianne Mandarino Torres, José Francisco Tibúrcio, Gildo Brito de Souza y Luciano Cavalcante Ferreira. Esta investigación fue financiada por la FAPERJ, el CNPq y la CAPES.

<ol><li>Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Pathophysiology+and+Treatment+of+Glaucoma+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The Pathophysiology and Treatment of Glaucoma A Review.</a> JAMA. 311 (8), 1901-1911 (2014).</li>
<li>Tham, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+glaucoma+and+projections+of+glaucoma+burden+through+2040%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: A systematic review and meta-analysis.</a> Ophthalmology. 121 (11), 2081-2090 (2014).</li>
<li>Quaranta, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+of+Life+in+Glaucoma%3A+A+Review+of+the+Literature%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Therapy%22%5BJournal%5D)">Quality of Life in Glaucoma: A Review of the Literature.</a> Advances in Therapy. 33 (6), 959-981 (2016).</li>
<li>Heijl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+intraocular+pressure+and+glaucoma+progression%3A+results+from+the+Early+Manifest+Glaucoma+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Reduction of intraocular pressure and glaucoma progression: results from the Early Manifest Glaucoma Trial.</a> Archives of Ophthalmology. 120 (10), Chicago, Ill. 1268-1279 (2002).</li>
<li>Susanna, R., De Moraes, C. G., Cioffi, G. A., Ritch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+Do+People+%28Still%29+Go+Blind+from+Glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Why Do People (Still) Go Blind from Glaucoma.</a> Translational Vision Science & Technology. 4 (2), 1(2015).</li>
<li>Fujikawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VAV2+and+VAV3+as+candidate+disease+genes+for+spontaneous+glaucoma+in+mice+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">VAV2 and VAV3 as candidate disease genes for spontaneous glaucoma in mice and humans.</a> PLoS One. 5 (2), 9050(2010).</li>
<li>Mao, M., Hedberg-Buenz, A., Koehn, D., John, S. W., Anderson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+segment+dysgenesis+and+early-onset+glaucoma+in+nee+mice+with+mutation+of+Sh3pxd2b%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Anterior segment dysgenesis and early-onset glaucoma in nee mice with mutation of Sh3pxd2b.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (5), 2679-2688 (2011).</li>
<li>John, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+iris+atrophy%2C+pigment+dispersion%2C+and+glaucoma+in+DBA%2F2J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Essential iris atrophy, pigment dispersion, and glaucoma in DBA/2J mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 39 (6), 951-962 (1998).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+hypertension+in+mice+with+a+targeted+type+I+collagen+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Ocular hypertension in mice with a targeted type I collagen mutation.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44 (4), 1581-1585 (2003).</li>
<li>Chou, T. H., Tomarev, S., Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+expressing+mutated+Tyr437His+human+myocilin+develop+progressive+loss+of+retinal+ganglion+cell+electrical+responsiveness+and+axonopathy+with+normal+iop%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice expressing mutated Tyr437His human myocilin develop progressive loss of retinal ganglion cell electrical responsiveness and axonopathy with normal iop.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (9), 5602-5609 (2014).</li>
<li>vander Zypen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+morphological+study+on+structure+and+function+of+the+filtration+angel+of+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Experimental morphological study on structure and function of the filtration angel of the rat eye.</a> Ophthalmologica. 174 (5), 285-298 (1977).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aqueous+humor+dynamics+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Aqueous humor dynamics in mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44 (12), 5168-5173 (2003).</li>
<li>Morrison, J. C., Fraunfelder, F. W., Milne, S. T., Moore, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbal+microvasculature+of+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Limbal microvasculature of the rat eye.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 36 (3), 751-756 (1995).</li>
<li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64 (1), 85-96 (1997).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+A+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: A paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (1), 207-216 (2010).</li>
<li>Zhu, M. D., Cai, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+experimental+chronic+intraocular+hypertension+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+and+New+Zealand+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Development of experimental chronic intraocular hypertension in the rabbit.</a> Australian and New Zealand Journal of Ophthalmology. 20 (3), 225-234 (1992).</li>
<li>Shareef, S. R., Garcia-Valenzuela, E., Salierno, A., Walsh, J., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ocular+hypertension+following+episcleral+venous+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Chronic ocular hypertension following episcleral venous occlusion in rats.</a> Experimental Eye Research. 61 (3), 379-382 (1995).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43 (2), 402-410 (2002).</li>
<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+Circumlimbal+Suture+Model+of+Chronic+IOP+Elevation+in+Mice+and+Assessment+of+Changes+in+Gene+Expression+of+Stretch+Sensitive+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characterization of the Circumlimbal Suture Model of Chronic IOP Elevation in Mice and Assessment of Changes in Gene Expression of Stretch Sensitive Channels.</a> Frontiers in Neuroscience. 11, (2017).</li>
<li>Biswas, S., Wan, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+rodent+hypertensive+glaucoma+models%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Review of rodent hypertensive glaucoma models.</a> Acta Ophthalmologica. 97 (3), 331-340 (2019).</li>
<li>Pitha, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+Dorzolamide+Release+Prevents+Axonal+and+Retinal+Ganglion+Cell+Loss+in+a+Rat+Model+of+IOP-Glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Sustained Dorzolamide Release Prevents Axonal and Retinal Ganglion Cell Loss in a Rat Model of IOP-Glaucoma.</a> Translational Vision Science & Technology. 7 (2), 13(2018).</li>
<li>Grozdanic, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+elevation+of+the+intraocular+pressure+by+cauterization+of+vortex+and+episcleral+veins+in+rats+causes+functional+deficits+in+the+retina+and+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Temporary elevation of the intraocular pressure by cauterization of vortex and episcleral veins in rats causes functional deficits in the retina and optic nerve.</a> Experimental Eye Research. 77 (1), 27-33 (2003).</li>
<li>Lani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subacute+model+of+glaucoma+based+on+limbal+plexus+cautery+in+pigmented+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A subacute model of glaucoma based on limbal plexus cautery in pigmented rats.</a> Scientific Reports. 9 (1), 16286(2019).</li>
<li>vander Merwe, E. L., Kidson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+three-dimensional+organisation+of+the+post-trabecular+aqueous+outflow+pathway+and+limbal+vasculature+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The three-dimensional organisation of the post-trabecular aqueous outflow pathway and limbal vasculature in the mouse.</a> Experimental Eye Research. 125, 226-235 (2014).</li>
<li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (12), 4611-4616 (2004).</li>
<li>Sasovetz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine+hydrochloride%3A+an+effective+general+anesthetic+for+use+in+electroretinography%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Ketamine hydrochloride: an effective general anesthetic for use in electroretinography.</a> Annals of Ophthalmology. 10 (11), 1510-1514 (1978).</li>
<li>Stabio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+map+of+the+mouse+eye+for+orienting+retinal+topography+in+anatomical+space%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">A novel map of the mouse eye for orienting retinal topography in anatomical space.</a> The Journal of Comparative Neurology. 526 (11), 1749-1759 (2018).</li>
<li>Blanco, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Chronic+Ocular-Hypertensive+Rat+Model+induced+by+Injection+of+the+Sclerosant+Agent+Polidocanol+in+the+Aqueous+Humor+Outflow+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Chronic Ocular-Hypertensive Rat Model induced by Injection of the Sclerosant Agent Polidocanol in the Aqueous Humor Outflow Pathway.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (13), 3209(2019).</li>
<li>Paranhos, A., Prata, J. A., de Mello, P. A., da Silva, F. A. Post-Trabecular Glaucomas with Elevated Episcleral Venous Pressure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParanhos%2C+A+%22Mechanisms+of+the+Glaucomas%22">Mechanisms of the Glaucomas</a>. , Humana Press. 139-157 (2008).</li>
<li>Ou, Y., Jo, R. E., Ullian, E. M., Wong, R. O. L., Della Santina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+Vulnerability+of+Specific+Retinal+Ganglion+Cell+Types+and+Synapses+after+Transient+Ocular+Hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+The+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Selective Vulnerability of Specific Retinal Ganglion Cell Types and Synapses after Transient Ocular Hypertension.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of The Society for Neuroscience. 36 (35), 9240-9252 (2016).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

La cauterización del plexo limbal (LPC) es un nuevo modelo posttrabecular con la ventaja de que se dirige a estructuras vasculares de fácil acceso que no requieren disección conjuntival o de tenas17,28. A diferencia del modelo de cauterización de las venas de vórtice, un modelo de OHT de renombre basado en el deterioro quirúrgico del drenaje venoso coroideo, no se espera que la congestión venosa influya en el aumento de la PIO en el modelo LPC, ya que las venas l...

La literatura médica entiende el glaucoma como un grupo heterogéneo de neuropatías ópticas caracterizadas por la degeneración progresiva de las células ganglionares de la retina (CGR), dendritas, soma y axones, lo que resulta en ahuecamiento estructural (excavación) del disco óptico y deterioro funcional del nervio óptico, lo que conduce a amaurosis en casos no controlados al interrumpir la transmisión de información visual desde el ojo al cerebro1. El glaucoma es actualmente la causa más común de ceguera irreversible en todo el mundo, y se prevé que llegue a aproximadamente 111,8 millones de personas en 20402, lo que afectará profundamente la calidad de vida (CV) de los pacientes y generará importantes problemas socioeconómicos3.
La presión intraocular (PIO) elevada es uno de los factores de riesgo más importantes y el único modificable para el desarrollo y progresión del glaucoma. Entre los múltiples tipos de glaucoma, todos, excepto el glaucoma de tensión normal (NTG), se asocian con una PIO elevada en algún momento de la historia clínica de la enfermedad. A pesar de los notables avances clínicos y quirúrgicos para atacar la PIO y ralentizar o detener la progresión de la enfermedad, los pacientes siguen perdiendo la visión debido al glaucoma 4,5. Por lo tanto, un conocimiento profundo de la fisiopatología compleja y multifactorial de esta enfermedad es imperativo para el desarrollo de tratamientos más efectivos, especialmente para proporcionar neuroprotección a los CGR.
Entre una variedad de enfoques experimentales para la comprensión de los mecanismos de la enfermedad, los modelos animales basados en la hipertensión ocular (OHT) se parecen más al glaucoma humano. Los modelos de roedores son particularmente útiles ya que son de bajo costo, son fáciles de manejar, pueden ser manipulados genéticamente, tienen una vida útil corta y presentan características anatómicas y fisiológicas oculares comparables a las humanas, como la producción de humor acuoso y el drenaje 6,7,8,9,10,11,12,13 . Los modelos utilizados actualmente incluyen la esclerosis de la malla trabecular después de la inyección de solución salina hipertónica en las venas epiesclerales 14, la inyección intracameral de microperlas 15 o sustancias viscoelásticas 16, la cauterización de las venas del vórtice 17, la fotocoagulación de la malla trabecular con láser de argón 18, la sutura circumlimbal 19 y el uso de un modelo transgénico de OHT relacionado con la edad (ratones DBA/2J)8. Sin embargo, la invasividad, la opacificación postoperatoria de la córnea, la disrupción del segmento anterior, las extensas curvas de aprendizaje, el costoso equipamiento y las PIO postoperatorias altamente variables, son algunos de los escollos reportados asociados a los modelos actuales, lo que hace que el desarrollo de un modelo alternativo de THO sea una demanda para superar estos problemas20,21,22.
El presente protocolo formaliza un novedoso procedimiento quirúrgico para inducir THO como proxy del glaucoma, basado en la cauterización del plexo limbal (LPC) en roedores23. Se trata de un modelo fácil, reproducible, accesible y no invasivo que proporciona una alta eficiencia y una baja variabilidad de la elevación de la PIO, asociada a una tasa excepcionalmente alta de recuperación clínica completa, por lo que proporciona una evaluación funcional in vivo en un número reducido de animales utilizados en cada experimento. La técnica quirúrgica induce la OHT subaguda con un retorno gradual a los niveles basales en pocos días, lo que modela el ataque hipertensivo observado en el glaucoma agudo de ángulo cerrado. Además, la recuperación de la PIO en el modelo va seguida de una neurodegeneración glaucomatosa continua, lo que es útil para futuros estudios mecanicistas de la degeneración secundaria de las CGR, que se produce en varios casos de glaucoma humano a pesar de un control adecuado de la PIO.

<table><tbody><tr><td>Acetona</td><td>Isofar</td><td>201</td><td>Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)</td></tr><tr><td>Electrodo activo para electrorretinografía</td><td>Hansol Medical</td> <td>Co-Aguja de</td> <td>acero inoxidable 0,25 mm y veces; 15 mm</td></tr><tr><td>Anestalcon</td><td>Novartis Bioci&ecirc; ncias S/A</td><td>MS-1.0068.1087</td><td>Clorhidrato de proxymetacaína 0.5%</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio</td><td>Vetec</td><td>560</td><td>Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)</td></tr><tr><td>Cauterización de punta fina a baja temperatura 10/bx</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>AA00</td><td>Cauterio oftálmico de baja temperatura</td></tr><tr><td>Cetamin</td><td>Syntec do Brasil Ltda</td><td>000200-3-000003</td><td>Clorhidrato de ketamina 10%</td></tr><tr><td>DAKO</td><td>Dako North America</td><td>S3023</td><td>Medio de montaje antidecoloración</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28718-90-3</td><td>diamidino-2-fenilindol; contratinción nuclear fluorescente azul; emisión a 452&plusmn; 3 nm</td></tr><tr><td>Ecofilm</td><td>Crist&aacute; lia Produtos Qu&iacute; micos Farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0298.0487</td><td>Carmelosa sódica 0.5%</td></tr><tr><td>EPON Resina</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>-</td><td>Resina epoxi utilizada para microscopía electrónica, compuesta por una mezcla de cuatro reactivos: Resina Poly/Bed 812 (CAT#08791); DDSA - Anhídrido dodecenilsuccínico (CAT#00563); NMA - Anhídrido de metilo nádico (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris (dimetilaminometil)fenol (CAT # 00553)</td></tr><tr>Ciencias <td>de microscopía electrónica</td> <td>de glutaraldehído</td><td>16110</td><td>Utilizado para la preparación de tejidos de microscopía electrónica (paso 5)</td></tr><tr><td>Hyabak</td><td>Uni&atilde; o Qu&iacute; mica Farmac&ecirc; utica Nacional S/A</td><td>MS-8042140002</td><td>Hialuronato de sodio 0.15%</td></tr><tr><td>Icare Tonolab</td><td>Icare Finland Oy</td><td>TV02 (número de modelo)</td><td>Tonómetro de mano de rebote</td></tr><tr><td>IgG burro anticuerpo anti-ratón + Alexa Fluor 555</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A31570</td><td>Solución de anticuerpos secundarios</td></tr><tr><td>Monitor LCD 23 pulgadas</td><td>Samsung Electronics Co. Ltd.</td><td>S23B550</td><td>Modelo LS23B550, para el registro de electrorretinogramas</td></tr><tr><td>LSM 510 Meta</td><td>Carl Zeiss-Microscopio</td><td></td> de <td>epifluorescencia confocal</td></tr><tr><td>Maxiflox</td><td>Crist&aacute; lia Produtos Qu&iacute; micos Farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0298.0489</td><td>Ciprofloxacina 3.5 mg/g</td></tr><tr><td>MEB-9400K</td><td>Nihon Kohden</td> <td>Corporation-Sistema</td> <td>para el registro de electrorretinogramas</td></tr><tr><td>monoclonales IgG1 de ratón anti-Brn3a</td><td>MilliporeSigma</td><td>MAB-1585</td><td>Brn3a solución de anticuerpos primarios</td></tr><tr><td>Neuropack Manager v08.33</td><td>Nihon Kohden</td> <td>Corporation-Software</td> <td>para el procesamiento</td></tr> <tr><td>de señales de electrorretinogramaOptometría</td><td></td> <td>CerebralMecánica-Sistema</td> <td>para el análisis de la respuesta optomotora</td></tr><tr><td>Tetróxido de osmio</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>19100</td><td>Utilizado para la preparación de tejidos de microscopía electrónica (paso 5)</td></tr><tr><td>Ferrocianuro de potasio</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>20150</td><td>Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)</td></tr><tr><td>Electrodos de referencia y de tierra para electrorretinografía</td><td>Chalgren Enterprises</td><td>110-63</td><td>Agujas de acero inoxidable 0,4 mm &times; 37 mm</td></tr><tr><td>Tampón de cacodilato de sodio</td><td>Electrónica Microscopy Sciences</td><td>12300</td><td>Utilizado para la preparación de tejidos por microscopía electrónica (paso 5)</td></tr><tr><td>Ster MD</td><td>Uni&atilde; o Qu&iacute; mica Farmac&ecirc; utica Nacional S/A</td><td>MS-1.0497.1287</td><td>Acetato de prednisolona 0.12%</td></tr><tr><td>Terolac</td><td>Crist&aacute; lia Produtos Qu&iacute; micos Farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0497.1286</td><td>Ketorolac trometamol 0.5%</td></tr><tr><td>Terramicina</td><td>Laborat&oacute; rios Pfizer Ltda</td><td>MS-1.0216.0024</td><td>Clorhidrato de oxitetraciclina 30 mg/g + polimixina B 10.000 U/g</td></tr><tr><td>Tono-Pen XL</td><td>Reichert Technologies</td><td>230635</td><td>Tonómetro de mano de aplanación digital</td></tr><tr><td>TO-PRO-3</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T3605</td><td>Contratinción nuclear fluorescente de rojo lejano; emisión a 661 nm</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td>Surfactante no iónico</td></tr><tr><td>Acetato de uranilo</td><td>Ciencias de la Microscopía Electrónica</td><td>22400</td><td>Utilizado para la preparación de tejidos con microscopía electrónica (paso 5)</td></tr><tr><td>Xilazin</td><td>Syntec do Brasil Ltda</td><td>7899</td><td>Clorhidrato de xilacina 2%</td></tr><tr><td></td><td>Carl Zeiss-Microscopio</td><td></td> <td>estereoscópico para cirugía y disección de retina</td></tr></tbody></table>

cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

El glaucoma, la segunda causa de ceguera en todo el mundo, es un grupo heterogéneo de trastornos oculares caracterizados por daño estructural en el nervio óptico y la degeneración de las células ganglionares de la retina (RGC), lo que resulta en una disfunción visual al interrumpir la transmisión de información visual del ojo al cerebro. La presión intraocular elevada es el factor de riesgo más importante; Por lo tanto, se han desarrollado varios modelos de hipertensión ocular en roedores mediante enfoques genéticos o experimentales para investigar las causas y los efectos de la enfermedad. Entre ellas, se han descrito algunas limitaciones, como la invasividad quirúrgica, la evaluación funcional inadecuada, la necesidad de un entrenamiento extenso y la extensión muy variable del daño retiniano. El presente trabajo caracteriza un método simple, de bajo costo y eficiente para inducir hipertensión ocular en roedores, basado en la cauterización a baja temperatura y de círculo completo del plexo vascular limbal, un componente importante del drenaje acuoso del humor. El nuevo modelo proporciona una hipertensión ocular subaguda técnicamente fácil, no invasiva y reproducible, asociada a RGC progresiva y degeneración del nervio óptico, y una tasa de recuperación clínica postoperatoria única que permite estudios funcionales in vivo por métodos electrofisiológicos y conductuales.

Las variables cuantitativas se expresan como media ± error estándar de la media (SEM). A excepción de la comparación de la dinámica de la PIO entre los grupos OHT y control (Figura 1F), el análisis estadístico se realizó mediante ANOVA de dos vías seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Sidak. Un valor de p &lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativo.
La Figura 1 ilustra los pasos quirúrgicos del modelo de cauteri...

El objetivo de este protocolo es caracterizar un nuevo modelo de neurodegeneración glaucomatosa basado en la cauterización térmica de 360° del plexo vascular limbal, induciendo hipertensión ocular subaguda.

Cauterización de círculo completo del plexo vascular limbal para el glaucoma inducido quirúrgicamente en roedores

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

Desarrollamos un método simple para inducir la degeneración del glaucoma robusto y progresivo basado en la elevación temporal de la presión intraocular. Esto representa una oportunidad única para estudiar los puntos clave de la fisiopatología del glaucoma. Se trata de un modelo de fácil aprendizaje, no invasivo, de bajo coste y altamente reproducible que permite el análisis de funciones in vivo y diseños experimentales a corto plazo utilizando un número reducido de animales para cada experimento.La retina y el nervio óptico son partes evaluables del sistema nervioso central, por lo que modelar el deterioro progresivo de estas estructuras puede proporcionar información valiosa sobre otros trastornos neurodegenerativos. Para medir la presión intraocular basal, o PIO, de los ojos de control experimentales y contralaterales, coloque a la rata anestesiada en una posición de decúbito ventral sobre la mesa de trabajo, de modo que la superficie corneal sea fácilmente accesible hasta la punta del tonómetro. Coloque la punta del tonómetro de manera que toque ligeramente la zona corneal central perpendicularmente.A continuación, adquiera la medida pulsando el botón de medición. A continuación, coloque a la rata en una ligera posición de decúbito lateral bajo un microscopio estereoscópico e inspeccione el ojo experimental con un aumento de 40 veces. Durante el procedimiento, mantenga lubricado el ojo de control contralateral instilando una gota de carmelosa sódica o hialuronato de sodio.A continuación, con unas pinzas curvas, empuje suavemente el globo ocular experimental hacia delante para exponer la vasculatura que rodea los 360 grados del limbo. Luego, con la otra mano, usando una cauterización oftálmica a baja temperatura, cauterice suavemente los vasos alrededor de la córnea. Tenga cuidado de no cauterizar la periferia corneal.Confirme el éxito del procedimiento quirúrgico observando la aparición de pequeñas marcas circulares de cauterización en el limbo escleral, la obliteración de la vasculatura limbal y la dilatación de la pupila en el ojo operado. Después de la cirugía, verifique la PIO postoperatoria inmediata en ambos ojos como se demostró anteriormente. A continuación, aplique una gota de acetato de prednisolona oftálmico en la superficie anterior del ojo experimental.Después de 40 segundos, reemplácelo con un ungüento antibiótico oftálmico. Aplicar un seguimiento clínico diario del ojo experimental con medicamentos tópicos compuestos por un antiinflamatorio no esteroideo y una pomada antibiótica. Para el análisis de la respuesta optomotora, coloque a la rata para que se habitúe en una plataforma construida con cuatro monitores de computadora en un cuadrilátero.Mantenga el cursor rojo en forma de cruz en el fotograma de vídeo entre los ojos de la rata que se mueve libremente, ya que indica el centro del cilindro virtual. Obsérvese la respuesta optomotora que consiste en un seguimiento reflejo de la cabeza y el cuello de la rata provocado por las gradaciones rotativas. Inicialmente, introduce un estímulo con baja frecuencia espacial, luego aumenta la frecuencia progresivamente hasta que no se note el movimiento de seguimiento.Para registrar el electrorretinograma patrón, después de anestesiar a la rata, inserte cuidadosamente el electrodo activo en la periferia temporal de la córnea. Además, inserte el electrodo de referencia en el tejido subcutáneo del canto temporal ipsilateral y el electrodo de tierra en una de las extremidades posteriores. A continuación, coloque la rata a 20 centímetros de la pantalla de estímulo, controle la línea de base de la señal e inicie la adquisición pulsando el botón Análisis del sistema de adquisición.Después de aislar las retinas, transfiéralas a una placa de cultivo de 24 pocillos que contenga PBS de un mililitro, manteniendo la retina interna hacia arriba. Permeabilizar el tejido lavando con un tensioactivo no iónico al 0,5% diluido en PBS. Luego, incube el tejido y la solución de bloqueo durante una hora a temperatura ambiente agitando suavemente.Durante la incubación, prepare la solución de anticuerpos primarios Brn-3a y guárdela a cuatro grados centígrados. Después del bloqueo tisular, incubar las retinas en 200 microlitros de solución primaria de anticuerpos a cuatro grados centígrados durante 72 horas con una suave agitación. A continuación, lave el pañuelo con PBS.Incubar el tejido en 200 microlitros de la solución de anticuerpos secundarios durante dos horas a temperatura ambiente y luego con una solución de contratinción nuclear durante 10 minutos para la tinción de núcleos fluorescentes. Después de tres lavados con PBS, transfiera la retina a un portaobjetos de microscopio de vidrio con dos cepillos pequeños manteniendo el lado vítreo hacia arriba. Coloque el cuadrante dorsal de la retina hacia arriba en el portaobjetos del microscopio.Finalmente, aplique 200 microlitros de medio de montaje antidecoloración en un cubreobjetos de vidrio y colóquelo en la retina montada plana para su análisis microscópico. Bajo un microscopio de epifluorescencia confocal, utilizando un objetivo de aumento de 40 veces, examine las monturas planas para estimar las células ganglionares de la retina. Después de la enucleación del globo ocular, extirpe el segmento proximal de la porción intraorbitaria del nervio óptico, incluida parte de la porción intraocular.Luego, coloque inmediatamente las muestras en viales o tubos que contengan de 200 a 300 microlitros de fijador frío. Después de dos horas, lavar el tejido con tampón de cacodilato de sodio frío de 100 micromolares. A continuación, se fija el tejido durante una hora en tetróxido de osmio al 1% y cloruro de calcio de cinco nanomolares a cuatro grados centígrados bajo una suave agitación.Después de tres lavados con tampón de cacodilato de sodio frío, lavar los fragmentos del nervio óptico con agua destilada fría antes de incubar durante la noche y acetato urinario al 1% a cuatro grados centígrados. Al día siguiente, después de tres lavados con agua, deshidratar progresivamente el tejido en concentraciones crecientes de acetona. Luego, realice tres rondas de soluciones de acetona de resina epoxi y de incrustación antes de incrustar el tejido en resina epoxi pura durante 24 horas.Al día siguiente, retire las muestras del portamuestras y transfiéralas a moldes de inclusión durante 48 horas a 60 grados centígrados. Después de la polimerización, utilice un ultramicrótomo para cortar secciones semifinas transversales de los fragmentos del nervio óptico. Luego, recoja y transfiera las secciones a un portaobjetos de vidrio de microscopio.Tiñe las secciones con azul de toluidina y toma imágenes de ellas con un microscopio óptico con un aumento de 100 veces. Para el análisis ultraestructural, realice secciones transversales ultrafinas y recolóquelas en una rejilla de cobre. Luego, tiñe las secciones con acetato urinario y citrato de plomo para un examen microscópico electrónico de transmisión.La cauterización de círculo completo indujo la elevación de la PIO inmediatamente después de la cirugía en comparación con los ojos de control. El pico de PIO postoperatoria se observó el primer día y disminuyó gradualmente hasta los niveles basales del sexto día. Además, la función retiniana se evaluó tanto conductual como electrofisiológicamente mediante reflejo optomotor y electrorretinograma patrón, respectivamente.Después de la cirugía, ambos parámetros mostraron dos fases distintas de deterioro: la fase aguda de hipertensión ocular en el tercer día y una fase de degeneración secundaria en el día 30. En comparación con los nervios ópticos de control, los recuentos axonales y las secciones transversales semifinas del nervio óptico disminuyeron progresivamente después de la cirugía. Las micrografías electrónicas de transmisión de los nervios ópticos del ojo de control demostraron fibras mielinizadas densamente empaquetadas separadas por procesos de células gliales delgadas y microtúbulos axonales y neurofilamentos evidentes.Por el contrario, después de tres días de hipertensión ocular, se observaron algunas fibras degeneradas, vacuolización citoplasmática en los procesos de las células gliales y cromatina condensada en los núcleos de las células gliales. Después de siete días, hubo un aumento en las fibras axonales degeneradas y en los procesos de células gliales hipertónicas. Y después de 14 días, se observó un mayor desarreglo de las fibras del nervio óptico asociado con la invasión de los procesos de las células gliales entre los axones.Además, la densidad de las células ganglionares de la retina disminuyó con el tiempo, principalmente en los cuadrantes retinianos dorsal y temporal. Mientras realiza este procedimiento, trate de tocar suavemente los vasos limbales con una punta de cauterización, sin afectar la periferia del cordón umbilical y asegurándose de que se observen marcas de cauterización continuas alrededor del limbo escleral. Después de este procedimiento, se pueden aplicar una variedad de métodos, como la evaluación bioquímica e inmunohistoquímica funcional de las estructuras oculares y otros métodos que pueden reconocer la fisiopatología del glaucoma.

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