Ensayo mecánico de evitación de conflictos para medir el comportamiento del dolor en ratones

Este método puede ayudar a responder preguntas sobre el estado efectivo o motivacional de los animales bajo diferentes condiciones de dolor. Es un paso importante en la mejora de la traducción de la investigación preclínica. La principal ventaja de esta técnica es que es relativamente rápida y fácil de realizar, pero aún así evalúa motivaciones complejas que influyen en el comportamiento relacionado con el dolor.

Comience por construir las paredes laterales, el piso y el techo de la cámara uno utilizando un acrílico blanco opaco de tres milímetros de espesor. Para la pared frontal, use un acrílico transparente de tres milímetros de grosor. Coloque la tapa de la cámara uno con una bisagra para que los ratones se puedan colocar fácilmente y recuperar de la cámara.

A continuación, conecte cinta de diodo emisor de luz autoadhesiva a la superficie interna de la tapa para proporcionar una iluminación de alrededor de 4, 800 lux. Deslice una lámina acrílica opaca dentro y fuera de su posición para cerrar la cámara uno del resto del dispositivo MCA. A continuación, construya una cámara dos sin iluminación de 270 milímetros de largo, la cámara de prueba MCA, utilizando acrílico rojo oscuro translúcido en todos los lados con una tapa con bisagras en la parte superior.

Luego coloque una rejilla de 13 x 31 con orificios de dos milímetros en el piso de la cámara a través de la cual puede sobresalir una serie de sondas romas con puntas de 0,5 milímetros de diámetro. Ajuste la altura de las sondas colocando láminas acrílicas adicionales debajo de la placa base de la sonda. Con este enfoque, configure el dispositivo con alturas de sonda de cero, dos y cinco milímetros.

Como alternativa a los pines de mapa embotados o materiales similares, utilice los archivos de la impresora 3D para imprimir el piso de la cámara dos y la placa de sonda con un material lavable y biocompatible como el plástico de nylon 12. Finalmente, construya una cámara oscura tres usando acrílico translúcido de color rojo oscuro en todos los lados con una tapa con bisagras similar a las cámaras uno y dos. Colóquelo en el extremo opuesto de la cámara uno para que sirva como un área de escape oscura de las sondas mecánicas en la cámara dos.

Un día antes de programar la prueba de referencia, aclimate a los ratones a la unidad MCA durante 5 a 15 minutos con sus compañeros de jaula para facilitar la exploración social de todo el dispositivo. Asegúrese de que los LED de la cámara uno estén apagados, que la barrera entre las cámaras uno y dos se mantenga abierta y que las sondas no sobresalgan por el suelo de la cámara dos. A continuación, configure una cámara de video capaz de grabar imágenes de 1080 píxeles en un trípode con una vista lateral de todo el dispositivo MCA.

Ajuste el campo de visión de tal manera que el MCA llene la imagen grabada. Una vez que comience la grabación, sostenga una placa de borrado en seco de mano en la vista de campo de la cámara para etiquetar el inicio del video con información de identificación sobre la ejecución de la prueba del animal. Para la primera ejecución, ajuste la altura de la sonda a cero y transfiera el ratón que se va a probar desde su jaula doméstica a la cámara uno con la puerta de barrera en su lugar.

Inicie un temporizador que esté visible en el material de archivo grabado. Después de 10 segundos, encienda la cámara uno LED. Después de que el ratón haya estado en la cámara iluminada durante 20 segundos, retire la barrera entre las cámaras uno y dos.

Observe al animal durante dos minutos y mida las latencias o los tiempos de permanencia con un cronómetro mientras la prueba está en curso. Registre la latencia en la primera entrada a la cámara dos, la latencia para cruzar más de la mitad de la cámara dos, el tiempo total de permanencia en la cámara dos, la latencia para llegar a la cámara tres y el tiempo total de permanencia en cada cámara en dos minutos y conviértalos en proporciones. Una vez completada la prueba, devuelva el ratón a su jaula doméstica.

Limpie las cámaras MCA con etanol al 70% y deje que se seque por completo. Después de ejecutar todos los ratones de la cohorte con la altura de la sonda establecida en cero, inserte una lámina de acrílico de tres milímetros debajo de la placa base de la sonda mecánica y repita la ejecución con una altura de sonda de dos milímetros. Después de ejecutar todos los ratones con la altura de la sonda establecida en dos milímetros, inserte otra hoja de acrílico de tres milímetros debajo de la placa base de la sonda y repita la ejecución con una altura de sonda de cinco milímetros.

Realice una limpieza final con un desinfectante al final de la sesión de pruebas. En el modelo completo de dolor inflamatorio inducido por adyuvantes de Freund, una inyección salina no cambia la latencia de escape en comparación con la línea de base. Los ratones inyectados con el adyuvante mostraron un aumento significativo en la latencia de escape cuatro días después de la inyección, pero solo cuando la altura de la sonda se elevó a cinco milímetros.

Este aumento de la latencia no se observó en ratones que recibieron carprofeno 90 minutos antes del comienzo de las pruebas. El modelo de lesión nerviosa evitada del dolor neuropático aumentó significativamente la latencia para escapar en comparación con la línea de base cuando la altura de la sonda se estableció en cinco milímetros. Este aumento se evitó mediante la administración del analgésico opioide buprenorfina 90 minutos antes de la prueba.

También se observó un aumento de la latencia de escape en ratones que no se sometieron a una ronda de referencia de pruebas de MCA antes de la lesión nerviosa. El aumento de la latencia de escape en ratones con lesión nerviosa evitada a cinco milímetros se evitó con gabapentina administrada 90 minutos antes de la prueba. En el modelo de fractura o fundición, la latencia para escapar de la cámara uno aumentó proporcionalmente a la altura de la sonda antes de la lesión.

Después de la lesión, la latencia se mantuvo sin cambios en cero milímetros, pero aumentó significativamente en la altura de la sonda de dos milímetros y cinco milímetros para los machos y la altura de la sonda de cinco milímetros para las hembras en comparación con la línea de base. Lo más importante que debe recordar al intentar este procedimiento es asegurarse de que todos los ratones estén habituados al dispositivo MCA y mantener una aleatorización y cegamiento adecuados durante todo el estudio. Este método se puede utilizar junto con otras medidas de sensibilidad al dolor, incluyendo von Frey o preferencia de lugar condicional.