Name: Modelo de aneurisma aórtico abdominal de ratón inducido por la aplicación perivascular de elastasa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Aprende un protocolo quirúrgico estandarizado para inducir aneurisma aórtico abdominal en ratones mediante elastasa porcina pancreática. Este método ofrece alta reproducibilidad, bajo costo y gran potencia estadística para investigar la patofisiología vascular y descubrir nuevas dianas terapéuticas en cardiología experimental.

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Agradecemos a la Unidad de Medicina animal de laboratorio de la Universidad de Michigan por su ayuda con la alimentación y la cría de animales. Este estudio está respaldado por NIH RO1 HL138139, NIH RO1 HL153710 a J. Zhang, NIH RO1 HL109946, RO1 HL134569 a Y.E. Chen y la subvención 20POST35110064 de la American Heart Association a G. Zhao.

Los protocolos de animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Michigan (PRO00010092). Para los experimentos se utilizaron ratones machos y hembras C57BL / 6J de tipo salvaje (WT), de ~ 7 semanas de edad.
1. Preparación animal
<ol><li>Alimente a los ratones con la dieta estándar de chow (ver Tabla de Materiales) antes y después de la cirugía. NOTA: Se pueden utilizar diferentes cepas y edades de ratones. Sin embargo, se recomienda una edad que oscila entre 5,5 y 12 semanas de edad para lograr la tasa de incidencia máxima.</li>
	<li>Para cada ratón, administrar 5 mg/kg de Carprofen por vía subcutánea 30 min antes de la inducción de la anestesia.</li>
	<li>Después de 30 min, administrar 100 mg/kg de ketamina y 5 mg/kg de xilazina mediante inyección intraperitoneal para inducir la anestesia.</li>
</ol>2. Preparación para la cirugía
<ol><li>Preparar el material quirúrgico.<ol>
<li>Cortar los guantes de nitrilo en tiras de 4 cm x 4 mm. Corta las almohadillas de algodón en trozos de 3 cm x 2 mm. Autoclave estos con otros instrumentos quirúrgicos, incluyendo tijeras quirúrgicas, fórceps de tejido y hemostáticos Halsted-Mosquito (ver Tabla de Materiales).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque el ratón en posición supina sobre una almohadilla de apósito absorbente estéril. Inmovilizar las patas delanteras y traseras con cinta quirúrgica.</li>
	<li>Use aplicadores con punta de algodón (consulte la Tabla de materiales) para cepillar la loción removedora de vello sobre el área abdominal media e inferior, luego frote el área con una gasa quirúrgica para eliminar el vello.</li>
	<li>Desinfecte el área quirúrgica al menos tres veces en un movimiento circular con aplicaciones alternas de alcohol al 70% y un exfoliante a base de yodo o a base de clorhexidina. Dejar secar.</li>
</ol>3. Procedimiento quirúrgico
<ol><li>Realice los siguientes pasos para acceder a la cavidad abdominal.<ol>
<li>Pruebe al ratón para detectar la falta de respuesta de pellizco en el dedo del pie antes de la incisión en la piel.</li>
		<li>Haga una incisión longitudinal de 2,5 cm en la piel a lo largo de la línea media del abdomen medio e inferior con tijeras quirúrgicas.</li>
		<li>Tire suavemente hacia arriba del músculo subyacente y haga una incisión longitudinal de 2,5 cm a lo largo de la línea alba para acceder a la cavidad abdominal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Exponer la aorta abdominal.<ol>
<li>Use aplicadores húmedos con punta de algodón para mover los intestinos y el estómago hacia el lado derecho del ratón. NOTA: Idealmente, esto expondrá el segmento infrarrenal de la aorta. Si la aorta es difícil de localizar, el riñón derecho y la arteria renal derecha pueden identificar la aorta (ya que el riñón derecho tiene una ubicación anatómica ligeramente más baja que el riñón izquierdo).</li>
		<li>Use fórceps para extraer suavemente el tejido conectivo que cubre la aorta abdominal y la vena cava inferior (IVC). NOTA: La aorta abdominal y la CIV están contenidas dentro de la misma vaina del vaso. Es innecesario eliminar todo el tejido conectivo, ya que la eliminación completa aumentaría el riesgo de dañar estos dos vasos.</li>
		<li>Use fórceps para diseccionar suavemente la parte posterior de la aorta abdominal y la CIV de los músculos subyacentes. NOTA: Las puntas de los fórceps deben ir a la parte posterior de la vaina transversalmente y crear un agujero en la fascia que conecte la vaina con los músculos subyacentes. Una vez hecho el agujero, extienda su tamaño soltando lentamente las pinzas.</li>
		<li>Coloque un trozo de la guantera de 4 cm x 4 mm (como se mencionó anteriormente, paso 2.1.1) a través de la parte posterior de la aorta abdominal y la CIV, luego enderece la raya. Coloque la raya a ~ 0.5 cm de distancia de la arteria renal derecha. NOTA: Asegúrese de que el orificio sea lo suficientemente grande como para que la fascia circundante no tuerza la raya.</li>
		<li>Sobre la raya, coloque un trozo de algodón de 3 cm x 2 mm a través de la parte posterior de la aorta abdominal y el IVC, luego enderece la almohadilla de algodón.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incubar la elastasa.<ol>
<li>Use una pipeta para dejar caer 30 μL de elastasa pancreática porcina (actividad enzimática total de 1.8 unidades, consulte la Tabla de materiales) sobre el segmento de la aorta sobre la almohadilla de algodón, luego envuelva la almohadilla de algodón y la raya alrededor de la aorta y la IVC. Enjuague un trozo de gasa de 10 cm x 10 cm con solución salina estéril al 0,9% y colóquelo sobre el abdomen. NOTA: La gasa solo necesita enjuague parcial, ya que exagerar correría el riesgo de diluir la elastasa debajo.</li>
		<li>Después de 30 minutos, retire la raya y la almohadilla de algodón con fórceps.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cierre la cavidad abdominal siguiendo los pasos a continuación.<ol>
<li>Irrigar la aorta y la cavidad abdominal con 500 μL de solución salina estéril al 0,9%. Use una gasa de 10 cm x 10 cm para absorber la solución salina restante.</li>
		<li>Reaproximar las capas musculares con una sutura de monofilamento no absorbible 6-0.</li>
		<li>Cierre la piel con 3-4 suturas de monofilamentos no absorbibles interrumpidas 6-0.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Cuidados postoperatorios
<ol><li>Administrar 5 mg/kg de carprofeno por vía subcutánea en el postoperatorio día 1.</li>
	<li>Retire las suturas de la piel en el postoperatorio Día 10.</li>
</ol>5. Medición del diámetro del aneurisma de la aorta abdominal
<ol><li>Sacrificar a los ratones por sobredosis de CO2 en el día 14 postoperatorio. Esto representa el punto temporal de la dilatación máxima.</li>
	<li>Acceda a la cavidad abdominal como se describe en el paso 3.1.</li>
	<li>Realizar perfusión vascular inyectando 10 mL de solución salina al 0,9% en la circulación a través del ventrículo izquierdo.</li>
	<li>Exponer el segmento infrarrenal de la aorta abdominal como se describe en los pasos 3.1-3.2. Retire con cuidado el tejido conectivo circundante y separe la aorta abdominal de la IVC.</li>
	<li>Mide el diámetro de la aorta abdominal con una pinza.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice%3A+Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical practice: Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371 (22), 2101-2108 (2014).</li>
<li>Karthikesalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+from+ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+Clinical+lessons+from+a+comparison+of+outcomes+in+England+and+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mortality from ruptured abdominal aortic aneurysms: Clinical lessons from a comparison of outcomes in England and the USA.</a> Lancet. 383 (9921), 963-969 (2014).</li>
<li>Noel, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruptured+abdominal+aortic+aneurysms%3A+The+excessive+mortality+rate+of+conventional+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ruptured abdominal aortic aneurysms: The excessive mortality rate of conventional repair.</a> Journal of Vascular Surgery. 34 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Lederle, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rupture+rate+of+large+abdominal+aortic+aneurysms+in+patients+refusing+or+unfit+for+elective+repair%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Rupture rate of large abdominal aortic aneurysms in patients refusing or unfit for elective repair.</a> JAMA. 287 (22), 2968-2972 (2002).</li>
<li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+Final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22National+Vital+Statistics+Reports%22%5BJournal%5D)">Deaths: Final data for 2009.</a> National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1(2011).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+abdominal+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Atherosclerosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of abdominal aortic aneurysm formation.</a> Current Atherosclerosis Reports. 4 (3), 222-227 (2002).</li>
<li>Quintana, R. A., Taylor, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of aortic aneurysm formation.</a> Circulation Research. 124 (4), 607-618 (2019).</li>
<li>Kuivaniemi, H., Ryer, E. J., Elmore, J. R., Tromp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Understanding the pathogenesis of abdominal aortic aneurysms.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 13 (9), 975-987 (2015).</li>
<li>Trollope, A., Moxon, J. V., Moran, C. S., Golledge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+and+their+role+in+furthering+management+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal models of abdominal aortic aneurysm and their role in furthering management of human disease.</a> Cardiovascular Pathology. 20 (2), 114-123 (2011).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Senemaud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+relevance+and+recent+advances+of+animal+models+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Translational relevance and recent advances of animal models of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (3), 401-410 (2017).</li>
<li>Lysgaard Poulsen, J., Stubbe, J., Lindholt, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+used+to+explore+abdominal+aortic+aneurysms%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Animal models used to explore abdominal aortic aneurysms: A systematic review.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 52 (4), 487-499 (2016).</li>
<li>Tsui, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Cardiovascular+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Experimental models of abdominal aortic aneurysms.</a> Open Cardiovascular Medicine Journal. 4, 221-230 (2010).</li>
<li>Manning, M. W., Cassi, L. A., Huang, J., Szilvassy, S. J., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%3A+Fresh+insights+from+a+novel+animal+model+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms: Fresh insights from a novel animal model of the disease.</a> Vascular Medicine. 7 (1), 45-54 (2002).</li>
<li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> Journal of Surgical Research. 99 (2), 371-376 (2001).</li>
<li>Allaire, E., Guettier, C., Bruneval, P., Plissonnier, D., Michel, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+arterial+grafts%3A+Morphologic+characteristics+of+aortic+isografts%2C+allografts%2C+and+xenografts+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Cell-free arterial grafts: Morphologic characteristics of aortic isografts, allografts, and xenografts in rats.</a> Journal of Vascular Surgery. 19 (3), 446-456 (1994).</li>
<li>Anidjar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-981 (1990).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+modulate+the+pathogenesis+of+elastase-induced+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mast cells modulate the pathogenesis of elastase-induced abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 117 (11), 3359-3368 (2007).</li>
<li>Bhamidipati, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+murine+model+of+aortic+aneurysms+using+peri-adventitial+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase.</a> Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).</li>
<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+%28gelatinase+B%29+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li>
<li>Tanaka, A., Hasegawa, T., Chen, Z., Okita, Y., Okada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rat+model+of+abdominal+aortic+aneurysm+using+a+combination+of+intraluminal+elastase+infusion+and+extraluminal+calcium+chloride+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel rat model of abdominal aortic aneurysm using a combination of intraluminal elastase infusion and extraluminal calcium chloride exposure.</a> Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1423-1432 (2009).</li>
<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+surgical+modifications+to+the+classic+elastase+perfusion+aneurysm+model+enable+haemodynamic+alterations+and+extended+elastase+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four surgical modifications to the classic elastase perfusion aneurysm model enable haemodynamic alterations and extended elastase perfusion.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 56 (1), 102-109 (2018).</li>
<li>Liang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KLF11+protects+against+venous+thrombosis+via+suppressing+tissue+factor+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">KLF11 protects against venous thrombosis via suppressing tissue factor expression.</a> Thrombosis and Haemostasis. , (2021).</li>
<li>Marinov, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+the+infusion+of+elastase+in+the+abdominal+aorta+of+the+Yucatan+miniature+swine+consistently+produce+experimental+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Can the infusion of elastase in the abdominal aorta of the Yucatan miniature swine consistently produce experimental aneurysms.</a> Journal of Investigative Surgery. 10 (3), 129-150 (1997).</li>
<li>Shannon, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+model+of+infrarenal+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Visualized Experiments. (153), e60169(2019).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El modelo AAA inducido por elastasa fue reportado por primera vez por Anidjar et al. usando ratas en 199017. Una variedad de versiones modificadas se han introducido en los últimos treinta años, junto con una mejora significativa en las técnicas quirúrgicas 19,20,21,22. Cientos de institutos utilizan modelos AAA inducidos por elastasa como el segundo modelo experimental ...

El aneurisma aórtico abdominal (AAA) se define como una dilatación segmentaria de la aorta abdominal con al menos un aumento del 50% del diámetro del vaso1. Aaa es potencialmente fatal, ya que la ruptura puede resultar en una tasa de mortalidad extremadamente alta, incluso con la intervención 2,3,4. Se ha informado que AAA es responsable de aproximadamente 13,000 muertes anuales en los Estados Unidos, lo que la convierte en la10ª causa principal de muerte 1,5.
La patogénesis de AAA aún no se entiende completamente 6,7,8. Para investigar el mecanismo molecular de AAA y probar posibles dianas terapéuticas, se han establecido varios modelosexperimentales de AAA 9,10. Los modelos de roedores de AAA incluyen modelos de elastasa, cloruro de calcio, angiotensina II y xenoinjerto, entre los cuales el modelo AAA inducido por elastasa es el segundo modelo más utilizado 10,11,12,13,14,15,16,17. Este modelo implica la infusión directa o la aplicación de elastasa pancreática porcina (EPP) en el segmento infrarrenal de la aorta. La penetración de la elastasa en la capa medial de la aorta provocará la degradación de las láminas elásticas y la infiltración de células inflamatorias, lo que conllevará la pérdida de la integridad de la pared aórtica y la posterior dilatación de la aorta abdominal 7,18. El modelo AAA inducido por elastasa fue reportado por primera vez por Anidjar et al. en 1990 utilizando ratas, en las que un segmento aislado de la aorta fue perfundido con elastasa17. Más tarde, en 2012, Bhamidipati et al.19 informaron de un modelo modificado que utilizaba una aplicación periadventitial de EPP. Hoy en día, la mayoría de las cirugías para el modelo AAA inducido por elastasa están inspiradas en el grupo de Bhamidipati y se realizan con la aplicación externa en lugar de la perfusión intraluminal de EPP. Aunque la aplicación externa tiene menos requerimiento de habilidades quirúrgicas finas, la tasa de incidencia de AAA es relativamente menor y el tamaño algo menor que el de la perfusión intraluminal11,19.
Aunque se usa ampliamente en estudios AAA, el modelo AAA inducido por elastasa posee ciertas limitaciones. Una advertencia de este modelo son las variaciones inevitables de cómo se realiza la cirugía, lo que puede llevar a la cuestión de la reproducibilidad. Por ejemplo, puede existir la diferencia en el procedimiento quirúrgico con respecto a cómo se aísla el segmento infrarrenal de la aorta y qué parte del segmento se selecciona para la aplicación de EPP entre diferentes laboratorios. La actividad enzimática del EPI y la duración del tiempo de incubación del EPI también pueden variar. Estos, sin embargo, son todos determinantes esenciales que afectan la eventual tasa de formación de AAA y el diámetro del aneurisma. La variación de estos determinantes críticos hace que la comparación de datos de estudios AAA de diferentes grupos que utilizan este modelo sea muy difícil. Por lo tanto, se necesita un procedimiento quirúrgico estandarizado como una herramienta para obtener resultados comparables de varias instituciones.
Este artículo describe un protocolo quirúrgico estandarizado para el modelo AAA inducido por elastasa a través de la aplicación directa de EPP a la adventicia de la aorta abdominal infrarrenal en ratones. También se discutirán los detalles sobre el material quirúrgico y los procedimientos esenciales para la generación exitosa y robusta de AAA en ratones que utilizan este modelo.

<table><tbody><tr><td>Sutura monofilamento no absorbible 6-0</td><td>Pro Advantage P420697</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis Inc.</td><td>NDC: 54771-8507</td><td></td></tr><tr><td>Chow Diet</td><td>LabDiet</td><td>3005659-220</td><td>PicoLab 5L0D</td></tr><tr><td>Aplicador de Algodón</td><td>Dynarex</td><td>4303</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla de Algodón</td><td>Rael</td><td>UPC: 810027130969</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prisma 8</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td></td><td>Versión 8.4.3</td></tr><tr><td>Pinzas Grarfe</td><td>Fine Science Tools</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Halsted Mosquito Hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>NDC: 42023-0115-10</td><td></td></tr><tr><td>Guantes de nitrilo</td><td>Fisherbrand</td><td>19-130-1597</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Thermo Fisher 15140122</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elastasa pancreática porcina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>Fine Science Tools</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina estéril al 0,9%</td><td>Baxter</td><td>2B1324X</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina</td><td>Akorn</td><td>NDC: 59399-110-20</td><td></td></tr></tbody></table>

modelo de aneurisma aórtico abdominal de ratón inducido por la aplicación perivascular de elastasa

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

El aneurisma aórtico abdominal (AAA), aunque principalmente asintomático, es potencialmente mortal ya que la ruptura de AAA generalmente tiene un resultado devastador. Actualmente, hay varios modelos experimentales distintos de AAA, cada uno enfatizando un aspecto diferente en la patogénesis de AAA. El modelo AAA inducido por elastasa es el segundo modelo AAA de roedores más utilizado. Este modelo implica la infusión directa o la aplicación de elastasa pancreática porcina (EPP) en el segmento infrarrenal de la aorta. Debido a los desafíos técnicos, la mayoría de los modelos AAA inducidos por elastasa hoy en día se realizan con la aplicación externa en lugar de una infusión intraluminal de EPP. La infiltración de elastasa causará la degradación de las láminas elásticas en las capas mediales, lo que resultará en la pérdida de la integridad de la pared aórtica y la posterior dilatación de la aorta abdominal. Sin embargo, una desventaja del modelo AAA inducido por elastasa es la variación inevitable de cómo se realiza la cirugía. Específicamente, la técnica quirúrgica de aislar el segmento infrarrenal de la aorta, el material utilizado para el envoltorio de la aorta y la incubación del EPP, la actividad enzimática del EPP y la duración del tiempo de aplicación del EPP pueden ser determinantes importantes que afectan la eventual tasa de formación de AAA y el diámetro del aneurisma. En particular, la diferencia en estos factores de diferentes estudios sobre AAA puede conducir a problemas de reproducibilidad. Este artículo describe un proceso quirúrgico detallado del modelo AAA inducido por elastasa a través de la aplicación directa de EPP a la adventicia de la aorta abdominal infrarrenal en el ratón. Después de este procedimiento, se puede lograr una tasa de formación AAA estable de alrededor del 80% en ratones machos y hembras. La consistencia y reproducibilidad de los estudios AAA que utilizan un modelo AAA inducido por elastasa se puede mejorar significativamente mediante el establecimiento de un procedimiento quirúrgico estándar.

Un total de veintitrés ratones de tipo salvaje (WT) de 7 semanas de edad, incluidas 12 hembras y 11 machos, fueron operados siguiendo el protocolo presentado. La tasa de supervivencia fue del 100% (excluida la mortalidad quirúrgica). El diámetro máximo de la aorta abdominal se midió mediante una pinza.
La AAA se definió como la dilatación de la aorta abdominal con un aumento del 50% en el diámetro de los vasos. Por lo tanto, se seleccionó un aumento del 50% en el diámetro máximo de la aorta ab...

El presente protocolo describe un método quirúrgico estandarizado para el modelo AAA inducido por elastasa a través de la aplicación directa de elastasa a la adventicia de la aorta abdominal infrarrenal en ratones.

Modelo de aneurisma aórtico abdominal de ratón inducido por la aplicación perivascular de elastasa

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

Este es un protocolo estandarizado para el aneurisma aórtico abdominal inducido por elastasa, que mejoraría en gran medida la reproducibilidad y la consistencia de los estudios que utilizan este modelo. Esta técnica tiene una tasa de inducción consistente de aneurisma aórtico abdominal. También posee la ventaja de los bajos gastos y el corto tiempo de operación, lo que resultará en un mayor poder estadístico y la reproducibilidad.Debe asegurarse de que se hayan eliminado los tejidos conectivos que cubren la aorta para que la elastasa tenga una mejor oportunidad de penetración, pero tenga cuidado de no dañar los vasos. Para comenzar, administre cinco miligramos por kilogramo de carprofeno por vía subcutánea, 30 minutos antes de la inducción de la anestesia. Pruebe el ratón anestesiado para detectar la falta de respuesta de pellizco del dedo del pie antes de la incisión en la piel.Haga una incisión longitudinal de 2,5 centímetros en la piel, a lo largo de la línea media del abdomen medio e inferior. Tire suavemente del músculo subyacente y haga una incisión longitudinal de 2,5 centímetros a lo largo de la línea alba. Use aplicadores húmedos con punta de algodón para mover los intestinos y el estómago hacia el lado derecho del ratón y acceder a la cavidad abdominal.Use fórceps para extraer suavemente el tejido conectivo que cubre la aorta abdominal y la vena cava inferior. Use fórceps para diseccionar suavemente la parte posterior de la aorta abdominal y la vena cava inferior de los músculos subyacentes. Coloque un trozo de franja guante de cuatro centímetros por cuatro milímetros a través de la parte posterior de la aorta abdominal y la vena cava inferior, y enderece la raya.Coloque la raya aproximadamente a 0,5 centímetros de distancia de la arteria renal derecha. Por encima de la raya, coloque un trozo de almohadilla de algodón de tres centímetros por dos milímetros a través de la parte posterior de la aorta abdominal y la vena cava inferior. Luego, endereza la almohadilla de algodón.Para incubar la elastasa, use una pipeta para dejar caer 30 microlitros de elastasa pancreática porcina sobre el segmento de la aorta por encima de la almohadilla de algodón. Envuelva la almohadilla de algodón y la raya alrededor de la aorta y la vena cava inferior. Enjuague un trozo de 10 centímetros por una gasa de 10 centímetros con solución salina estéril al 0,9% y colóquelo sobre el abdomen.Después de 30 minutos, retire la raya y la almohadilla de algodón con fórceps. Irrigar la aorta y la cavidad abdominal con 500 microlitros de solución salina estéril al 0,9%. Use una gasa para absorber la solución salina restante.Vuelva a aproximar las capas musculares con una sutura de monofilamento no absorbible 6-0. Luego, cierre la piel con tres a cuatro interrumpidos en 6-0 suturas de monofilamento no absorbibles. La tasa de incidencia de desarrollar un aneurisma aórtico abdominal en el día 14 postoperatorio fue del 91,7% para las hembras, mientras que la tasa de incidencia para los animales machos fue del 72,7%Entre los 19 animales en los que se desarrolló el aneurisma aórtico abdominal, se observó un aumento de 1,7 veces y 1,6 veces del diámetro máximo de la aorta abdominal, en hembras y machos respectivamente, en comparación con los controles no quirúrgicos.Se muestran imágenes representativas de la aorta de grupos no quirúrgicos y quirúrgicos en un día 14 postoperatorio. Esta técnica sirvió como una herramienta potencial para ayudar a diseccionar la fisiopatología del triple A y ayudar al descubrimiento de nuevas dianas terapéuticas potenciales.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video muestra cómo inducir a los aneurismas de aorta abdominal (AAA) en ratones a través de la infusión intraluminal transitoria de la elastasa pancreática porcina en el segmento infrarrenal de la aorta abdominal. El modelo tiene la capacidad de agregar visión completa de la biopatología de la AAA, debido a la aparición de numerosos transgénicos y ratones knock-out de genes.

Creación de murino Experimental aneurismas de aorta abdominal con elastasa

Describimos un protocolo quirúrgico para inducir consistentemente aneurismas de la aorta torácica descendentes robustos en ratones. El procedimiento consiste en la toracotomía izquierda, la exposición a la aorta torácica y la colocación de una esponja empapada en elastasa pancreática porcina en la pared aórtica.

Modelo Quirúrgico Murino de Aneurisma aórtico torácico descendente fortuito tópico

Este protocolo describe un modelo de ratón de aneurisma aórtico abdominal (AAA) inducido por fosfato de calcio para estudiar las características patológicas y los mecanismos moleculares de los AAA.

Un modelo de aneurisma aórtico abdominal de ratón inducido por fosfato de calcio

Este manuscrito presenta un protocolo para establecer un modelo de aneurisma de aorta abdominal en ratón utilizando cloruro de calcio y elastasa, combinando las ventajas de los métodos de modelado anteriores. Este modelo se puede utilizar para investigar los mecanismos fisiopatológicos subyacentes a los aneurismas de aorta abdominal.

Un modelo de aneurisma de aorta abdominal de ratón por infiltración periadventicial de cloruro de calcio y elastasa

Este protocolo describe un enfoque quirúrgico metódico para modelar aneurismas de aorta abdominal avanzados en ratones mediante una combinación de aplicación directa de elastasa a la aorta infrarrenal y administración de ß-aminopropionitrilo a través del agua potable.

Modelado avanzado de aneurisma de aorta abdominal en ratones mediante combinación de elastasa tópica y ß-aminopropionitrilo oral

El presente protocolo describe un método quirúrgico estandarizado para la inducción de aneurismas carotídeos en un modelo murino a través de una sola operación quirúrgica.

Un modelo murino de formación de aneurismas carotídeos

Este protocolo proporciona un método repetible y fiable para inducir aneurismas de la aorta abdominal (AAA) en ratones C57BL/6 mediante sensibilización con elastina y aplicación de elastasa perivascular, como un modelo AAA que incorpora un componente de sensibilización inmune.

Creación fiable de un modelo de aneurisma aórtico abdominal murino utilizando sensibilización con elastina y elastasa perivascular

Ortotópico modelos animales de cáncer de ovario reproducir mejor las enfermedades humanas y por lo tanto, mejorar nuestra comprensión de la progresión del cáncer y la respuesta del tumor a la terapia. Un modelo de ratón recibe una inyección intrabursal de luciferasa que expresan las células tumorales de ovario. El tratamiento se administra a través de una sonda nasogástrica. El crecimiento del tumor está controlado...

En vivo de imágenes y tratamientos terapéuticos en un modelo de ratón ortotópico de cáncer de ovario

Generación de células madre pluripotentes inducidas (IPSC) Líneas produce líneas con diferente potencial de desarrollo aún cuando pasan las pruebas estándar de pluripotencia. Aquí se describe un protocolo para producir ratones totalmente derivadas de iPS, que define las líneas de IPSC como poseedor completo...

Generación de ratones derivados de células madre pluripotentes inducidas

La naturaleza de las interacciones entre las células madre hematopoyéticas y progenitoras (hspCs) y nichos de la médula ósea es poco conocido. Modificaciones de hardware personalizados y un protocolo de adquisición de múltiples pasos permiten el uso de dos fotones y microscopía confocal a la imagen ex vivo HSPCs etiquetados alojados dentro de las áreas de la médula ósea, las interacciones de seguimiento y el movimiento.

En Vivo Tracking 4-Dimensional de madre hematopoyéticas y células progenitoras en ratones adultos de calota de Médula Ósea

Aprende un protocolo quirúrgico estandarizado para inducir aneurisma aórtico abdominal en ratones mediante elastasa porcina pancreática. Este método ofrece alta reproducibilidad, bajo costo y gran potencia estadística para investigar la patofisiología vascular y descubrir nuevas dianas terapéuticas en cardiología experimental.

Modelo de aneurisma aórtico abdominal de ratón inducido por la aplicación perivascular de elastasa

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