Name: Microdisección láser para aplicaciones de un solo tejido independientes de la especie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-31T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Aprende microdisección láser con CEL-Seq2 para análisis transcriptómico de tejidos individuales en Caenorhabditis elegans. Este método permite estudiar expresión génica en especies no modelo sin herramientas genéticas específicas.

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Este trabajo fue financiado por las subvenciones NIH (R01GM141395) y NSF (1656736) a DF y nih fellowship (F32GM136170) a AW. La Figura 1 fue creada con la ayuda de BioRender.com.

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Todos los autores declaran que no tienen conflictos de intereses.

Pasos críticos del método Si se realiza correctamente, el método descrito aquí obtendrá perfiles de ARN robustos con un número relativamente pequeño de muestras diseccionadas con láser (70 puntas de cola en este ejemplo). Sin embargo, para las muestras de animales en desarrollo, la sincronización estrecha es fundamental para reducir la variabilidad entre las muestras. Por esta razón, el protocolo recomienda el método de sombreado para la sincronización de gusanos. Aquí, el investigador puede determina...

Los nematodos, particularmente los nematodos rabdíidos relacionados con el sistema modelo Caenorhabditis elegans, son un maravilloso grupo de animales para la biología evolutiva del desarrollo (EDB) por muchas razones 1,2. Las ventajas incluyen su pequeño número de células, linajes celulares definidos y consistentes, transparencia y facilidad de cultivo y cría. También hay muchos recursos disponibles, incluidos genomas de alta calidad para múltiples especies, y para C. elegans, amplias herramientas genéticas moleculares y conocimientos sobre desarrollo, genética, anatomía y fisiología 3,4,5,6.
Al igual que con muchos otros organismos, la capacidad de caracterizar la dinámica del transcriptoma en tejidos individuales o células individuales ha revolucionado el análisis del desarrollo en C. elegans 7,8,9,10. Ser capaz de comparar transcriptomas unicelulares entre nematodos transformaría de manera similar EDB utilizando estos organismos. Por ejemplo, tales comparaciones proporcionarían información sobre cómo las redes reguladoras de genes han evolucionado para los caracteres (rasgos) que se han conservado, para los caracteres que han divergido o para los caracteres que evolucionaron de forma independiente.

Sin embargo, aislar tejidos o células particulares de los nematodos es uno de los grandes desafíos. Para muchos organismos, las células individuales pueden disociarse de los tejidos y cosecharse de manera imparcial o pueden etiquetarse con la expresión específica del tejido de una proteína fluorescente y clasificarse mediante clasificación celular activada por fluorescencia (FACS)11. En C. elegans, el aislamiento de células de alto rendimiento (HTP) se ha limitado principalmente a embriones porque la cutícula externa dura (y el esqueleto hidrostático) ha obstaculizado el aislamiento celular de larvas y adultos. Para sortear este desafío, algunos métodos han empleado herramientas genéticas en gusanos C. elegans completos, como el etiquetado de ARNm específico del tejido12 y las comparaciones de expresión diferencial entre el tipo salvaje y los mutantes que afectan a un tipo celular13. Métodos más recientes han superado el desafío disolviendo la cutícula para aislar núcleos14 o células enteras 8,9,15. Sin embargo, el aislamiento celular y el cultivo celular tienen las desventajas obvias de que las células se eliminan de su contexto anatómico o de desarrollo natural, por ejemplo, lejos de la señalización célula-célula y el contacto con la matriz extracelular, que se espera que afecten el perfil de expresión génica15. Además, las herramientas genéticas y los marcadores específicos de tejidos son específicos de la especie (es decir, solo se pueden usar en C. elegans).
LMD proporciona un método alternativo para aislar tejidos sin interrumpir el contexto natural de las células. Significativamente para EDB, LMD también permite comparar transcriptomas de tejidos homólogos de diferentes especies sin la necesidad de kits de herramientas genéticas específicas de la especie si se dispone de secuencias del genoma o del transcriptoma completo de estas especies. LmD consiste en dirigirse a los tejidos mediante la observación microscópica directa y el uso de una microhaz láser, integrada en la óptica del microscopio, para cortar y cosechar (capturar) el tejido de interés16. Las limitaciones de LMD son que no es propicio para enfoques muy HTP (aunque los perfiles de transcripción para las puntas de la cola, como se describe en este protocolo, eran robustos con ~ 70 muestras), ciertas muestras pueden ser difíciles de diseccionar, y los cortes se limitan a la precisión del láser y lo que se puede visualizar en el microscopio.
El propósito del presente protocolo es describir cómo lmD, seguido de ARN-Seq de un solo tejido, se puede utilizar para obtener datos de transcriptoma específicos de estadios y tejidos de nematodos. Específicamente, demuestra LMD para aislar las puntas de la cola de larvas de cuarta etapa (L4) de C. elegans. Sin embargo, este método se puede adaptar a otros tejidos y, por supuesto, a diferentes especies.
En C. elegans, hay 4 células que hacen la punta de la cola tanto en machos como en hermafroditas. Durante la etapa L4 en los machos, pero no en los hermafroditas, las células de la punta de la cola cambian su forma y migran hacia arriba y hacia adentro. Este proceso también ocurre en algunas pero no en todas las demás especies de nematodos rabdítidos. Por lo tanto, la punta de la cola es un buen modelo para la evolución de la morfogénesis dimórfica sexual. Debido a su posición, la punta de la cola también es fácil de aislar por LMD.
Para obtener perfiles de transcriptoma a partir de puntas de cola, el presente protocolo utiliza CEL-Seq2, un método de ARN-seq desarrollado para células individuales17,18. Este método tiene varias ventajas para los tejidos derivados de LMD. CEL-Seq2 es altamente sensible y eficiente, utilizando identificadores moleculares únicos (UMI) para permitir la cuantificación directa de las lecturas de ARNm, la transcripción in vitro para garantizar la amplificación lineal y el código de barras que permite la multiplexación de muestras de tejido individuales. La única limitación de CEL-Seq2 es que las lecturas recuperadas están sesgadas al extremo 3' de los ARNm, y la mayoría de las isoformas no se pueden distinguir.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 0,5 y micro; Correderas de vidrio de membrana M PEN sin 11600288</td><td>Leica</td><td></td> sin ARNasa <td>para LMD</td></tr><tr><td>500 y micro; L Tubos de PCR (sin nucleasas)</td><td>Axygen</td><td>732-0675</td><td>para cortar las puntas de la cola en</td></tr><tr><td>Microscopio compuesto con objetivo 40x y DIC</td><td>cualquiera</td><td></td><td>para comprobar la edad de los gusanos</td></tr><tr><td>Humidificador de sobremesa</td><td>cualquiera</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección con base de luz transmitida</td><td>cualquiera</td><td></td><td>para todo el trabajo con gusanos</td></tr><tr><td>pipetas de vidrio pasteur</td><td>cualquier</td><td></td><td>mango de pico de gusano</td></tr><tr><td>portaobjetos y cubreobjetos de vidrio</td><td>para</td><td></td><td>comprobar la edad de los gusanos</td></tr><tr><td>Sistema de microdisección LMD6</td><td>Leica</td><td>múltiple</td><td>para cortar las puntas de la cola</td></tr><tr><td>Tubos LoBind 0,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22431005</td><td></td></tr><tr><td>M9 Receta de tampón</td><td></td><td></td><td>en WormBook</td></tr><tr><td>Metanol 99.8%</td><td>Sigma</td><td>322415</td><td>para arreglar gusanos</td></tr><tr><td>Medio de crecimiento NGM</td><td>US Biológico</td><td>N1000</td><td>Es necesario añadir tampones y sales: Receta en WormBook</td></tr><tr><td>P10 pipeta de volumen variable</td><td>, p. ej., pipeta Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P1000 de volumen variable</td><td>, p. ej., pipeta Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2 de volumen variable</td>, <td>p. ej., puntas</td> de pipeta Gilson <td></td><td></td></tr><tr><td>1.000 y micro; L</td><td>cualquier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>punta de pipeta 1-10 y micro; L filtró</td><td>cualquier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>alambre de platino e iridio</td><td>Tritech</td><td>PT-9010</td><td>para hacer que la selección de gusanos</td></tr> sea <tr><td>estéril y sin nucleasas 1 mL tubos de centrfuge</td><td>cualquiera</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P9416</td><td>Agregue una cantidad muy pequeña al tampón M9 para evitar que los gusanos se peguen a las puntas de pipeta</td></tr><tr><td>ventiladas Placas de Petri de plástico de 6 mm</td><td>cualquiera</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Para CEL-Seq2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4200 Sistema TapeStation con reactivos para la detección de ARN y ADN de alta sensibilidad</td><td>Sistema de electroforesis automatizado</td><td>Aligent</td><td></td></tr><tr><td>Perlas AMPure XP Perlas</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63880</td><td>de limpieza de ADN</td></tr><tr><td>Tampón de unión de perlas &nbsp; 20% PEG8000, 2,5 M de NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CEL-Seq2 cebadores (ver Tabla S1)</td><td>Sigma Genosys Mastercycler Nexus GX2 Eppendorf</td><td>6335000020</td><td>Termociclador con tapa y bloque programables para 200 &micro; Tubos de L.</td></tr><tr><td>ADN polimerasa I (E. coli)</td><td>Invitrogen</td><td>18052-025</td><td></td></tr><tr><td>dNTP mix 10 mM</td><td>any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>E. coli ADN ligasa</td><td>Invitrogen</td><td>18052-019</td><td></td></tr><tr><td>etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ExoSAP-IT para PCR Limpieza de productos</td><td>Affymetrix</td><td>78200</td><td>solución de exonucleasa</td></tr><tr><td>MEGAscript T7 Kit de transcripción</td><td>Ambion</td><td>AM1334</td><td>Para el paso 4.6.1</td></tr><tr><td>Agua libre de nucleasas</td>, <td>cualquier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phusion Mezcla maestra de PCR de alta fidelidad con tampón HF</td><td>NEB</td><td>M0531</td><td>Mezcla de PCR paso 4.9.7</td></tr><tr><td>hexámero aleatorio RT cebador GCCTTGGCACCCGAGAATTCCA NNNNNN</td><td>IDT</td><td></td><td>un cebador con 6 nucleótidos que son</td></tr><tr><td>ARN aleatorio Tampón de fragmentación</td><td>NEB</td><td>E6150S</td> Tampón de <td></td></tr><tr><td>parada de fragmentación de ARN</td><td>NEB</td><td>E6150S</td> Imprimadores de índice <td></td></tr><tr><td>de PCR de ARN (RPI1 &ndash; RPI48)</td><td>Illumina, NEB o IDT</td><td></td><td>RPIX en el paso del protocolo 4.9.7, secuencias disponibles de Illumina</td></tr><tr><td>RNAClean XP beads</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63987</td><td></td></tr><tr><td>RNase AWAY Surface Decontaminant</td><td>Thermo Scientific</td><td>7000TS1</td><td>o cualquier otro producto similar</td></tr><tr><td>RNaseH (E. coli)</td><td>Invitrogen</td><td>18021-071</td><td></td></tr><tr><td>RNaseOUT Recombinante Inhibidor de la ribonucleasa</td><td>Invitrogen</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de segunda cadena</td><td>Invitrogen</td><td>10812-014</td><td></td></tr><tr><td>Superscripit II</td><td>Invitrogen</td><td>18064-014</td><td>transcriptasa inversa</td></tr></tbody></table>

microdisección láser para aplicaciones de un solo tejido independientes de la especie

Laser Microdissection for Species-Agnostic Single-Tissue Applications

Las metodologías unicelulares han revolucionado el análisis de los transcriptomas de tipos celulares específicos. Sin embargo, a menudo requieren "kits de herramientas" genéticos específicos de la especie, como promotores que impulsan la expresión específica de proteínas fluorescentes en los tejidos. Además, los protocolos que interrumpen los tejidos para aislar células individuales eliminan las células de su entorno nativo (por ejemplo, la señalización de los vecinos) y pueden provocar respuestas al estrés u otras diferencias con los estados de expresión génica nativa. En el presente protocolo, la microdisección láser (LMD) está optimizada para aislar las puntas individuales de la cola de los nematodos para el estudio de la expresión génica durante la morfogénesis de la punta de la cola masculina.
LMD permite el aislamiento de una porción del animal sin la necesidad de interrupción celular o kits de herramientas específicos de la especie y, por lo tanto, es aplicable a cualquier especie. Posteriormente, los protocolos de preparación de la biblioteca de ARN-seq de una sola célula, como CEL-Seq2, se pueden aplicar a tejidos individuales aislados de LMD y analizarse utilizando tuberías estándar, dado que se dispone de un genoma o transcriptoma bien anotado para la especie. Dichos datos se pueden utilizar para establecer qué tan conservados o diferentes son los transcriptomas que subyacen al desarrollo de ese tejido en diferentes especies.
Las limitaciones incluyen la capacidad de cortar el tejido de interés y el tamaño de la muestra. Un análisis de potencia muestra que se requieren tan solo 70 puntas de cola por condición para obtener un 80% de potencia. Se necesita una estrecha sincronización del desarrollo para obtener este número de animales en la misma etapa de desarrollo. Por lo tanto, también se describe un método para sincronizar animales a intervalos de 1 h.

Después de la microdisección de captura láser, puntas de cola individuales de machos y hermafroditas en 4 puntos de tiempo (L3 22 h después de la eclosión; L4 24, 26 y 28 h después de la eclosión) se prepararon para la secuenciación de ARN utilizando el protocolo CEL-Seq2. Los cebadores CEL-Seq2 contienen códigos de barras únicos que permiten identificar bioinformáticamente las lecturas de secuenciación de una muestra en particular (en este caso, una punta de cola individual). Los datos de secuenciación se generaron con ...

Se describe un protocolo que utiliza la microdisección láser para aislar tejidos de nematodos individuales para la secuenciación de ARN. El protocolo no requiere kits de herramientas genéticas específicas de la especie, lo que permite comparar los perfiles de expresión génica entre diferentes especies a nivel de muestras de un solo tejido.

Microdisección láser para aplicaciones de un solo tejido independientes de la especie

Single-cell methodologies have revolutionized the analysis of the transcriptomes of specific cell types. However, they often require species-specific ...

Combinamos la microdisección de captura láser con un protocolo de búsqueda de ARN de una sola célula llamado CEL-Seq2 para generar conjuntos de datos transcriptómicos para pequeñas muestras de tejido individuales. Esta técnica nos permite estudiar la expresión génica en tejidos o especies que no pueden ser estudiadas utilizando métodos tradicionales de clasificación celular. Además, proporciona más especificidad que un enfoque de ARN-seq a granel.Aquí demostramos esta técnica para las cuatro puntas de la cola celular de los machos y hermafroditas de cuarta etapa larval de C.elegans. Pero la belleza de este enfoque es que incluso se puede aplicar a especies no modelo. Raya Jallad, estudiante de doctorado de mi laboratorio y el Dr. Antonio Herrera, actualmente científico biomédico principal en la escuela Baylor en Chattanooga, Tennessee.Comience por pipetear suavemente uno o dos mililitros de amortiguador M9 contra la pared de la placa sin chorrear. Gire la placa para desalojar los gusanos. Retire y deseche todo el líquido y los gusanos colocando la punta de la pipeta contra la pared de la placa en el borde del agar para evitar agujeros.Este video muestra la placa antes de que las madres y las larvas sean eliminadas. Solo deben quedar embriones después de que se eliminen las madres y la larva. La larva L1 comenzará a aparecer después de la incubación durante una hora más o menos.Luego coloque la placa a 25 grados centígrados. Después de una hora, retire la placa de la incubadora. Deje caer cuidadosamente un mililitro de tampón M9 sobre el agar y gire la placa para desalojar los L1 pero no los embriones.Centrifugar el tubo y pipetear los L1 directamente sobre el césped bacteriano de una placa sembrada. Mantenga los gusanos a 25 grados centígrados. Bajo un microscopio de disección a un aumento de 30 a 50 X, comience a recoger los machos y los hermafroditas de las placas de sincronización en placas separadas no sembradas.Los machos se distinguen de los hermafroditas por la forma abultada y el color más claro de las colas masculinas en comparación con la forma puntiaguda y el color más oscuro de las colas hermafroditas. Lave los gusanos de la placa con uno o dos mililitros de tampón M9 usando una punta de pipeta prelavada con tampón M9 que contenga detergente al 0.01%. Transfiera los gusanos a un tubo centrífugo de un mililitro, gire durante un minuto y agregue un mililitro de tampón M9.De nuevo, gira durante un minuto. Añadir un mililitro de metanol helado al 70% y mezclar bien. Repita el lavado con un mililitro de metanol, mezcle bien.Girarlo durante un minuto y añadir 500 microlitros de 70% de metanol. Mézclelo y guárdelo a cuatro grados centígrados durante una hora o toda la noche. Pipete 20 microlitros de los gusanos fijos en el lado recubierto de un naftalato de polietileno o un portaobjetos de vidrio con membrana PEN.Espere a que el metanol se evapore. Retire el escudo de plástico sobre el escenario y haga clic en el botón de descarga con la flecha hacia arriba para cargar las correderas de membrana. Asegúrese de que la diapositiva esté completamente seca, voltee para que la membrana esté hacia abajo e inserte la diapositiva.Haga clic en continuar en la ventana de cambio de muestra. El soporte de la diapositiva se moverá. Luego reemplace el escudo de plástico, en la parte inferior de la pantalla, elija qué soporte deslizante contiene la diapositiva y haga clic en el botón de descarga con la flecha hacia abajo para cargar los tubos.Saque la bandeja y retire el bloque de tubo. Inserte las tapas de los tubos de cuatro tubos de PCR de 500 microlitros en el soporte y doble el tubo debajo. Devuelva el bloque a la bandeja y deslice la bandeja de nuevo en la etapa del microscopio.En la ventana emergente cambiar dispositivo colector, seleccione Tubos pcr y haga clic en Aceptar. Haga clic en la ubicación vacía del tubo en la parte inferior izquierda de la pantalla debajo de las tapas del tubo del dispositivo colector y en el panel de control del microscopio seleccione TLBF para la iluminación de campo brillante de luz transmitida. Usando la lente 2.5X, ajuste el enfoque hasta que los gusanos y la estructura superficial de la membrana PEN sean visibles.Cambie a la lente 20X y mueva el escenario a una región sin gusanos. Ajuste el enfoque de tal manera que las estructuras similares a burbujas en la membrana tengan un color amarillento para enfocar el láser en el plano focal correcto y luego establecer los parámetros del láser. Para las puntas de la cola, comience con la potencia 45 apertura 30 en velocidad 20.En el panel de control láser, seleccione calibrar y siga las instrucciones. A continuación, en la parte inferior de la pantalla en las tapas del tubo del dispositivo colector, haga clic en la posición A, en el lado derecho de la pantalla seleccione una sola forma, seguida de dibujar y cortar. A continuación, seleccione punto a punto y dibuje una línea.Haga clic en iniciar corte para que el láser corte a través de la membrana. Encuentra un gusano y cambia para moverte y cortar. Use el mouse para cortar la cola.Para recoger la muestra, cambie a la configuración de dibujo y corte con la función punto a punto y dibuje la forma para completar el corte de una sección de membrana. Seleccione el siguiente tubo en la tapa del tubo del dispositivo colector en la parte inferior de la pantalla y corte la siguiente punta de la cola. Una vez que se corten cuatro colas, descargue el bastidor del tubo haciendo clic en descargar con la flecha hacia abajo.Encuentre las secciones de membrana bajo un microscopio de disección y continúe con el procesamiento de muestras aguas abajo. Aquí secuenciación de ARN con CEL-Seq2. Pipete 1.2 microlitros de una mezcla maestra de imprimación CEL-Seq2 directamente sobre la muestra y cierre el tubo.Etiquete con el número de imprimación e inmediatamente coloque la tapa del tubo directamente sobre un trozo de hielo seco para congelar la muestra y evitar la degradación del ARN. Repetir hasta que se hayan recogido todas las muestras. Finalmente, guarde los tubos a menos 70 grados centígrados.Los hermafroditas de C.elegans L3 y los machos a las 21 a 23 horas después de la eclosión se pueden distinguir bajo un microscopio de disección por la morfología de sus colas. La historia de hermafrodita es estrecha, mientras que la de los machos está hinchada y parece clara. La apariencia de la estructura de deslizamiento de membrana PEN y la cola de gusano se muestra en estas imágenes.Aquí el enfoque es correcto para las lentes 20X y 40X en el microscopio. La cola diseccionada cortada imparcialmente la membrana PEN son visibles aquí. Después de cerrar el espacio en el corte, la pieza de membrana caerá en la tapa del tubo debajo de la diapositiva.Aquí se muestra una tapa de tubo con una sección de membrana PEN que contiene una punta de cola diseccionada. La imagen gráfica representa el identificador molecular único transformado en logarítmico natural o recuentos de UMI por punta de cola individual para diferentes puntos de tiempo y sexos. El software powsimR se utiliza para determinar cuántas muestras independientes se requieren para detectar genes diferenciales expresados o DE en varios niveles de expresión.La imagen gráfica aquí representa la verdadera tasa positiva para detectar los genes DE entre dos condiciones para cuatro simulaciones diferentes que incorporan diferentes tamaños de muestra por condición. La línea discontinua indica una tasa positiva real del 80%. La tasa de descubrimiento falso y las mismas cuatro simulaciones se muestran aquí.La línea discontinua indica una tasa de descubrimiento falso del 10%. Los gráficos mostraron que un tamaño de muestra de 70 puntas de cola por condición es suficiente para detectar los genes DE, excepto los genes con niveles de expresión muy bajos. Para una sincronización adecuada, asegúrese de que solo los embriones estén presentes en la placa.Para evitar la pérdida de muestra, pipetee la mezcla de imprimación directamente sobre la sección de membrana PEN en la tapa y sea extremadamente suave al cerrar la tapa. Debido a que es agnóstico de la especie, podemos usar este protocolo para explorar cómo las redes reguladoras de genes han evolucionado para estructuras homólogas en diferentes especies.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos

El video describe la disección láser del modelo de cocultivo organotípico 3D con precisión a nivel de micras. En los modelos organotípicos 3D, los constituyentes del estroma, como los fibroblastos, se cocultivan tridimensionalmente con células epiteliales cancerosas. El modelo 3D sirve como una herramienta experimental que permite estudiar la invasión y las interacciones cáncer-estroma en condiciones casi fisiológicas.

Microdisección láser: una técnica para aislar células invasoras de cáncer colorrectal a partir de un modelo de cultivo organotípico en 3D

Este video describe la técnica para obtener una sola célula a partir de una población celular heterogénea utilizando microdisección de captura láser. La célula aislada se puede utilizar para estudios genómicos adicionales o investigaciones sobre el cáncer.

Muestreo de células individuales mediante microdisección por captura láser: una técnica para recolectar células objetivo de una población celular heterogénea

SIVQ-LCM es un enfoque innovador que aprovecha un algoritmo informático, espacialmente invariante cuantificación vectorial (SIVQ), para conducir el proceso de microdisección láser captura (LCM). El flujo de trabajo SIVQ-LCM mejora en gran medida la velocidad y la exactitud de microdisección, con aplicaciones tanto en la investigación y ajustes clínicos.

Protocolo SIVQ-LCM para el Instrumento ArcturusXT

Microdisección se ha empleado ampliamente para el examen de ADN, ARN, y proteínas dentro del tejido. Microscopía de captura láser (LCM) es el método más comúnmente utilizado, pero una nueva técnica de fresado, mesodissection, es recientemente disponible. Demostramos la extracción de RNA de mesodissected formalina parafina fijo diapositivas de tejidos embebidos de granulomas de Mycobacterium tuberculosis.

Un nuevo enfoque para la recuperación Microdissection<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Las transcripciones específicas de formalina parafina fijo Embedded pulmón granulomas

El aislamiento de las neuronas de dopamina individuales o el área tegmental ventral con inmunohistoquímica directa o indirecta se demuestra utilizando láser captura microdissection. Se discuten los parámetros para el aislamiento de tejido de un portaobjetos de vidrio usando un láser de infrarrojos y a partir de diapositivas membrana utilizando la combinación de un láser infrarrojo y ultravioleta.

Microdisección de captura por láser - Una demostración del aislamiento individual de dopamina neuronas y el Área ventral tegmental completo

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Asistida por láser microdisección (LAM) como herramienta para la transcripción de perfiles de distintos tipos de células

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Microdisección de captura láser de las subregiones de Glioma para la caracterización espacial y molecular de la heterogeneidad intratumoral, los oncostreams y la invasión

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Microdisección láser industrializada guiada por inteligencia artificial para el análisis proteómico a microescala del microambiente tumoral

La microdisección por captura láser de tejidos de fibrosis submucosa oral permite la extracción precisa de células de regiones histológicas de interés para el análisis de datos multiómicos con información morfológica y espacial.

Aislamiento de Células con Información Morfológica y Espacial a partir de Muestras de Fibrosis Submucosa Oral mediante Microdisección por Captura Láser

Este protocolo describe un método para aislar ARN de regiones histológicas definidas de tejido hepático de ratón incrustado en compuesto de paraformaldehído y compuesto de Temperatura Óptima de Corte mediante microdissección por captura láser, permitiendo un análisis dirigido de expresión génica posterior.

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Microdisección láser para aplicaciones de un solo tejido independientes de la especie

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