Name: Evaluación del daño térmico de la craneotomía perforada por robot para la cirugía de ventana craneal en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-11T13:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Aprenda a evaluar el daño térmico en cirugía de ventana craneal con robot en ratones transgénicos. Este método estandarizado reduce la variabilidad quirúrgica y minimiza el daño vascular cerebral durante la perforación ósea.

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Este estudio fue apoyado en parte por los premios de revisión de mérito GRANT12418820 (Capadona) y GRANTI01RX003420 (Shoffstall / Capadona), y el Premio al Científico de Carrera de Investigación # GRANT12635707 (Capadona) del Servicio de Investigación y Desarrollo de Rehabilitación del Departamento de Asuntos de Veteranos de los Estados Unidos (EE. Además, este trabajo también fue apoyado en parte por el Instituto Nacional de Salud, el Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares GRANT12635723 (Capadona) y el Instituto Nacional de Imágenes Biomédicas y Bioingeniería, T32EB004314, (Capadona / Kirsch). Este material se basa en el trabajo apoyado por la National Science Foundation Graduate Research Fellowship bajo la subvención No. GRANT12635723. Cualquier opinión, hallazgo, conclusión o recomendación expresada en este material son las de los autores y no reflejan necesariamente los puntos de vista de la National Science Foundation.

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Los autores no tienen ningún conflicto de intereses que informar. El contenido no representa los puntos de vista del Departamento de Asuntos de Veteranos de los Estados Unidos, los Institutos Nacionales de Salud o el Gobierno de los Estados Unidos.

El uso del tinte EB y las imágenes es sencillo, rápido y útil para evaluar el daño vascular en el cerebro para nuevos métodos y técnicas. Ya sea utilizando un robot quirúrgico o confirmando los métodos que se realizan actualmente en el laboratorio, es importante validar los métodos quirúrgicos para aislar los efectos de los tratamientos experimentales frente al impacto quirúrgico y mejorar el bienestar animal. Una configuración de termopar también es útil para evaluar los métodos de perforación para garantizar que no se ...

Las ventanas craneales se han utilizado ubicuamente en los campos de la neurociencia, la ingeniería neuronal y la biología para permitir la visualización directa y la obtención de imágenes de la corteza en animales vivos 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11 . La poderosa combinación de ratones transgénicos e imágenes multifotónicas ha proporcionado información extremadamente valiosa sobre la actividad del circuito y otras ideas biológicas en el cerebro in vivo 12,13,14,15,16,17,18. Los microscopios en miniatura montados en el cráneo han ampliado aún más estas capacidades para permitir grabaciones en animales despiertos que se mueven libremente19. El proceso de creación de una ventana craneal requiere perforación eléctrica para adelgazar o eliminar completamente el hueso craneal para producir craneotomías lo suficientemente grandes como para asegurar una pieza transparente de vidrio sobre la corteza20. El polidimetilsiloxano (PDMS) y otros polímeros también han sido probados como materiales de ventana craneal 9,21. En última instancia, la ventana craneal ideal es aquella que no altera ni interfiere con la actividad endógena normal debajo. Sin embargo, es comúnmente aceptado que la perforación de la ventana craneal agrava el tejido subyacente, lo que lleva a daños en el cerebro, alteración del medio ambiente y meninges hasta el punto de ocluir la profundidad de la imagen multifotónica22. La neuroinflamación resultante tiene una amplia gama de efectos que van desde la permeabilidad de la barrera hematoencefálica (BHE) hasta la activación y el reclutamiento de células gliales alrededor del sitio del implante23. Por lo tanto, la caracterización de métodos de perforación de ventanas craneales más seguros y reproducibles es crucial para una calidad de imagen consistente y reducir los factores de confusión.
Mientras que se tiene cuidado de minimizar el trauma en el tejido subyacente, el acto de perforar el hueso tiene el potencial de causar perturbaciones térmicas y mecánicas al cerebro24,25. El trauma mecánico por penetración accidental del taladro en la duramadre puede inducir diversos grados de lesión cortical24. En un estudio de Shoffstall et al.25, el calor de la perforación ósea resultó en un aumento de la permeabilidad BBB, como lo indica la presencia de colorante Evans Blue (EB) en el parénquima cerebral 25. El colorante EB, inyectado por vía intravenosa, se une a la albúmina circulante en el torrente sanguíneo y, por lo tanto, normalmente no cruza una barrera hematoencefálica saludable en concentraciones apreciables. Como resultado, el colorante EB se utiliza comúnmente como un marcador sensible de la permeabilidad BBB26,27. Si bien su estudio no midió directamente el impacto de la permeabilidad de la BHE en las secuelas biológicas posteriores en estudio, estudios previos han correlacionado la permeabilidad de la BHE con una mayor respuesta neuroinflamatoria a microelectrodos implantados crónicamente y alteraciones en la función motora28.
Dependiendo de los objetivos del estudio, la magnitud del daño térmico y mecánico puede contribuir a una fuente de error experimental, afectando negativamente el rigor y la reproducibilidad del estudio. Hay docenas de métodos citados para producir ventanas craneales, cada uno utilizando diferentes equipos de perforación, velocidades, técnicas y usuarios 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11. Shoffstall et al.25 informaron que la variación observada en los resultados de calentamiento se atribuyó a la variabilidad en la fuerza aplicada, la velocidad de avance y el ángulo de aplicación del taladro, entre otros aspectos que no pueden controlarse cuando se perfora a mano 25. Existe la creencia de que los sistemas de perforación automatizados y otros equipos estereotáxicos pueden mejorar la reproducibilidad y la consistencia de los resultados, pero los estudios de métodos publicados no han evaluado rigurosamente la temperatura o la permeabilidad de la barrera hematoencefálica como uno de los resultados. Por lo tanto, existe la necesidad de métodos más reproducibles y consistentemente aplicados para producir ventanas craneales, así como métodos rigurosamente aplicados para evaluar el impacto de la perforación de ventanas craneales en el tejido neural subyacente.
El objetivo de este estudio es determinar y desarrollar métodos de perforación consistentes y seguros para ventanas craneales. El tamaño de la craneotomía para la instalación de la ventana craneal es significativamente mayor que las craneotomías estándar para microelectrodos implantados en el cerebro. Tales craneotomías no pueden completarse con un solo orificio de rebaba cuando se utiliza equipo estándar, introduciendo así más variabilidad de la técnica intercirujano cuando se realiza a mano20. Los robots de perforación quirúrgica se han introducido en el campo, pero no han sido ampliamente adoptados 1,6,29. La automatización de la perforación ofrece control sobre las variables que contribuyen a la variación observada de ensayo a ensayo, lo que sugiere que el uso del equipo puede reducir los efectos inter e intracirujanos. Esto es de particular interés dada la dificultad añadida de la craneotomía más grande necesaria para la colocación de la ventana craneal. Si bien se podría suponer que hay beneficios claros para el control proporcionado por la automatización de la perforación, ha habido poca evaluación de la implementación de estos equipos. Aunque no se han observado lesiones visibles5, se desea la prueba de mayor sensibilidad con EB.
Aquí, la permeabilidad BBB se mide utilizando un robot de perforación quirúrgica disponible comercialmente con el software correspondiente, que permite la programación de coordenadas estereotáxicas, planificación / mapeo de craneotomía y una selección de estilos de perforación ("punto por punto" vs "horizontal"), refiriéndose a la trayectoria enrutada de la broca. Inicialmente, se perforan ocho puntos de "semilla" (Figura 1A), delineando la ventana craneal. A partir de aquí, el espacio entre las semillas se corta utilizando el método de perforación "punto por punto" u "horizontal". "Punto por punto" realiza cortes verticales de orificios piloto (similares a una prensa de perforación CNC), mientras que "horizontal" realiza cortes horizontales a lo largo de la circunferencia de la ventana craneal que delinea el orificio (similar a un enrutador CNC). El resultado para ambos métodos es un pedazo de cráneo que se puede quitar para revelar la ventana craneal. Para aislar el daño de la perforación, la ventana craneal no se retira físicamente, a fin de evitar cualquier daño adicional. Se utiliza una combinación de colorante EB junto con imágenes fluorescentes para medir la permeabilidad BBB después de realizar craneotomías en ratones, y un termopar insertado se utiliza para medir directamente la temperatura de la superficie cerebral durante la perforación (Figura 1B, C). Observaciones anteriores indicaron que la perforación pulsada encendido / apagado con intervalos de 2 s fue suficiente para mitigar el calentamiento de la perforación25, y por lo tanto se incorpora al enfoque experimental para el robot quirúrgico.
La intención del trabajo presentado es demostrar métodos para evaluar el daño térmico de la perforación de craneotomía. Si bien los métodos se presentan en el contexto de la perforación automatizada, dichos métodos también se pueden aplicar a los esquemas de perforación manual. Estos métodos se pueden utilizar para validar el uso de equipos y / o esquemas de perforación antes de adoptarlos como procedimiento estándar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64188/64188fig01.jpg"> Figura 1: Esquema experimental de tuberías. Esquema que demuestra el proceso al que se sometieron los animales para el procedimiento de cuantificación de EB después de la ventana craneal. (A) Configuración esquemática del ratón con el marco estereotáxico y el taladro quirúrgico del robot. Un ejemplo de ventana craneal se muestra sobre la corteza motora con puntos semilla (verde) y puntos de borde (azul). (B) La configuración de perfusión incluye inyectar 1x solución salina tamponada con fosfato (PBS) en todo el animal para eliminar cualquier sangre, seguida de la extracción del cerebro. (C) Luego, el cerebro se coloca en la cámara del sistema de imágenes fluorescentes EB para realizar imágenes fluorescentes en el tinte Evans Blue. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64188/64188fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<table><tbody><tr><td>1x solución salina tamponada con fosfato Tipo: Reactivo</td><td>VWR</td><td>MRGF-6235</td><td>para dilución azul Evans</td></tr><tr><td>Aura Software Tipo: Herramienta</td><td>Spectral Instruments Imaging</td><td></td><td>Software de procesamiento de imágenes de acceso abierto para sistemas de imágenes Lumina</td></tr><tr><td>Buprenorfina Tipo: Medicamento</td><td>procedente de instalaciones</td><td></td><td></td>animales</tr><tr><td>Broca de carburo, 0,6 mm (taladro robot) Tipo: Almacenamiento de herramientas</td><td></td><td>58640-1</td><td></td></tr><tr><td>Carprofeno Tipo: Medicamento</td><td>procedente de un animalario Cefazolin</td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tipo: Medicamento</td><td>procedente del animalario</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Evans Blue Dye Tipo: Reactivo</td><td>Millipore Sigma</td><td>E2129</td><td>Reconstituido en 1x solución salina tamponada con fosfato</td></tr><tr><td>Isoflurano Tipo: Droga</td><td>Procedente de Animal Facility</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II Tipo: Herramienta</td><td>Perkin Elmer</td><td>CLS136334</td><td>IVIS Lumina III actualmente en lugar de Lumina II en el mercado</td></tr><tr><td>Termómetro lineal Jenco Tipo: Herramienta</td><td>Jenco</td><td>765JF</td><td>Para la configuración del termopar</td></tr><tr><td>Ketamina Tipo: Medicamento</td><td>procedente de Animal Facility</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LivingImage Tipo: Herramienta</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Software para IVIS Lumina III</td></tr><tr><td>Marcaine Tipo: Medicamento</td><td>procedente de un centro</td><td></td><td></td>de animales</tr><tr><td>Neurostar Software Tipo: Herramienta</td><td>de almacenamiento</td><td></td><td>Viene con la compra de un robot quirúrgico</td></tr><tr><td>Physiosuite con MouseSTAT&reg; Oxímetro de pulso & Monitor de frecuencia cardíaca Tipo: Herramienta</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-03</td><td>Se utiliza para monitorear los signos vitales</td></tr><tr><td>PrismPlus rate Tipo: Animal</td><td>Jackson Labortory</td><td>031478, RRID:IMSR_JAX:031478, Macho, ~8 meses</td><td>de edad Animales utilizados para el estudio</td></tr><tr><td>Taladro de almacenamiento y robot de inyección para instrumentos estereotáxicos motorizados Tipo: Herramienta</td><td>Stoelting</td><td>58640</td><td>Taladro robótico principal con marco estereotáxico</td></tr><tr><td>Termopar Tipo: Herramienta</td><td>TC Direct</td><td>206-557</td><td>para configuración de termopar</td></tr><tr><td>USB-6008 E/S multifunción DAQ Tipo: Herramienta</td><td>National Instruments</td><td>USB-6008</td><td>para configuración de termopar</td></tr><tr><td>Xilacina Tipo: Medicamento</td><td>procedente de un animalario</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

evaluación del daño térmico de la craneotomía perforada por robot para la cirugía de ventana craneal en ratones

Assessment of Thermal Damage from Robot-Drilled Craniotomy for Cranial Window Surgery in Mice

La cirugía de ventana craneal permite la obtención de imágenes del tejido cerebral en ratones vivos con el uso de multifotones u otras técnicas de imagen intravital. Sin embargo, cuando se realiza cualquier craneotomía a mano, a menudo hay daño térmico al tejido cerebral, que es inherentemente variable de cirugía a cirugía y puede depender de la técnica individual del cirujano. La implementación de un robot quirúrgico puede estandarizar la cirugía y conducir a una disminución del daño térmico asociado con la cirugía. En este estudio, se probaron tres métodos de perforación robótica para evaluar el daño térmico: horizontal, punto por punto y pulsado punto por punto. La perforación horizontal utiliza un esquema de perforación continua, mientras que punto por punto perfora varios agujeros que abarcan la ventana craneal. El pulsado punto por punto agrega un esquema de perforación "2 s encendido, 2 s apagado" para permitir el enfriamiento entre perforaciones. Las imágenes fluorescentes del tinte Evans Blue (EB) inyectado por vía intravenosa miden el daño al tejido cerebral, mientras que un termopar colocado debajo del sitio de perforación mide el daño térmico. Los resultados del termopar indican una disminución significativa en el cambio de temperatura en el grupo pulsado punto por punto (6.90 °C ± 1.35 °C) en comparación con los grupos horizontal (16.66 °C ± 2.08 °C) y punto por punto (18.69 °C ± 1.75 °C). Del mismo modo, el grupo pulsado punto por punto también mostró significativamente menos presencia de EB después de la perforación de la ventana craneal en comparación con el método horizontal, lo que indica menos daño a los vasos sanguíneos en el cerebro. Por lo tanto, un método de perforación pulsado punto por punto parece ser el esquema óptimo para reducir el daño térmico. Un taladro robótico es una herramienta útil para ayudar a minimizar el entrenamiento, la variabilidad y reducir el daño térmico. Con el uso cada vez mayor de imágenes multifotónicas en los laboratorios de investigación, es importante mejorar el rigor y la reproducibilidad de los resultados. Los métodos abordados aquí ayudarán a informar a otros sobre cómo utilizar mejor estos robots quirúrgicos para avanzar aún más en el campo.

Evaluación térmica El potencial de daño térmico se evaluó midiendo el cambio en la temperatura desde la línea de base debido a la perforación utilizando métodos horizontales (Figura 2A), punto por punto (Figura 2B) y pulsados punto por punto (Figura 2C). La figura 2D muestra la configuración experimental para obtener datos térmicos. Se utilizó un tamaño de muestra de N = 4 ventanas c...

Las ventanas craneales se han convertido en una técnica quirúrgica implementada ubicuamente para permitir imágenes intravitales en ratones transgénicos. Este protocolo describe el uso de un robot quirúrgico que realiza perforaciones óseas semiautomáticas de ventanas craneales y puede ayudar a reducir la variabilidad de cirujano a cirujano y mitigar parcialmente el daño de la barrera térmica hematoencefálica.

Evaluación del daño térmico de la craneotomía perforada por robot para la cirugía de ventana craneal en ratones

Cranial window surgery allows for the imaging of brain tissue in live mice with the use of multiphoton or other intravital imaging techniques. However, ...

Este protocolo proporciona un método para evaluar el daño vascular como resultado de la perforación de la ventana craneal. Un robot quirúrgico ofrece consistencias mejoradas en todos los procedimientos al tiempo que reduce la cantidad de entrenamiento para aprender la técnica. Durante este procedimiento, utilizamos inyecciones craneales que pueden ser muy desafiantes.Recomendamos un entrenamiento extensivo para aquellos nuevos en la técnica. Para comenzar, configure el sistema como se describe en el manuscrito y realice la calibración del marco siguiendo el manual del robot quirúrgico. Navegue hasta el software quirúrgico y cree un nuevo proyecto seleccionando comenzar con un proyecto limpio.A continuación, establezca el sujeto como ratón en la parte superior para designar el atlas de coordenadas de perforación que se utilizará. A continuación, seleccione iniciar nuevo proyecto y haga clic en planificación en la esquina inferior izquierda para navegar a la pantalla de planificación de coordenadas de perforación. Cree el esquema de perforación para la técnica de ventana craneal que se realizará haciendo clic en cualquier parte del atlas estereotáxico.Use bregma como referencia e ingrese las coordenadas para la corteza motora como se describe en el manuscrito. Pulse Intro en el teclado para actualizar las coordenadas seleccionadas. Haga clic en almacenar destino para guardar estas coordenadas e introducir un nombre adecuado.Luego haga clic en el botón de mover en la parte inferior izquierda para navegar de regreso a la pantalla principal de perforación. Haga clic en herramientas, luego en proyectar y guardar como opción para reutilizar este proyecto de plantilla para proyectos posteriores, ya que conservará automáticamente las coordenadas de perforación. Primero, administre inyecciones subcutáneas de antibióticos, cefazolina, analgésico, carprofeno y buprenorfina al ratón anestesiado.A continuación, coloque el ratón en una almohadilla térmica y mantenga la anestesia con 0.5% a 2% isoflurano por inhalación a través de un cono nasal. Monte al animal en el marco estereotáxico del robot quirúrgico utilizando barras para los oídos suministradas y evalúe rutinariamente los signos vitales y la profundidad anestésica a través del pellizco del dedo del pie. Luego frote el área quirúrgica con gluconato de clorhexidina y isopropanol al 70% para la esterilización.Y coloque una envoltura de plástico estéril sobre el ratón y el marco estereotáctico para mantener la esterilidad durante la cirugía. Usando una hoja de bisturí, realice una incisión de una pulgada en la línea media del cráneo, comenzando en la parte posterior de los ojos, seque y limpie el cráneo con peróxido de hidrógeno al 3% con aplicadores con punta de algodón. Para preparar la cola para una inyección fácil, limpie con alcohol.Usando el pulgar y el índice, doble la cola para exponer la vena de la cola en la parte superior de la curva de la cola. Inserte la jeringa paralela a la vena e inyecte lentamente el volumen de azul Evans. Una vez inyectado, espere cinco minutos para permitir que circule Evans blue.Una inyección exitosa se verifica inmediatamente cuando las extremidades del ratón y la ventana quirúrgica se vuelven azules. Una vez que el cráneo esté preparado para la perforación, navegue de nuevo al software quirúrgico y haga clic en herramientas. Luego seleccione proyecto, seguido de nuevo, y seleccione un proyecto de plantilla en el menú desplegable para elegir un proyecto de plantilla.Seleccione los mismos elementos de protocolo. Haga clic en planificación, luego seleccione los parámetros de perforación para transferir a este nuevo proyecto y haga clic en iniciar nuevo proyecto. A continuación, corrija el taladro y el marco para tener en cuenta la inclinación y la escala del cráneo del ratón del animal actual haciendo clic en herramientas, y seleccione corregir para inclinación y escala para abrir la pantalla de correcciones.En la parte superior de la pantalla, asegúrese de que el taladro esté activo haciendo clic en el botón de taladro rojo claro Después de realizar la corrección, salga de la ventana de corrección haciendo clic en cerrar en la parte inferior central de la pantalla y navegue hasta la pantalla de perforación haciendo clic en herramientas y luego seleccionando taladro para comenzar el procedimiento de perforación. Confirme el sitio de perforación seleccionando la ventana de forma de craneotomía en la parte superior de la pantalla, seguido de ver los detalles del objetivo de perforación en el menú desplegable a continuación. Para llevar a cabo la perforación por pulsos manual, desactive la función de parada automática desmarcando la casilla de verificación junto a la opción de parada automática en el menú de perforación, que permite controlar cuándo el taladro está apagado para el pulso.En el menú de perforación, seleccione 100 micrómetros como avance de la profundidad de perforación. Abra el menú del sitio de perforación y navegue hasta el primer sitio de perforación. Utilice el botón de avance o los controles manuales para bajar el taladro hasta que toque el cráneo y presione la superficie de ajuste una vez que la broca llegue al cráneo.Una vez listo, haga clic en avanzar para comenzar la perforación. Y después de que el taladro haya avanzado 100 micrómetros, presione Escape dos veces para detener el taladro. Después de dos segundos, repita este ciclo para la profundidad del cráneo.Para cada semilla y punto de borde durante la perforación, asegúrese de ajustar la duramadre usando el botón en el menú de perforación una vez que se haya alcanzado la duramadre. Mida los cambios en la temperatura del cráneo y el cerebro utilizando un termopar en combinación con los tres esquemas de perforación diferentes conectados a un sistema de adquisición de datos, que permite que la medición se lea en MATLAB. Monte un ratón cadáver en el marco estereotáxico y la configuración del taladro robótico.Perfore manualmente un pequeño orificio aproximadamente a dos milímetros de distancia de donde se hará la ventana craneal en el costado del cráneo, lo que permite que el termopar se deslice en su posición debajo de donde se produce la perforación de la ventana craneal. Comience el proceso de perforación para cada uno de los tres esquemas como se demostró anteriormente, lo que resulta en picos debido al cambio de temperatura, lo que indica que el calentamiento ocurre cerca del cerebro a medida que el taladro atraviesa el cráneo. El potencial de daño térmico se evaluó midiendo el cambio de temperatura desde la línea de base debido a la perforación utilizando métodos horizontales, punto por punto y pulsados punto por punto.Tanto los esquemas de perforación horizontal como punto por punto muestran diferencias no significativas en los cambios térmicos. Sin embargo, cambiar a un método pulsado punto por punto resultó en un calentamiento significativamente menor del cerebro que la perforación horizontal y punto por punto. La perforación de borde horizontal tomó 300 segundos, mientras que la perforación de borde punto por punto tomó 200 segundos.El método de pulso tomó el más largo con la perforación de semillas y bordes, tomando aproximadamente 500 segundos cada uno. Para monitorear la relación entre el esquema de perforación y el daño vascular, se realizaron imágenes fluorescentes azules de Evans. Se observó que la perforación a través de corte horizontal y punto por punto era perjudicial para la vasculatura en el cerebro.En comparación con los grupos de control, el método pulsado punto por punto tuvo menos daño localizado en la semilla y el punto de borde, pero aún tenía presencia visible de azul Evans dentro de la ventana craneal. Al perforar manualmente, es crucial verificar la craneotomía después de avanzar el taladro para asegurarse de que no se rompa la duramadre. Además de las ventanas craneales, se puede usar un robot quirúrgico para craneotomías estándar para mejorar los resultados quirúrgicos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Este video y el protocolo de demostrar cómo la implantación de una cubierta de cristal ventana craneal en los roedores. Estas preparaciones se pueden utilizar para la crónica en vivo de dos fotones de imágenes de la corteza cerebral en escalas de tiempo de meses. También puede ser utilizado para otros tipos de imágenes, incluyendo imágenes ópticas señal intrínseca.

Un procedimiento de cirugía craneotomía para imágenes cerebrales crónicas

Lateral fluido percusión (LFP), un modelo establecido de lesión traumática del cerebro en ratones, se demostró. LFP cumple tres criterios principales para los modelos animales: relevancia validez, fiabilidad y clínicos. El procedimiento, que consiste en una craneotomía quirúrgica, la fijación del cubo seguida por la inducción de la lesión, lo que resulta en lesiones focales y difusas, que se describe es.

Percusión fluido lateral: Modelo de Lesión Cerebral Traumática en ratones

Este video presenta un procedimiento quirúrgico para implantar una ventana craneal en un modelo de ratón para un acceso óptico estable a diferentes regiones del cerebro.

Implantación de una ventana de imagen craneal en un modelo de ratón: un procedimiento quirúrgico para implantar cubreobjetos a base de vidrio para un acceso óptico estable a regiones del cerebro murino

Este video muestra el procedimiento para inducir una lesión cerebral traumática de cráneo abierto en un ratón haciendo una incisión en la línea media del cráneo, perforando el cráneo y quitando el colgajo óseo para exponer la corteza cerebral, y aplicando alta presión para inducir el trauma. A continuación, se sutura la herida para preparar el modelo de ratón para experimentos posteriores.

Generación de un modelo de ratón con lesión cerebral traumática utilizando una sonda impactadora

Trauma cerebral aguda es una lesión grave que no tiene un tratamiento adecuado hasta la fecha. Multiphoton microscopía permite estudiar longitudinalmente el proceso de desarrollo trauma cerebral agudo y en la exploración de estrategias terapéuticas en los roedores. Dos modelos de trauma cerebral agudo estudiado con imágenes in vivo de dos fotones de cerebro se demuestran en este protocolo.

Trauma cerebral aguda en ratones seguido de Longitudinal dos fotones de imágenes

Las lesiones cerebrales traumáticas (TBI) siguen siendo un grave problema de salud. Con el modelo de cirugía de impacto cortical controlado, se pueden realizar investigaciones sobre los efectos del TCE y los posibles métodos de tratamiento.

Controlado Modelo de Impacto cortical de la lesión cerebral traumática

Este protocolo demuestra metodologías para un modelo de ratón de lesión cerebral traumática de cráneo abierto y trasplante de células pluripotentes derivadas de células madre inducidas por el ser humano cultivadas en el sitio de la lesión. Las pruebas conductuales y histológicas de los resultados de estos procedimientos también se describen brevemente.

Modelo de impacto cortical controlado de lesión cerebral de ratón con trasplante terapéutico de células neuronales derivadas de células madre pluripotentes inducidas por el hombre

Aquí describimos un protocolo para la inducción de una lesión cerebral traumática murina a través de un impacto cortical controlado a cabeza abierta.

Modelo Murino de Impacto Cortical Controlado para la Inducción de Lesiones Cerebrales Traumáticas

Este estudio demuestra la administración de una lesión cerebral traumática repetitiva a ratones y la implantación simultánea de una ventana craneal para la posterior obtención de imágenes intravitales de un EGFP expresado por neuronas mediante microscopía de dos fotones.

Imágenes intravitales de la expresión de proteínas fluorescentes en ratones con una lesión cerebral traumática de cráneo cerrado y ventana craneal utilizando un microscopio de dos fotones

Este protocolo describe un método quirúrgico en dos fases para crear una ventana craneal grande, resellable y que salve la duramadre en ratones. Esta técnica permite registros electrofisiológicos crónicos y multimodales de redes profundas del cerebro distribuido, como la Red de Modos Predeterminados, durante varias semanas.

Protocolo quirúrgico para una ventana craneal grande y resellable que permite grabaciones electrofisiológicas longitudinales y multimodales de la red de modo predeterminado del ratón

Aprenda a evaluar el daño térmico en cirugía de ventana craneal con robot en ratones transgénicos. Este método estandarizado reduce la variabilidad quirúrgica y minimiza el daño vascular cerebral durante la perforación ósea.

Evaluación del daño térmico de la craneotomía perforada por robot para la cirugía de ventana craneal en ratones

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