Medición de la termogénesis del músculo esquelético en ratones y ratas

Este protocolo es significativo, ya que proporciona un método directo y rentable para medir la temperatura del músculo esquelético. Además, se puede utilizar en diversos contextos y bajo la estimulación de agentes farmacológicos. La principal ventaja de esta técnica es el número de animales que se pueden probar simultáneamente.

La mínima perturbación animal descrita aquí, evita la necesidad de métodos de alta tecnología como la termografía infrarroja. Los individuos pueden tener dificultades para medir la temperatura de los animales dentro de la jaula doméstica o en cintas de correr mientras están en movimiento. Esto se puede mitigar mediante la práctica de técnicas de medición durante los ensayos de habituación.

Comience calentando los transpondedores cerrados entre las manos enguantadas y asegúrese de mantener la esterilidad, mientras trabaja con transpondedores. Mida la temperatura con un escáner de temperatura y compruebe si el transpondedor lee los cambios de temperatura. Después de anestesiar al ratón como se describe en el manuscrito, use tijeras quirúrgicas para hacer un corte poco profundo a través de la piel en la extremidad posterior derecha.

Coloque el borde afilado de un transpondedor estéril preprogramado y sin tapa en la incisión, paralelo al gastrocnemio. Asegúrese de que el émbolo verde esté orientado hacia arriba y sea visible. Siga empujando el aplicador del transpondedor en la incisión hasta que la abertura del aplicador del transpondedor ya no sea visible.

Gire el aplicador a 180 grados, de modo que el émbolo verde mire hacia abajo hacia la extremidad del ratón y ya no sea visible para el experimentador. Una vez que el aplicador del transpondedor se coloca adyacente o parcialmente encerrado en el gastrocnemio, empuje el émbolo verde, permitiendo que la presión del aplicador guíe la mano del investigador lejos del ratón. Con fórceps, mantenga unida la piel abierta.

Coloque un clip para heridas con un autoclip estéril, doble si es necesario. Use suturas absorbibles antes del autoclip estéril para cerrar la capa de fascia. Usando el lector de transpondedor, verifique la temperatura del músculo del ratón.

Después de retirar el ratón de la anestesia, colóquelo en una jaula doméstica limpia encima de una almohadilla térmica y asegúrese de que la jaula doméstica incluya una bola de té con una toalla inodora para comenzar la habituación. Asigne una ubicación al elevador en la sala de pruebas y, para evitar variables de confusión, separe los elevadores configurados para recibir diferentes estímulos contextuales por un mínimo de dos metros. Usando bandas magnéticas, coloque láminas quirúrgicas a través del elevador y cree una barrera visual para minimizar las fluctuaciones de temperatura debidas a la actividad del ratón, en respuesta al movimiento del experimentador.

Prepare bolas de té con toallas de control y olor a depredador. Transfiera al animal a la sala de pruebas preparada. Coloque al animal en un lugar preasignado en el elevador y evite cambiar la ubicación del elevador entre los procedimientos de habituación y prueba.

Retire la bola de la jaula doméstica de la jaula del ratón. Recupere la jaula con un paño o una lámina quirúrgica y permita que el ratón se aclimate al espacio de prueba durante una o dos horas. Una vez completada la aclimatación, utilice el escáner para medir y registrar la temperatura de referencia del sujeto.

Destape la jaula y coloque la bola de té en el piso de la jaula de la casa. Reemplace la tapa de la jaula y la cubierta de tela. Inicie el cronómetro y mida las temperaturas de los sujetos de prueba en el mismo orden de colocación de la bola de té.

Registre las temperaturas y la hora del reloj de las mediciones, siguiendo los puntos de tiempo deseados. Prepare las cintas de correr para las pruebas, asegurándose de que los amortiguadores sean funcionales. Asegúrese de que los animales usen la misma cinta de correr para los procedimientos de habituación y prueba.

Mueva el ratón a la sala de pruebas y deje que se aclimate durante una o dos horas en la jaula de su casa. Antes de mover el ratón a la cinta de correr, mida y registre su temperatura de referencia. Para facilitar la colocación y extracción, adhiera las toallas de control o de olor predator al techo o debajo de la parte delantera de la cinta de correr.

Guíe el ratón hacia la cinta de correr asignada. Encienda la cinta de correr y el amortiguador, encienda el cronómetro y tome medidas de los sujetos de prueba en el mismo orden en que se configuraron en las cintas de correr. Registre las temperaturas y la hora del reloj de las mediciones, siguiendo los puntos de tiempo deseados.

Una vez completada la prueba, apague el amortiguador y la cinta de correr y devuelva el mouse a su jaula doméstica. Limpie la cinta de correr con detergente líquido y agua y elimine cualquier olor residual a depredador. Los ensayos repetidos de habituación disminuyeron significativamente la temperatura muscular de los ratones, mostrando ratones habituados al entorno y protocolo de prueba.

El análisis combinado del sexo del ensayo cuatro no mostró diferencias significativas entre las mediciones de temperatura antes del movimiento y la temperatura basal, lo que demuestra la efectividad de una hora de aclimatación al contexto de la prueba. La estimulación farmacológica con oxitocina en ratones mostró una disminución de la temperatura muscular en relación con la línea de base con una disminución máxima después de 30 minutos. Las temperaturas musculares se normalizaron 60 minutos después de la inyección de oxitocina.

Se observó un aumento sostenido de la temperatura muscular en ratas Sprague Dawley, después de eliminar el olor a depredador como estímulos contextuales. Las ratas Sprague Dawley mostraron un aumento robusto de la temperatura en respuesta al olor a hurón, en comparación con el olor de control. En presencia de otros olores aversivos, el olor a hurón produce y mantiene un cambio termogénico robusto en comparación con todas las demás condiciones.

Al intentar este procedimiento, es fundamental habituar a los animales al protocolo de prueba y programar una o dos horas de aclimatación cada día de prueba.