Generación de un modelo de decidualización artificial de ratón con ovariectomía para la investigación de la decidualización endometrial

El deterioro de la descentralización conduce a virus de trastornos endometriales, como en la muerte, un aborto espontáneo recurrente. Este método proporciona un modelo animal bueno y confiable para el estudio de la descentralización endometrial. Este modelo de descentralización artificial con ovariectomía puede evitar la influencia de la angelina sobre las hormonas, que a menudo pueden obtener resultados altamente reproducibles con diferencias menores dentro del grupo.

Para comenzar a esterilizar los instrumentos quirúrgicos con un esterilizador de alta temperatura y alta presión un día antes de la operación. Aplique el ungüento protector para los ojos en los globos oculares para evitar la sequedad durante la anestesia. Comience la operación cuando los ratones estén completamente anestesiados.

Coloque los ratones en posición prona en la superficie de operación y afeite el pelo en la espalda después de mojarlos con agua jabonosa. Desinfectar la piel con etanol al 70%. Encuentre el sitio de la incisión de la operación a 0,5 centímetros en el borde superior de la raíz del muslo de ambas extremidades posteriores paralelas a la columna vertebral.

Tome el sitio de la incisión como centro y desinfecte el área de la incisión con yodóforo, tres veces. Haga una incisión longitudinal de aproximadamente 0.5 a un centímetro con tijeras. Corte la fascia y separe pasivamente los músculos con pinzas.

Encuentre un pedazo de la almohadilla de grasa blanca en el campo de incisión cerca del polo inferior del riñón a través de la capa muscular delgada. Sujete la masa grasa con clips hemostáticos y saque el ovario envuelto por la almohadilla de grasa fuera de la incisión. Sujete la unión del ovario y las trompas de Falopio con pinzas curvas y retire el ovario a lo largo del pedículo ovárico con tijeras.

Detenga el sangrado con una pluma de electrocoagulación o una aguja de una jeringa de un mililitro calentada en la lámpara de alcohol. Enjuague la incisión quirúrgica con solución salina normal para evitar la adhesión del tejido. Use una sutura 4-0 para sembrar el músculo y la piel respectivamente y desinfecte la incisión quirúrgica con yodóforo nuevamente.

Coloque a los ratones en posición prona en la jaula y reanimarlos en una incubadora de 25 grados centígrados. Equipado con una fuente de luz y sistema de ventilación durante aproximadamente dos horas. Preste atención a los ratones después de la operación.

Póngalos de nuevo en el lugar de alimentación original solo hasta que se recuperen por completo y déles suficiente agua y comida. Inyecte subcutáneamente 100 nanogramos de estrógeno en 50 microlitros de aceite de sésamo en cada ratón durante tres días seguidos de dos días de descanso. Inyecte un miligramo de progesterona y 10 nanogramos de estrógeno en 50 microlitros de aceite de sésamo en cada ratón durante otros tres días.

Operar los ratones para inducir el modelo de residualización artificial seis horas después de la tercera inyección combinada de estrógeno progesterona. Encuentre el cuerno del útero en el extremo inferior de las trompas de Falopio e inyecte 20 microlitros de aceite de sésamo lentamente a lo largo del cuerno uterino. Empuje el tejido hacia atrás, suture la incisión y permita que el ratón se recupere.

Fijar de tres a cinco mililitros de tejido uterino con 10% de formalina incrustada en parafina y seccionarlos. Teñir las secciones con hematoxilina y eosina para observar los cambios morfológicos. Incruste otros tres a cinco milímetros del tejido del útero en una temperatura de corte óptima, congele el compuesto en nitrógeno líquido y guárdelo en un congelador de menos 80 grados centígrados.

Congelar la sección del tejido en 10 micrómetros y detectar la actividad de la fosfatasa alcalina en el tejido uterino mediante el método de acoplamiento azoico. La morfología general del útero artificial descentralizado de ratones inducido por aceite es más cercana a la del útero en el embarazo. El cuerpo uterino se vuelve grueso y la cavidad uterina se vuelve más pequeña que el lado no inducido.

El volumen y el peso del cuerno uterino inducido son significativamente más altos que los del lado no inducido. La tinción de hematoxilina y eosina del tejido uterino mostró que las glándulas desaparecen y las células del estroma endometrial final en el desgarro inducido se diferencian en grandes células citoplasmáticas redondas y deciduales multinucleadas con límites celulares poco claros. Las secciones laterales no inducidas muestran la morfología del tejido endometrial en un estado fisiológico normal.

El resultado del método de acoplamiento azoico mostró que el contenido de fosfatasa alcalina del lado inducido por aceite fue significativamente mayor que el del lado no inducido. Los resultados de QPCR mostraron que la expresión de ARNm de PRL-8-A-2, ALPL e IGFBP-1 en el cuerno inducido fue significativamente mayor que en el no inducido, lo que sugiere que el aceite puede inducir la descentralización artificial en ratones. La suplementación con homo es un proceso largo que requiere una atención especial a la contaminación entre los homos, que es la clave del éxito.

Sobre la base de este modelo se puede realizar una inyección de cuerno uterino de adenovirus que puede estudiar el mecanismo relevante de moléculas específicas que regulan la residualización.