Amplificación de la señal de tiramida para la tinción inmunofluorescente de la fosforilación dependiente de ZBP1 de RIPK3 y MLKL después de la infección por HSV-1 en células humanas

La visualización robusta de RIPK3 y MLKL fosforiladas, dos eventos de señalización clave durante la inducción de necroptosis, ha sido técnicamente desafiante. El protocolo de amplificación de tiramida presentado permite la detección sensible de estas dos moléculas. El paso de amplificación de la señal reduce el umbral de detección, lo que permite una detección robusta y reproducible de RIPK3 y MLKL fosforilados.

Comience a sembrar las 90, 000 células HT-29 que expresan ZBP1 en el medio 5A de McCoy de fuerza completa en una placa de pozo de área de superficie cuadrada de un centímetro, lo que permite una microscopía de alta gama. Utilice un volumen final de 200 microlitros por pozo. Incubar las células durante la noche a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono.