Name: Métodos de cultivo de espiroquetas de Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex y fiebre recidivante Borrelia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Aprende métodos de cultivo in vitro de espiroquetas Borrelia burgdorferi y Borrelia miyamotoi para detectar infecciones viables. Este protocolo detalla medios de crecimiento específicos y técnicas de manejo para investigación clínica y microbiológica.

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Este trabajo fue parcialmente apoyado por el Consejo de Investigación de Ciencias Naturales e Ingeniería de Canadá y la Fundación Canadiense de la Enfermedad de Lyme (AB y VL), el Consejo Sueco de Investigación (SB, M-LF e IN), el proyecto TAČR GAMA 2 - "Apoyo a la verificación del potencial de aplicación 2.0 en el Centro de Biología CAS" (TP01010022) (MG y NR), y por una subvención del Ministerio de Salud de la República Checa NV19-05-00191 (MG y NR). Agradecemos a S. Vranjes (2021, Rudenko lab) por la imagen de la Figura 4 y a J. Thomas-Ebbett (2021, Lloyd lab) por las imágenes de la Figura 5. Agradecemos a todos los investigadores que han contribuido al campo y pedimos disculpas a aquellos cuyo trabajo no pudimos citar debido a limitaciones de espacio.

No se declararon conflictos de intereses.

El cultivo de bacterias en laboratorio es el trampolín para la investigación. La profunda ventaja conferida por la capacidad de cultivar se ejemplifica en la lucha, durante más de un siglo que culminó recientemente en éxito, para cultivar Treponema pallidum, la espiroqueta que es el agente etiológico de la sífilis44. Las espiroquetas de Borrelia también son difíciles de cultivar, pero la cultura es posible 23,24,34,44,45,46,47,48,49.<sup class="...

Borrelia es un género de bacterias espiroquetas que abarca tres clados principales: el grupo de la borreliosis de Lyme (LB), el grupo de la fiebre recurrente (RF) y un grupo menos caracterizado aparentemente restringido a los reptiles. La taxonomía de Borrelia está en constante cambio con el advenimiento de metodologías moleculares que permiten comparaciones de genomas y proteomas, como ocurre con la mayoría de los otros grupos taxonómicos 1,2,3,4,5,6,7. El grupo LB (también llamado grupo de la enfermedad de Lyme) se ha denominado tradicionalmente Borrelia burgdorferi sensu lato después de su miembro mejor caracterizado Borrelia burgdorferi sensu stricto.  Este artículo utiliza la terminología más utilizada actualmente: el LB, el RF y el grupo asociado a reptiles, y describe los protocolos de cultivo para los grupos LB y RF.
Como se esperaría para un miembro de la familia Spirochaetaceae, Borrelia puede adoptar la forma espiral distintivamente larga y delgada, típicamente 20-30 μm de largo y 0.2-0.3 μm de ancho. Sin embargo, las células de Borrelia son altamente pleomórficas y pueden adoptar muchas otras formas tanto en cultivo como in vivo 1,8 como resultado de su compleja estructura celular y genética. En su forma espiroquetal, la morfología de la onda sinusoidal plana resulta de su endoflagelos axiales que giran en el espacio periplásmico entre las membranas interna y externa. Esta estructura permite que las células sean altamente móviles, con la membrana externa que contiene proteínas que permiten a la célula interactuar con los tejidos del huésped 9,10. La expresión de las proteínas de la membrana externa está estrechamente regulada y afecta no sólo la invasión del tejido del huésped, sino también la interacción con el sistema inmune del huésped11. Esta compleja expresión génica permite que las células de Borrelia se muevan entre los entornos muy diferentes de los huéspedes vertebrados y los vectores invertebrados. El genoma de Borrelia es inusual entre los procariotas, que consiste en un cromosoma lineal en lugar de circular. Además del cromosoma lineal, las especies de Borrelia contienen 7-21 plásmidos, algunos lineales y otros circulares. Los plásmidos albergan la mayoría de los genes necesarios para la adaptación y virulencia del huésped, y se cree que los plásmidos circulares derivados de los profagos son responsables de la mayor parte del flujo horizontal de genes entre las células espiroquetales12,13. De acuerdo con un papel en la adaptación del huésped, algunos, posiblemente muchos o todos, los miembros del grupo de borreliosis de Lyme pierden plásmidos en cultivo14. La cepa "adaptada en laboratorio" mejor estudiada de B. burgdorferi, B31, tiene solo siete de los nueve plásmidos encontrados en aislados silvestres de esta especie15. Del mismo modo, B. garinii pierde plásmidos en cultivo16. Algunos estudios han demostrado que las especies de RF y B. miyamotoi retienen plásmidos cuando se cultivan 14,17, pero trabajos recientes demuestran plásmidos alterados e infectividad con el cultivo in vitro a largo plazo18.
Los métodos basados en el cultivo siguen siendo el estándar de oro para la detección de infecciones bacterianas en laboratorio, tanto para la investigación como para el trabajo clínico14,17. El cultivo de patógenos a partir de fluidos corporales o tejidos detecta directamente patógenos replicantes y proporciona material de origen para la investigación14,17. Este protocolo demuestra la metodología y las recetas necesarias para cultivar con éxito las espiroquetas del grupo LB, así como RF Borrelia y B. miyamotoi. El medio básico para cultivar espiroquetas de Borrelia es el medio Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II o el BSK-H disponible comercialmente), con o sin antibióticos para reducir el crecimiento de procariotas contaminantes. Este medio fue adaptado de un medio utilizado originalmente para soportar RF Borrelia19, modificado por Stoenner20 y luego por Barbour21. Desde entonces, se han desarrollado muchas modificaciones, cada una con efectos sobre la fisiología bacteriana que pueden afectar el crecimiento, la infectividad y la patogenicidad22. Este medio apoya de manera confiable el crecimiento de espiroquetas en cultivos establecidos y ha sido utilizado para aislar espiroquetas de garrapatas, mamíferos y muestras clínicas23. La variación desarrollada más recientemente, el medio Kelly-Pettenkofer (MKP) modificado, puede proporcionar un mejor éxito de aislamiento, morfología y motilidad al aislar nuevos aislados de Borrelia de muestras ambientales, cuando el número de espiroquetas presentes en la muestra disponible para sembrar el cultivo es bajo23,24. En todos los casos, el éxito del cultivo depende críticamente del medio recién preparado y del uso de ingredientes apropiados; No todos los ingredientes comerciales producen medios de alta calidad. Los cultivos inoculados pueden incubarse convenientemente sin agitar en una incubadora convencional a 32-34 °C en presencia de una pequeña cantidad de oxígeno ambiental residual. Las espiroquetas de Borrelia son anaerobias, pero están expuestas en la naturaleza a fluctuaciones en las concentraciones de oxígeno y dióxido de carbono y responden con cambios en la expresión génica26,27,28,29. Por lo tanto, la expresión génica, el crecimiento y otros estudios metabólicos deben controlar los niveles de oxígeno y dióxido de carbono con el uso de una incubadora controlada por oxígeno o una cámara anaeróbica. En cultivo, los cultivos se revisan semanalmente, o más a menudo, para detectar la presencia de espiroquetas con microscopía de campo oscuro o microscopía de contraste de fase. Los frotis de cultivo se pueden teñir con tinciones de plata, inmunohistoquímica o mediante el uso de cepas marcadas con fluorescencia29,30. La PCR seguida de secuenciación del ADN es un método sensible y específico para detectar e identificar genéticamente o confirmar la especie Borrelia 30,31,32,33.
Existen muchas variaciones menores en BSK-II, y algunas están disponibles comercialmente. El protocolo descrito aquí en la sección 1 ha sido adaptado de Barbour (1984)21. El medio MKP líquido es un medio desarrollado más recientemente y se describe en la sección 2. Se prepara de acuerdo con un protocolo previamente reportado33,34, que, al igual que el medio BSK, consta de dos pasos: preparación del medio básico y preparación del medio completo. El medio de cultivo de Borrelia se puede preparar con o sin antibióticos, como se describe en la sección 3; los antibióticos actúan para reducir las bacterias contaminantes introducidas al inocular con muestras clínicas o ambientales, como se describe en la sección 4; si se inocula con cultivo puro de Borrelia sp., es posible que no se necesiten antibióticos. La fabricación de existencias de Borrelia a largo plazo es a menudo importante, y un protocolo para hacerlo se describe en la sección 5. La Sección 6 describe el uso de estos medios para aislar clones puros de Borrelia sensu lato de muestras clínicas o ambientales. Hay una serie de enfoques posibles36; A continuación se muestra uno que se encuentra para ser eficaz. El medio de recubrimiento utilizado en este protocolo es una modificación del medio de recubrimiento BSK-II37 y del medio MKP34 (con suero de conejo aumentado al 10%38).

<table><tbody><tr><td>Tubos de 1,7 ml VWR</td><td></td><td>87003-294</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr><tr><td>0,2&nbsp; y micro; m Filtro de jeringa estéril&nbsp;</td><td>VWR</td><td>28145-501</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>10 &micro; Punta de pipeta de barrera L</td><td>Neptune</td><td>BT10XLS3</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>pipetas serológicas de 10 mL&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229011B</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>1000 &micro; Punta de pipeta de barrera L</td><td>Neptune</td><td>BT1000.96</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>un tubo de 15 ml</td><td>Celltreat</td><td>188261</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>20 y micro; Punta de pipeta de barrera L</td><td>Neptune</td><td>BT20</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>20 mL Jeringa estéril&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>200 y micro; Punta de pipeta de barrera L</td><td>Neptune</td><td>BT200</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>25 mL Tubos de cultivo con tapón de rosca</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-933C</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>25 mL Pipetas serológicas</td><td>Celltreat</td><td>229025B</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr> 3 <tr><td>mL Jeringa estéril</td><td>BD</td><td>309657</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>35% BSA&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A-7409</td><td>La fuente es importante - ver nota</td></tr><tr><td>5 mL Pipetas serológicas&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229006B</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>un tubo de 50 ml</td><td>Celltreat</td><td>229421</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>tubos de vidrio MKP de 6,5 ml&nbsp;</td><td>Schott</td><td>Schott Nr. 26 135 115</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Amikacine</td><td>Sigma</td><td>PHR1654</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Sigma</td><td>A9528-100MG</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Bactrim / rimetoprima / sulfametoxazol</td><td>Sigma</td><td>PHR1126-1G</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>caldo BBL Brucella &nbsp;</td><td>BD</td><td>211088</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr><tr><td>Gabinete de bioseguridad</td><td>Labconco</td><td>302419100</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr><tr><td>Tubos de extracción de sangre (parte superior amarilla - ACD)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp; Tubos de recolección de sangre de vidrio Vacutainer con citrato ácido dextrosa (ACD)</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>BSK-H Medio [w 6% Suero de conejo]&nbsp;</td><td>Productos biológicos de Darlynn</td><td>BB83-500</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>centrífuga &nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>modelo 5430</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr>: <tr><td>Ácido cítrico TrisodioSalDihidrato</td><td>Sigma</td><td>C-8532 100 g</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr><tr><td>CMRL</td><td>Gibco BRL</td><td>21540 500 mL</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr><tr><td>CMRL-1066</td><td>Gibco</td><td>21-510-018</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr><tr><td>Tubos criogénicos (Nalgene)</td><td>Fisher Scientific</td><td>5000-0020</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Petri profunda con anillo de apilamiento de 100 mm y veces; 25 mm</td><td>Sigma</td><td>P7741</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Incubadora digital</td><td>VWR</td><td>modelo 1545</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ThermoFisher</td><td>D12345</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Filtros para la esterilización de</td> <td>filtrosMillipore 0.22&mu; m GPExpressPLUS Membrana</td><td>SCGPU05RE</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Difco BD</td><td>214340 500 g</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Tubos de cultivo de vidrio</td><td>Fisher Scientific</td><td>99449-20</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Glucosa</td><td>Sigma</td><td>G-7021 1 kg</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Hemafuge (Hematocrit & Centrífuga de inmunohematología )</td><td>Labwissen</td><td>Modelo 3220</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma &nbsp;</td><td>H-3784 100 g</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>N-acetilglucoseamina</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>A-3286 25 g</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Neopeptone</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>211681 500 g</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Hematocitómetro Neubauer</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>Z359629</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará:</td></tr><tr><td>Microscopio de contraste de fase&nbsp;</td><td>Leitz</td><td></td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Fosfomicina</td><td>Sigma</td><td>P5396-1G</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Fosfomicina</td><td>Sigma</td><td>P5396</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Pipetboy</td><td>Integra</td><td></td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Balanza estándar de precisión</td><td>OHAUS</td><td>modelo TS200S</td><td>Artículo estándar - cualquier el proveedor hará</td></tr><tr><td>ácido pirúvico (sal de Na)</td><td>Sigma</td><td>P-8574 25 g</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Suero de conejo &nbsp;</td><td>Gibco</td><td>16-120-032</td><td>La fuente es importante&nbsp;</td></tr><tr><td>Suero de conejo &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>R-4505&nbsp; La fuente de 100 mL</td><td>es importante&nbsp;</td></tr><tr><td>Rifampicina</td><td>Sigma</td><td>R3501-1G</td><td>Artículo estándar - cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sodio</td><td>Sigma</td><td>S-5761 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 500 g</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>Sufametaxazol &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>PHR1126</td><td>artículo estándar: cualquier proveedor hará</td></tr><tr><td>TC Yeastolate</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>255752 100 g</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr><tr><td>Pipetas de transferencia</td><td>VWR</td><td>470225-044</td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará.</td></tr><tr><td>Trimethoprim</td><td>Sigma PHR1056</td><td></td><td>Artículo estándar: cualquier proveedor lo hará</td></tr></tbody></table>

métodos de cultivo de espiroquetas de borrelia burgdorferi sensu lato complex y fiebre recidivante borrelia

Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia

La Borrelia consiste en tres grupos de especies, las del grupo de la borreliosis de Lyme (LB), también conocido como B. burgdorferi sensu lato (s.l.) y recientemente reclasificado en Borreliella, el grupo de la fiebre recurrente (RF) Borrelia, y un tercer grupo de espiroquetas asociado a reptiles. Los métodos basados en el cultivo siguen siendo el estándar de oro para la detección de infecciones bacterianas en el laboratorio tanto para la investigación como para el trabajo clínico, ya que el cultivo de patógenos a partir de fluidos corporales o tejidos detecta directamente patógenos replicantes y proporciona material de origen para la investigación. Las espiroquetas de Borrelia y Borreliella son fastidiosas y de crecimiento lento, y por lo tanto no se cultivan comúnmente con fines clínicos; Sin embargo, la cultura es necesaria para la investigación. Este protocolo demuestra la metodología y las recetas necesarias para cultivar con éxito espiroquetas LB y RF, incluidas todas las especies reconocidas del complejo B. burgdorferi s.l., incluidas B. afzelii, B. americana, B. andersonii, B. bavariensis, B. bissettii/bissettiae, B. burgdorferi sensu stricto (s.s.), B. californiensis, B. carolinensis, B. chilensis, B. finlandensis, B. garinii, B. japonica, B. kurtenbachii, B. lanei, B. lusitaniae, B. maritima, B. mayonii, B. spielmanii, B. tanukii, B. turdi, B. sinica, B. valaisiana, B. yangtzensis yespiroquetas RF, B. anserina, B. coriaceae, B. crocidurae, B. duttonii, B. hermsii, B. hispanica, B. persica, B. recurrentis y B. miyamotoi. El medio básico para cultivar espiroquetas LB y RF es el medio Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II o BSK-H), que apoya de manera confiable el crecimiento de espiroquetas en cultivos establecidos. Para poder cultivar aislados de Borrelia recién aislados a partir de muestras derivadas de garrapatas o huéspedes donde el número inicial de espiroquetas es bajo en el inóculo, se prefiere el medio Kelly-Pettenkofer (MKP) modificado. Este medio también apoya el crecimiento de B. miyamotoi. El éxito del cultivo de espiroquetas de RF también depende críticamente de la calidad de los ingredientes.

Los medios de cultivo de Borrelia BSK y MKP, y sus variantes, son medios de cultivo ricos con ingredientes que deben prepararse y esterilizarse secuencialmente. Cuando se prepara correctamente, el medio BSK debe ser rojo-naranja y transparente (Figura 1). La turbidez y la precipitación que persisten después del calentamiento indican ingredientes problemáticos, producción media o contaminación; Tal medio es mejor descartarlo. Si se añade gelatina a BSK y con MKP, el medio será gelati...

El cultivo in vitro es un método de detección directa de la presencia de bacterias vivas. Este protocolo describe métodos para el cultivo de diversas espiroquetas de Borrelia, incluidas las del complejo Borrelia burgdorferi sensu lato, las especies de fiebre recidivante de Borrelia y Borrelia miyamotoi. Estas especies son fastidiosas y de crecimiento lento, pero pueden ser cultivadas.

Métodos de cultivo de espiroquetas de Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex y fiebre recidivante Borrelia

The Borrelia consists of three groups of species, those of the Lyme borreliosis (LB) group, also known as B. burgdorferi sensu lato (s.l.) and recently ...

Borrelia es un género de bacterias espiroquetas que abarca tres tipos principales. El grupo de borreliosis de Lyme, el grupo de fiebre recurrente y el grupo menos caracterizado que se encuentra en reptiles. Muchas especies de Borrelia son patógenas.El cultivo de bacterias es el estándar de oro para la detección de infecciones. Esto es cierto tanto para la investigación como para el trabajo clínico. El cultivo de bacterias a partir de fluidos corporales y tejidos confirma que las bacterias son viables y se replican.Este protocolo demuestra la metodología y las recetas necesarias para cultivar y preservar con éxito el grupo de espiroquetas de Lyme Boreliosis, Borrelia de fiebre recurrente y Borrelia miyamotoi. Se proporcionan métodos para el cultivo de especies y cepas previamente aisladas, así como nuevos aislados y aislados monoclonales de fuentes ambientales o de mamíferos. La demostrará el procedimiento a cargo de Marie-Line Faucillion, investigadora postdoctoral, e Ingela Nilsson, técnica del Laboratorio Bergstrom, Anne Berthold, investigadora asociada del Lloyd Lab, y Maryna Golovchenko, investigadora asociada del Laboratorio Rudenko.Para empezar, obtenga los reactivos necesari

cultivation-methods-spirochetes-from-borrelia-burgdorferi-sensu-lato

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Lyme estudios de investigación de la enfermedad a menudo requieren la generación de garrapatas infectadas con el patógeno Borrelia burgdorferi, un proceso que suele tardar varias semanas. Aquí se demuestra un procedimiento tick microinyección basado en una infección que se puede lograr en cuestión de horas. También demostramos un método de inmunofluorescencia para la localización in situ de B. burgdorferi en garrapatas.

Métodos para la transferencia rápida y localización de la enfermedad de Lyme patógenos en el intestino garrapatas

Fuente: Eggers, C. H. Manipulación genética mediada por fagos de la espiroqueta de la enfermedad de Lyme Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la preparación de un cultivo de Borrelia burgdorferi modificado genéticamente diseñado con ADN de bacteriófago latente que porta un gen de resistencia a los antibióticos. Después de la selección e incubación de antibióticos, un inductor químico desencadena daños en el ADN, lo que lleva a la escisión, replicación y ensamblaje de...

Preparación e inducción de cultivos de Borrelia burgdorferi para la producción de partículas virales

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

La enfermedad de Lyme es la enfermedad transmitida por vectores más comúnmente reportados en América del Norte. El agente causante, Borrelia burgdorferi es una bacteria espiroqueta transmitida por garrapatas ixódidas. Transmisión y detección de la infección en modelos animales se optimiza mediante el uso de la alimentación de la señal, que se describe aquí.

La alimentación de las garrapatas de los animales para Transmisión y xenodiagnóstico en Lyme Investigación de Enfermedades

PCR anidada es una técnica sensible, específica y directa que se puede aplicar a garrapata que extractos de ADN para sonda de burgdorferi de Borrelia, el agente causativo de la enfermedad de Lyme. El experimento inicial de PCR utiliza cartillas gene-específicas para generar amplicones de largo, que luego se convierten en plantillas para una posterior reacción usando cebadores internos.

Detectar el Spirochete de la enfermedad de Lyme, Burgdorferi de Borrelia, de garrapatas mediante PCR anidado

Los ensayos de transcripción in vitro pueden descifrar los mecanismos de regulación transcripcional en Borreliella burgdorferi. Este protocolo describe los pasos para purificar la ARN polimerasa de B. burgdorferi y realizar reacciones de transcripción in vitro. Los enfoques experimentales que utilizan ensayos de transcripción in vitro requieren una purificación y almacenamiento confiables de ARN polimerasa activa.

Componentes esenciales de los ensayos de transcripción in vitro de Borreliella (Borrelia) burgdorferi

La capacidad de los bacteriófagos para mover el ADN entre las células bacterianas los convierte en herramientas efectivas para la manipulación genética de sus huéspedes bacterianos. Aquí se presenta una metodología para inducir, recuperar y usar φBB-1, un bacteriófago de Borrelia burgdorferi, para transducir ADN heterólogo entre diferentes cepas de la espiroqueta de la enfermedad de Lyme.

Manipulación genética mediada por fagos de la enfermedad de Lyme Espiroqueta Borrelia burgdorferi

Se utilizó un sistema de análisis de flujo de fluorescencia de doble reportero de tres canales para desarrollar un inmunoensayo múltiple basado en perlas que evalúa simultáneamente muestras de suero para IgG e IgM provocadas contra múltiples antígenos de diferentes especies de Borrelia que causan borreliosis de Lyme en Europa y América del Norte.

Detección simultánea de diferentes clases de anticuerpos en una prueba serológica multiplexada

En este artículo se presenta la metodología para la exposición de humanos a larvas de Ixodes scapularis para investigación clínica. La técnica es relativamente simple, tolerable por los voluntarios de investigación, y puede ser modificada de acuerdo con las necesidades experimentales. Dicha investigación con seres humanos debe llevarse a cabo bajo protocolos de estudio clínico aprobados por las autoridades reguladoras correspondientes.

Un modelo para la exposición experimental de humanos a larvas de garrapatas Ixodes scapularis

Desarrollamos un sistema transwell ex vivo humano capaz de evaluar cambios inflamatorios agudos, infecciosos y estructurales en el sinovio.

Un modelo preclínico de sinopolitis utilizando tejido sinovial humano ex vivo con función y arquitectura preservadas

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Métodos de cultivo de espiroquetas de Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex y fiebre recidivante Borrelia

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