Name: Técnica quirúrgica para la ganglionectomía cervical superior en un modelo murino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-02T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Aprende la técnica de ganglionectomía cervical superior en ratones para estudiar la ablación adrenérgica unilateral. Este método minimiza efectos secundarios y evita la disección de la arteria carótida.

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Q. W. recibió el apoyo de NIH T32CA009685. R. J. W. recibió el apoyo de NIH R01CA219534. Las instalaciones centrales del Memorial Sloan Kettering Cancer Center contaron con el apoyo de los NIH P30CA008748.

Los procedimientos con animales descritos aquí fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Aquí se utilizaron ratones NSG machos y hembras de ocho semanas de edad. Los animales se obtuvieron de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales). Los instrumentos se esterilizan, se desinfecta la superficie de trabajo quirúrgico, se desinfecta la superficie de la piel del animal y el cirujano usa guantes estériles durante todo el procedimiento.
1. Preparación de los ratones y configuración preoperatoria
<ol><li>El día antes de la cirugía, anestesiar al ratón con isoflurano al 2% en una cámara de inducción (3,75 de ancho x 9 de profundidad x 3,75 de alto, ver Tabla de Materiales). NOTA: Un plano quirúrgico de anestesia generalmente se logra en 3-5 minutos, dependiendo de cada animal. Evaluar la idoneidad de la anestesia mediante el pellizco del dedo del pie y aumentar el porcentaje de isoflurano según corresponda.<ol><li>Afeitar la cara ventral del cuello o utilizar un agente químico de depilación de acuerdo con las instrucciones del fabricante (ver Tabla de Materiales).</li>
	</ol></li>
	<li>El día de la cirugía, anestesiar al ratón con isoflurano al 2% en una cámara de inducción. Evaluar la idoneidad de la anestesia mediante el pellizco del dedo del pie y aumentar el porcentaje de isoflurano según corresponda.</li>
	<li>Administrar 2 mg/kg de meloxicam por vía subcutánea para analgesia sistémica preventiva. Aplique ungüento oftálmico tópico (ver Tabla de materiales) para prevenir lesiones oculares y sequedad bajo anestesia.</li>
	<li>Coloque al ratón bajo un microscopio de disección en su lado dorsal y proporciónele soporte térmico. Mantenga la anestesia inhalatoria con isoflurano al 2%-2.5% usando un vaporizador de precisión y un cono nasal. Asegure suavemente ambas extremidades anteriores con cinta hipoalergénica (consulte la Tabla de materiales).</li>
	<li>Limpie la cara ventral afeitada del cuello con povidona yodada y luego limpie con alcohol al 70%. Repite este proceso dos veces más. Asegúrese de que el sitio quirúrgico esté libre de cabello suelto. NOTA: También se puede usar un par de pinzas cortas curvas. Asegúrese de usar un par de pinzas finas u oftálmicas para trabajar adecuadamente en este espacio confinado. Se puede incluir una configuración preoperatoria adicional según las pautas institucionales.</li>
</ol>2. Disección
<ol><li>Realice una incisión de 1,5 cm en la línea media de la piel en la cara ventral del cuello con unas tijeras pequeñas desde aproximadamente 2 mm por debajo de la barbilla hasta 2 mm por encima de la muesca esternal.</li>
	<li>Retraiga los bordes de la piel lateralmente con pinzas para exponer la fascia subyacente y las glándulas salivales submandibulares. Separe la piel de la fascia subyacente insertando unas tijeras puntiagudas debajo de la piel a cada lado y extendiéndola. Tire hacia abajo de las glándulas submandibulares caudalmente con fórceps para revelar los músculos subyacentes.</li>
	<li>Localice la unión del vientre posterior del músculo digástrico y el músculo omohioideo (Figura 1A, círculo negro). La vena yugular anterior se ve corriendo longitudinal y lateral al músculo omohioideo. NOTA: El músculo omohioideo cubre la tráquea longitudinalmente, mientras que el músculo digástrico se encuentra transversalmente en la cara craneal de la tráquea (Figura 1C).<ol><li>Inserte la punta de las pinzas en ángulo de 45° en esta unión, lateral a la vena yugular anterior, para perforar y extender una abertura en la fascia cervical profunda suprayacente.</li>
	</ol></li>
	<li>Mantenga abierta esta ventana creada en el paso 2.3.1 con las pinzas en ángulo de 45°. Amplíe esta abertura realizando maniobras de extensión con un par de pinzas curvas en la otra mano.</li>
</ol>3. Identificación y resección del ganglio
<ol><li>Localice el ganglio cervical superior (SCG) en la pared lateral del espacio revelado. Aparece como un tejido redondo y nacarado. NOTA: Si no se identifica el SCG, los tejidos de este espacio deben examinarse más lateral y superiormente. El SCG puede confundirse fácilmente con la grasa, que a menudo está presente en esta región. La grasa tiene un tinte ligeramente amarillo, mientras que, por el contrario, el SCG aparece de color blanco perla.</li>
	<li>Mientras mantiene la abertura con fórceps con la otra mano, sujete suavemente el SCG con pinzas y sáquelo de la abertura para que se vea mejor.</li>
	<li>Una vez que el SCG esté a la vista, agarre la base lateral del SCG, donde todavía está unido a los tejidos circundantes. Con la otra mano, retraiga lenta y suavemente el SCG en dirección ventral y caudal.<ol><li>Retraiga el SCG varias veces para avulpar gradualmente el ganglio poco a poco. Mantenga el ganglio intacto durante esta maniobra para asegurarse de que no queden restos de ganglios residuales. NOTA: Tire del ganglio suavemente, ya que puede producirse sangrado durante este paso. Si se produce una hemorragia leve, use celulosa regenerada oxidada o una pequeña tira de gasa estéril para mantener la presión sobre la abertura durante 30 s a 1 min. Luego, levante lentamente la gasa y vuelva a evaluar. Repita el proceso de mantener la presión sobre la abertura según sea necesario hasta que el sangrado se haya detenido.</li>
	</ol></li>
	<li>Suelte lentamente las otras pinzas que sujetan la base del ganglio. Compruebe si hay sangrado buscando sangre acumulada. NOTA: Es normal que haya una ligera supuración en este momento. Controle y asegúrese de que no haya sangrado persistente o significativo antes de cerrar y finalizar el procedimiento. Si esto ocurre, mantenga la presión sobre la abertura, como se describe en el paso 3.3.1.</li>
	<li>Mueva las glándulas salivales a sus posiciones anatómicas normales. Aproximar y cerrar la piel con suturas simples de nylon 5-0 interrumpidas (ver Tabla de Materiales).</li>
	<li>Coloque al ratón en una jaula limpia por sí mismo para permitir una recuperación completa de la anestesia. NOTA: El ratón puede tardar entre 5 y 15 minutos en despertarse completamente de la anestesia. No deje al ratón desatendido hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal. No coloque al ratón en una jaula con otros ratones hasta que se haya recuperado por completo. Evaluar la recuperación postquirúrgica del ratón al menos una vez cada 24 h durante 72 h.</li>
</ol>

<ol><li>Magnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nerve+development+contributes+to+prostate+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression.</a> Science. 341 (6142), 1236361(2013).</li>
<li>Zhao, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denervation+suppresses+gastric+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Denervation suppresses gastric tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014).</li>
<li>Zahalka, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+nerves+activate+an+angio-metabolic+switch+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer.</a> Science. 358 (6361), 321-326 (2017).</li>
<li>Amit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+p53+drives+neuron+reprogramming+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer.</a> Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).</li>
<li>Renz, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+signaling+via+muscarinic+receptors+directly+and+indirectly+suppresses+pancreatic+tumorigenesis+and+cancer+stemness%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).</li>
<li>Lucido, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+cervical+carcinoma+is+mediated+by+cancer-derived+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes.</a> Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).</li>
<li>Peterson, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+cell+carcinoma+preferentially+arises+from+stem+cells+within+hair+follicle+and+mechanosensory+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches.</a> Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).</li>
<li>Maronde, E., Stehle, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mammalian+pineal+gland%3A+Known+facts%2C+unknown+facets%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).</li>
<li>Yamazaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+circadian+organization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Rhythms%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of circadian organization in the rat.</a> Journal of Biological Rhythms. 24 (1), 55-63 (2009).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S100%2B+cells%3A+A+new+neuro-immune+cross-talkers+in+lymph+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">S100+ cells: A new neuro-immune cross-talkers in lymph organs.</a> Scientific Reports. 3 (1), 1114(2013).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+protects+the+retina+from+experimental+nonexudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pineal+Research%22%5BJournal%5D)">Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice.</a> Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643(2020).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+superior+cervical+ganglionectomy+attenuates+the+progression+of+%CE%B2-aminopropionitrile-induced+aortic+dissection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Bilateral superior cervical ganglionectomy attenuates the progression of β-aminopropionitrile-induced aortic dissection in rats.</a> Life Sciences. 193, 200-206 (2018).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+superior+cervical+sympathetic+ganglion+in+ischemia+reperfusion-induced+acute+kidney+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of the superior cervical sympathetic ganglion in ischemia reperfusion-induced acute kidney injury in rats.</a> Frontiers in Medicine. 9, 792000(2022).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+ganglionectomy+alters+gut+microbiota+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Superior cervical ganglionectomy alters gut microbiota in rats.</a> American Journal of Translational Research. 14 (3), 2037-2050 (2022).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+signaling+induces+Notch-mediated+salivary+gland+progenitor+cell+control%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic signaling induces Notch-mediated salivary gland progenitor cell control.</a> Stem Cell Reports. 16 (11), 2813-2824 (2021).</li>
<li>Boyd, A., Aragon, I. V., Abou Saleh, L., Southers, D., Richter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cAMP-phosphodiesterase+4+%28PDE4%29+controls+%CE%B2-adrenoceptor-+and+CFTR-dependent+saliva+secretion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">The cAMP-phosphodiesterase 4 (PDE4) controls β-adrenoceptor- and CFTR-dependent saliva secretion in mice.</a> Biochemical Journal. 478 (10), 1891-1906 (2021).</li>
<li>Smith, B., Butler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+long-term+propranolol+on+the+salivary+glands+and+intestinal+serosa+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The effects of long-term propranolol on the salivary glands and intestinal serosa of the mouse.</a> The Journal of Pathology. 124 (4), 185-187 (1978).</li>
<li>Sucharov, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+receptor+antagonism+in+mice%3A+A+model+for+pediatric+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic receptor antagonism in mice: A model for pediatric heart disease.</a> Journal of Applied Physiology. 115 (7), 979-987 (2013).</li>
<li>Ding, C., Walcott, B., Keyser, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+alpha1-+and+beta1-adrenergic+modulation+of+lacrimal+gland+function+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The alpha1- and beta1-adrenergic modulation of lacrimal gland function in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (4), 1504-1510 (2007).</li>
<li>Grisanti, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prior+%CE%B2-blocker+treatment+decreases+leukocyte+responsiveness+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Prior β-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury.</a> JCI Insight. 5 (9), 99485(2019).</li>
<li>Alito, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nervous+system+regulation+of+murine+immune+responses+as+assessed+by+local+surgical+sympathetic+and+parasympathetic+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%2C+Pharmacologica+et+Therapeutica+Latinoamericana%22%5BJournal%5D)">Autonomic nervous system regulation of murine immune responses as assessed by local surgical sympathetic and parasympathetic denervation.</a> Acta Physiologica, Pharmacologica et Therapeutica Latinoamericana. 37 (3), 305-319 (1987).</li>
<li>Yun, H., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+sympathetic+nerves+in+herpes+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A central role for sympathetic nerves in herpes stromal keratitis in mice.</a> Ophthalmology & Visual Science. 57 (4), 1749-1756 (2016).</li>
<li>Haug, S. R., Heyeraas, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sympathectomy+on+experimentally+induced+pulpal+inflammation+and+periapical+lesions+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of sympathectomy on experimentally induced pulpal inflammation and periapical lesions in rats.</a> Neuroscience. 120 (3), 827-836 (2003).</li>
<li>Savastano, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+surgical+technique+for+rat+superior+cervical+ganglionectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).</li>
<li>Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+superior+cervical+ganglionectomy+on+insulin+release+by+murine+pancreas+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Autonomic+Nervous+System%22%5BJournal%5D)">Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).</li>
<li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).</li>
<li>Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+superior+cervical+ganglia+modulate+ventilatory+responses+to+hypoxia+independently+of+preganglionic+drive+from+the+cervical+sympathetic+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain.</a> Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+gangliectomy+induces+non-exudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031641(2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivation+of+sympathetic+nerves+drives+depletion+of+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells.</a> Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).</li>
<li>Pirzgalska, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+neuron-associated+macrophages+contribute+to+obesity+by+importing+and+metabolizing+norepinephrine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine.</a> Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).</li>
<li>Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxo1+regulates+Dbh+expression+and+the+activity+of+the+sympathetic+nervous+system+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo.</a> Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este protocolo describe un modelo murino para la ablación quirúrgica unilateral de la entrada de SCG. Esta técnica permite estudiar los efectos de la inervación adrenérgica en diversos entornos. Además, el ganglio simpático resecado también puede cultivarse en cultivo de matrigel 3D para experimentos in vitro 30.
Los estudios que involucran SCGx se han realizado principalmente en ratas, ya que su anatomía más grande permite una visualización y disección anatómi...

Múltiples estudios han reportado que los nervios en el microambiente tumoral desempeñan un papel activo en el apoyo a la progresión tumoral. Se ha demostrado que la ablación de los nervios simpáticos adrenérgicos perjudica el desarrollo y la diseminación tumoral en el cáncer de próstata y gástrico in vivo 1,2,3, mientras que el bloqueo farmacológico de los receptores adrenérgicos inhibe el crecimiento tumoral en el cáncer de cabeza y cuello4. También se ha descrito afectación neural simpática en la progresión del carcinoma de páncreas, cuello uterino y basocelular 5,6,7.
Dentro del sistema nervioso simpático, el ganglio cervical superior (SCG) es el único ganglio del tronco simpático que inerva la cabeza. El SCG regula diversas funciones fisiológicas, como la secreción salival y el ritmo circadiano, e inerva directamente los ganglios linfáticos cervicales 8,9,10. El SCG también ha sido implicado en procesos patológicos como la degeneración macular11 y la progresión de la disección aórtica12. Además, se ha descrito que la resección del SCG agrava la lesión renal aguda inducida por la isquemiareperfusión 13 y también altera la microbiota intestinal en ratas14.
La ablación completa de la SCG en un modelo de ratón representaría una técnica experimental valiosa para permitir la investigación del cáncer y del sistema nervioso autónomo. Si bien muchos estudios han utilizado el bloqueo farmacológico del receptor adrenérgico como ablación adrenérgica 15,16,17,18,19,20, la resección quirúrgica permite una ablación adrenenérgica completa y unilateral, evitando la necesidad de una intervención farmacológica repetida y los efectos secundarios asociados 21,22,23.
La resección quirúrgica de la SCG se ha descrito en ratas24, y la mayoría de los informes que estudian el efecto de la ganglionectomía cervical superior (SCGx) han empleado el modelo de rata. En comparación con el modelo de rata, SCGx es técnicamente más desafiante en ratones debido al pequeño tamaño de la SCG. Sin embargo, los ratones son comparativamente más fáciles de manejar, más rentables y más susceptibles a la manipulación genética. García et al. fueron uno de los primeros en reportar SCGx en ratones, y se encontró que afectaba la liberación de insulina25. Más recientemente, Ziegler et al. describieron SCGx en ratones basándose en la técnica publicada descrita para ratas24,26. Este y otros artículos describen un método en el que primero se identifica y disecciona la arteria carótida común (ACC), y posteriormente se retira el SCG de la bifurcación de la CCA21,22,27,28. En este artículo, se describe una técnica menos invasiva y más segura en ratones que evita la disección de la ACC, minimizando así la complicación más grave de este procedimiento: el sangrado por una lesión en la CCA.

<table><tbody><tr><td>Anticuerpo anti-tirosina hidroxilasa</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Lágrimas Artificiales Lubricante Ungüento oftálmico</td><td>Akorn</td><td>59399-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Curity 2 x 2 pulgadas Esponja de gasa de 8 capas, estéril</td><td>Covidien</td><td>1806</td><td></td></tr><tr><td>Derf Portaagujas</td><td>Thomas Scientific</td><td>1177K00</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td></td><td></td><td></td> de disección</tr><tr><td>Pinzas Dumont #5/45</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de #7b Dumont</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>ETHILON Sutura de nylon</td><td>Ethicon</td><td>698H</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras finas - ToughCut</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Cinta quirúrgica hipoalergénica</td><td>3M Blenderm</td><td>70200419342</td><td></td></tr><tr><td>Induction Cámara, 2</td><td>Litros VetEquip</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>Church & Dwight Co., Inc</td><td>40002957</td><td>agente químico depilatorio</td></tr><tr><td>NORADRENALINE RESEARCH ELISA</td><td>Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)</td><td>BA E-5200</td><td></td></tr><tr><td>NSG Ratón</td><td>Jackson Laboratorio</td><td>JAX:005557</td><td></td></tr><tr><td>Povidona Yodada</td><td>Hisopo PDI</td><td>S41350</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Preparaciones de Alcohol</td><td>Covidien</td><td>5110</td><td></td></tr></tbody></table>

técnica quirúrgica para la ganglionectomía cervical superior en un modelo murino

Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model

Cada vez hay más pruebas que sugieren que el sistema nervioso simpático desempeña un papel importante en la progresión del cáncer. La inervación adrenólica regula la secreción de las glándulas salivales, el ritmo circadiano, la degeneración macular, la función inmunitaria y la fisiología cardíaca. La simpatectomía quirúrgica murina es un método para estudiar los efectos de la inervación adrenérgica al permitir una ablación adrenérgica completa y unilateral, evitando la necesidad de una intervención farmacológica repetida y los efectos secundarios asociados. Sin embargo, la simpatectomía quirúrgica en ratones es técnicamente desafiante debido al pequeño tamaño del ganglio cervical superior. En este estudio se describe una técnica quirúrgica para identificar y resecar de forma fiable el ganglio cervical superior para extirpar el sistema nervioso simpático. La identificación y extirpación exitosas del ganglio se validan mediante la obtención de imágenes de los ganglios simpáticos fluorescentes utilizando un ratón transgénico, la identificación del síndrome de Horner posterior a la resección, la tinción de marcadores adrenérgicos en los ganglios resecados y la observación de una inmunofluorescencia adrenenérgica disminuida en los órganos diana después de la simpatectomía. Este modelo permite futuros estudios de la progresión del cáncer, así como de otros procesos fisiológicos regulados por el sistema nervioso simpático.

Este protocolo describe la extirpación quirúrgica de la SCG en un modelo de ratón. La figura 2 ilustra los puntos de referencia anatómicos, incluyendo el CCA, la vena yugular anterior y el SCG. Con la disección (Figura 2A), se puede ver la vena yugular anterior derecha discurriendo a lo largo del borde lateral de la tráquea. Como se encuentra más profundo que la vena yugular anterior, la CCA izquierda y su bifurcación en la arteria carótida interna (ACI) y la ar...

El presente protocolo describe un modelo murino de ablación de inervación adrenérgica mediante la identificación y resección del ganglio cervical superior.

Técnica quirúrgica para la ganglionectomía cervical superior en un modelo murino

Growing evidence suggests that the sympathetic nervous system plays an important role in cancer progression. Adrenergic innervation regulates salivary ...

El sistema nervioso simpático juega un papel importante en la progresión del cáncer y otras enfermedades. La simpatectomía quirúrgica es un método valioso para estudiar estos procesos mediante la inducción de una ablación adrenérgica unilateral completa. Esta técnica evita los efectos secundarios asociados a la inhibición farmacológica del sistema nervioso simpático.Además, es menos invasivo que los métodos descritos anteriormente porque evita la disección de la arteria carótida. Al realizar esta técnica, puede ser difícil entrar en el espacio correcto donde reside el ganglio y diferenciarlo de la grasa. Por lo tanto, es esencial identificar el punto de referencia y la práctica.La anatomía parece ligeramente diferente cuando está en movimiento y sin diseccionar, por lo que la demostración visual proporciona una mejor guía sobre cómo identificar el punto de referencia anatómico, que es clave para esta técnica. Comience aplicando ungüento oftálmico tópico al ratón anestesiado para prevenir lesiones oculares y sequedad. Coloque al ratón bajo un microscopio de disección en su lado dorsal y mantenga la anestesia inhalatoria usando un vaporizador de precisión y un cono nasal.Asegure ambas extremidades anteriores con cinta hipoalergénica. Limpie la cara ventral afeitada del cuello con povidona yodada y luego limpie con alcohol al 70%. Después de repetir el proceso de limpieza dos veces más, coloque un paño estéril sobre el sitio quirúrgico.A continuación, utilice unas tijeras pequeñas y haga una incisión de 1,5 centímetros en la piel de la línea media en la cara ventral del cuello desde aproximadamente dos milímetros por debajo de la barbilla hasta dos milímetros por encima de la muesca esternal. Separe la piel de la fascia subyacente insertando unas tijeras puntiagudas debajo de la piel a cada lado y extendiéndola. A continuación, retraiga los bordes de la piel lateralmente con pinzas para exponer la fascia subyacente y las glándulas salivales submandibulares.Tire de las glándulas submandibulares caudalmente con fórceps para revelar los músculos subyacentes. A continuación, localiza la unión del vientre posterior del músculo digástrico y el músculo omohioideo. Inserte la punta de las pinzas en ángulo de 45 grados en esta unión lateral a la vena yugular anterior para perforar y extender una abertura en la fascia cervical profunda suprayacente.Mantenga esta ventana abierta con las pinzas en ángulo de 45 grados y amplíe esta abertura más realizando maniobras de extensión con un par de pinzas curvas en la otra mano. Localice el ganglio cervical superior o SCG en la pared lateral del espacio revelado. Mientras mantiene la abertura con pinzas con la otra mano, sujete suavemente el SCG con pinzas y sáquelo de la abertura para que se vea mejor.Una vez que el SCG esté a la vista, agarre la base lateral del SCG donde aún está unido a los tejidos circundantes. Con la otra mano, retraiga lenta y suavemente el SCG en dirección ventral y caudal varias veces para avulsionar gradualmente el ganglio poco a poco. Mantenga el ganglio intacto durante esta maniobra para asegurarse de que no queden restos de ganglios residuales.Suelte lentamente la base del ganglio y verifique si hay sangrado buscando sangre acumulada. Una vez hecho esto, mueva las glándulas salivales a sus posiciones anatómicas normales. Aproximar y cerrar la piel con suturas simples de nylon 5-0 interrumpidas.Durante la disección, la vena yugular anterior derecha discurría a lo largo del borde lateral de la tráquea. Cuando se examinó el ratón transgénico P0 tdTomato con neuronas fluorescentes rojas bajo un microscopio fluorescente, se observó que el nervio vago fluorescente se desplazaba lateralmente a la arteria carótida común y el SCG fluorescente se observó en la bifurcación de la arteria carótida común lateral a la vena yugular anterior. La SCG resecada en un ratón transgénico fue confirmada por su fluorescencia roja en comparación con el control de SCG no fluorescente.La tinción inmunofluorescente confirmó una tirosina hidroxilasa, un marcador de los nervios adrenérgicos. Después de la ganglionectomía cervical superior, se observó ptosis, es decir, la caída del párpado, que es un signo del síndrome de Horner. La tinción por inmunofluorescencia de una tirosina hidroxilasa en la glándula salival submandibular derecha después de una ganglionectomía cervical superior derecha confirmó la ablación exitosa de la señalización adrenérgica con tinción del nervio tirosina hidroxilasa ausente.Por el contrario, la glándula submandibular de control izquierda mantuvo su entrada adrenenérgica e intacta una tinción nerviosa de tirosina hidroxilasa, lo que también se confirmó mediante cuantificación. La cuantificación ELISA de norepinefrina en la glándula salival confirmó una reducción significativa en la expresión de norepinefrina en la glándula submandibular en el lado de la ganglionectomía cervical superior en contraste con el lado de la cirugía simulada de control. Tenga paciencia y delicadeza al retirar el SCG.Avulsarlo lentamente de manera fragmentada. De lo contrario, la arteria carótida conectada al SCG puede lesionarse fácilmente y provocar una hemorragia.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

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