Name: Inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Aprende a crear un modelo de ratón con metástasis ósea mediante inyección intracardíaca de células PC3 de cáncer de próstata humano. Este método permite estudiar la progresión tumoral y evaluar terapias in vivo.

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Este trabajo está respaldado por subvenciones del Programa Nacional de Investigación y Desarrollo Clave de China (2018YFC1704300 y 2020YFE0201600), la Fundación Nacional de Ciencias de la Naturaleza (81973877 y 82174408), los proyectos de investigación dentro del presupuesto de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai (2021LK047) y el Centro de Innovación Colaborativa de Shanghai de Transformación Industrial de Preparación de MTC Hospitalaria.

Los ratones atímicos machos BALB/c machos de seis a ocho semanas de edad (n = 10) fueron alojados en jaulas de ratones ventilados individualmente (5 ratones/jaula) en una sala de animales libre de patógenos específicos (SPF) bajo las condiciones de ciclo de luz/oscuridad de 12 h, con libre acceso a alimento SPF y agua estéril. Los ratones fueron alimentados adaptativamente durante una semana antes de los experimentos. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el comité de bienestar animal de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai.
1. Preparación celular
<ol><li>El día de la inyección de células de cáncer de próstata, lavar dos veces las células PC-3 marcadas con luciferasa confluente (PC-3-luciferasa) marcadas con luciferasa confluente cultivadas en una placa de cultivo celular de 10 cm con PBS estéril prefría (pH 7.4). Tripsinizar durante 3 min con 1,5 ml de tripsina al 0,25% y recoger las células en un tubo de centrífuga de 15 ml después de enfriar la tripsina con 6 ml de medio F-12 que contiene 10% de suero. NOTA: La línea celular PC-3-luciferasa se deriva de la línea celular PC-3 después de ser transfectada con el vector pLV-luciferasa15.</li>
	<li>Utilice un contador automático de celdas y calcule la concentración de celdas transfiriendo 20 μL de la suspensión celular a la placa de conteo de celdas (consulte la Tabla de materiales).</li>
	<li>Centrifugar las células a 800 x g a temperatura ambiente (RT) durante 5 min.</li>
	<li>Utilice una pipeta para desechar el sobrenadante y resuspender el pellet celular en medio F-12 (ver Tabla de materiales) hasta una densidad celular final de 1 x 107 células/ml.</li>
	<li>Mantenga las células en hielo en todo momento hasta la inyección.</li>
	<li>Lleve las células a la sala de cirugía y termine la inyección de células dentro de 2 h. NOTA: Prepare suspensiones celulares adicionales (generalmente volúmenes duplicados según sea necesario) para garantizar dosis de inyección precisas (por ejemplo, para evitar los espacios muertos dentro de las jeringas).</li>
</ol>2. Cirugía para la inyección intracardíaca de las células de cáncer de próstata humano
NOTA: El aparato quirúrgico utilizado para la inyección intracardíaca es una jeringa de 1 ml (Figura 1). Proporcionar soporte térmico durante todo el procedimiento hasta la recuperación del animal de la anestesia.
<ol><li>Mantenga el ratón en la sala de animales SPF. Realice todos los procedimientos con aparatos esterilizados dentro de un gabinete aséptico.</li>
	<li>Anestesiar al ratón utilizando isoflurano al 2% con oxígeno al 98% bajo un caudal de oxígeno de 2 L/min. NOTA: Frote una pequeña cantidad de ungüento oftálmico en los ojos del ratón para evitar la sequedad durante la anestesia. Realice toda la cirugía en un área bien ventilada. Asegúrese de que el ratón esté profundamente anestesiado pellizcando los dedos de los pies del ratón antes de la inyección celular. Si las respuestas (p. ej., una sacudida o contracción) persisten, espere un tiempo adicional para que la anestesia surta efecto.</li>
	<li>Coloque el ratón en una posición de supone e inmovilice ambas extremidades superiores estiradas perpendicularmente lejos de la línea media (Figura 2A).</li>
	<li>Inmovilice al ratón desde el abdomen hacia abajo con cinta adhesiva quirúrgica. Evite presionar con fuerza y desplazar los órganos internos (Figura 2B). NOTA: El mantenimiento de la anatomía topográfica (es decir, la fijación con cinta adhesiva) es esencial ya que la inyección intracardíaca es ciega (es decir, el sitio preciso de inyección en el corazón es invisible a simple vista).</li>
	<li>Desinfecte la piel del tórax con un hisopo de etanol al 70%.</li>
	<li>Identifique el proceso xifoide del ratón en la depresión en el extremo más bajo del esternón medio palpando por el centro de la pared torácica anterior. Identifique la muesca yugular del ratón en la depresión central en el borde superior del manubrio palpando hacia arriba desde el centro de la pared torácica anterior.</li>
	<li>Etiquete el punto más inferior del proceso xifoide y la muesca yugular con un rotulador (Figura 2A). Haga una tercera marca en el medio de estos dos puntos de referencia y ligeramente a la derecha (izquierda del animal) justo sobre el corazón en el tercer espacio intercostal. NOTA: El sitio de inyección está a 1-2 mm a la izquierda de la línea media, y el punto de inyección está entre la tercera y cuarta costillas del ratón (Figura 2A).</li>
	<li>Cargue 200 μL de la suspensión celular en una jeringa de 1 ml. NOTA: Mantenga una burbuja de aire en la jeringa, como se muestra en la Figura 2C, para asegurarse de que la sangre esté pulsando. La suspensión celular debe mezclarse bien antes de cargarla.</li>
	<li>Inserte verticalmente una aguja de 26 G a través del lugar de inyección (Figura 2D).</li>
	<li>Mantenga la mano que sostiene la jeringa estable sobre la mesa, o use la otra mano para mantenerla estable. Asegúrese de que el eje largo de la jeringa sea perpendicular al lugar de la inyección e inserte la jeringa aproximadamente 2 mm por vía subcutánea.</li>
	<li>La pulsación sanguínea de color rojo brillante es visible en el cubo de la aguja y/o la suspensión celular cuando la punta de la aguja se inserta correctamente en el ventrículo izquierdo. Si la pulsación de la sangre es invisible, la punta de la aguja no está en el corazón. Retraiga y reemplace la aguja (en caso de que la coagulación de la sangre dentro de la aguja detenga la pulsación de sangre). Inserte la aguja una vez más.</li>
	<li>Inyecte las células. Inyecte la suspensión celular (100 μL) muy lentamente durante 40-60 s y mantenga la mano que sostiene la jeringa estable todo el tiempo. NOTA: Vigile de cerca la suspensión celular en la jeringa y no inyecte la burbuja de aire dentro de la jeringa en el corazón.</li>
	<li>Aplique presión en el lugar de la inyección con un hisopo de algodón seco durante 15 s para asegurar la hemostasia cuando se retrae la aguja.</li>
	<li>Devuelva el ratón a la jaula limpia y controle al animal hasta que se recupere completamente de la anestesia.</li>
	<li>Imagen del ratón con un sistema de bioluminiscencia in vivo dentro de las 24 horas posteriores a la inyección para garantizar que las células cancerosas hayan entrado en la circulación sistémica. NOTA: Las células cancerosas inyectadas correctamente ingresan a la circulación arterial a través del ventrículo cardíaco izquierdo, que se ve por la señalización de bioluminiscencia visible en todo el cuerpo (por ejemplo, vea la Figura 3A).</li>
	<li>Realizar imágenes de bioluminiscencia in vivo .<ol><li>Encienda el instrumento y la computadora. Abra el software cuando el indicador de encendido del instrumento y la computadora se ilumine y, a continuación, abra la ventana Adquisición de imágenes .</li>
		<li>Identifique el sistema de imágenes in vivo conectado al equipo en el panel del dispositivo. Coloque el ratón para obtener imágenes en la cámara de imágenes en posición supina. Luego cierre la puerta de la cámara de imágenes.</li>
		<li>Establezca los parámetros en el panel Configuración proporcionado en la ventana Adquisición de imágenes .<ol><li>Establezca los parámetros con Lens > Zoom > 1x, Lens > Focus > 108 y Lens > Iris > F 2.8 para que las imágenes sean claras.</li>
			<li>Ajuste el canal de disparo en Filtro y luz: filtro y luz > filtro > luminiscencia, filtro y luz > luz > apagado y filtro y luz > intensidad de luz > medio.</li>
			<li>Establezca el tipo de imagen que se va a tomar: Imaging > Type > Single-Frame, Imaging > Exposure Time > 500 ms, Imaging > HDR Mode > Low GainMode. Haga clic en el botón Adquirir para adquirir la imagen.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Visualice el crecimiento del cáncer metastásico con bioluminiscencia in vivo . NOTA: En cada punto de tiempo de la visualización, inyectar intraperitonealmente 200 μL del sustrato de luciferina en un ratón de 20 g (150 mg/kg) y esperar 15 min antes de la anestesia (isoflurano al 2% mezclado con oxígeno al 98% en una cámara de inducción). Coloque el ratón en la plataforma del sistema de imágenes de bioluminiscencia. Mantener la anestesia a través de una máscara nasal con isoflurano al 2%.</li>
</ol>3. Investigación patológica
<ol><li>Cuatro semanas después de la inyección celular, sacrifique al ratón por inhalación deCO2 y luego dislocación cervical.</li>
	<li>Inmovilizar el ratón en posición supina. Haga una incisión vertical (aproximadamente 6 cm) desde el abdomen hasta el tórax con tijeras quirúrgicas para exponer y examinar groseramente todos los órganos en el abdomen y el tórax en busca de lesiones cancerosas y / o cambios patológicos. NOTA: Para un estudio de inyección intracardíaca de células cancerosas, las lesiones cancerosas en el mediastino adyacente al corazón sugieren células cancerosas mal inyectadas (células no inyectadas en el ventrículo cardíaco izquierdo); Por lo tanto, estos ratones no se incluyen en la recopilación final de datos.</li>
	<li>Extirpar los tumores metastásicos con tijeras. Mida los diámetros largos (a) y cortos (b) del tumor usando calibradores para calcular el volumen del tumor (V) usando la fórmula V = 1/2 × a × b2, y pese el tumor usando una balanza electrónica.</li>
	<li>Fijar los tejidos tumorales en una solución de formalina al 10% seguida de incrustación en parafina. Alternativamente, congele rápidamente los tumores en nitrógeno líquido.</li>
	<li>Extirpar los huesos (extremidades posteriores, vértebras y/o costillas) con lesiones metastásicas. Fijar la muestra de cada ratón en un tubo de 50 ml que contenga 20 ml de solución de formalina al 10% durante 24 h después de retirar la piel y los músculos, seguido de descalcificación durante 14 días en solución de EDTA al 10% con cambio tampón frecuente (cada 3 días).</li>
	<li>Incrustar la muestra en parafina y seccionar las muestras para el examen histológico de rutina16.</li>
</ol>

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<li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response%2Fendoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).</li>
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</ol>

Todos los autores declaran que no hay intereses financieros en conflicto.

La inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para generar metástasis óseas es un modelo de ratón ideal para explorar las funciones y mecanismos de la metástasis ósea del cáncer de próstata y evaluar la eficacia terapéutica. Los estudios han demostrado que el daño óseo probablemente ocurre en la tibia proximal y el fémur distal17, lo que puede deberse a su alta vascularización y actividad metabólica.
Dado que la metástasis ósea es una lesión metastá...

El cáncer de próstata es el cáncer más frecuente en hombres en 112 países y ocupa el segundo lugar en mortalidad en los países con mayor índice de desarrollo humano 1,2. La mayoría de las muertes en pacientes con cáncer de próstata son causadas por metástasis, y alrededor del 65%-75% de los casos desarrollarán metástasis óseas 3,4. Por lo tanto, se necesitan urgentemente la prevención y el tratamiento de las metástasis óseas del cáncer de próstata para mejorar el resultado clínico de los pacientes con cáncer de próstata. El modelo animal de metástasis ósea es una herramienta indispensable para explorar el proceso multietapa y los mecanismos moleculares implicados en cada estadio de la metástasis ósea del cáncer de próstata, identificando así dianas terapéuticas y desarrollando nuevas terapias5.
Los métodos más comunes para generar modelos animales experimentales de metástasis óseas de cáncer de próstata incluyen la inyección ortotópica, intradiáfisis (como intratibial) e intracardíaca de células de cáncer de próstata. El modelo de metástasis ósea con inyección ortotópica se genera inyectando directamente células de cáncer de próstata en la próstata de un ratón 6,7. Este modelo animal experimental tiene características clínicas muy similares a la metástasis ósea del cáncer de próstata. Sin embargo, la metástasis ocurre principalmente en el ganglio linfático axilar y el pulmón más que en el hueso 8,9. El modelo de inyección intratibial para el cáncer de próstata inyecta directamente células de cáncer de próstata en la tibia con una alta tasa de formación de tumores en el hueso (tibia)10,11; Sin embargo, la corteza ósea y la cavidad de la médula ósea se dañan fácilmente. Además, el método de inyección tibial no puede estimular el proceso patológico de la metástasis ósea del cáncer de próstata en el que las células cancerosas colonizan el hueso a través de la circulación. Para investigar la circulación, la extravasación vascular y la metástasis a distancia con una mayor tasa de metástasis ósea de las células cancerosas, se ha desarrollado una técnica de inyección intracardíaca mediante la inyección directa de células de cáncer de próstata en el ventrículo izquierdo del ratón 8,12,13. Esto lo convierte en un modelo animal valioso para la investigación de metástasis óseas8. El método de inyección intracardíaca muestra una tasa de metástasis ósea de alrededor del 75%9,14, mucho más alta que el método de inyección ortotópica. Por lo tanto, la inyección intracardíaca es un método ideal para generar un modelo animal con metástasis óseas de cáncer de próstata.
Este trabajo tiene como objetivo describir el proceso de establecimiento de un modelo de ratón de metástasis óseas de cáncer de próstata, permitiendo a los lectores visualizar el establecimiento del modelo. El trabajo actual proporciona procesos detallados, precauciones e imágenes ilustrativas para generar un modelo de xenoinjerto de metástasis ósea a través de la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano en ratones atímicos. Este método proporciona una herramienta eficaz para explorar más a fondo los mecanismos moleculares y los efectos terapéuticos in vivo de la metástasis ósea del cáncer de próstata.

<table><tbody><tr><td>Jeringas y agujas de 1 mL</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td><td>20200411</td><td>Las células se inyectaron en los ventrículos de los ratones</td></tr><tr><td>Máquina de anestesia</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IP</td><td>Equipo para anestesiar ratones</td></tr><tr><td>Contador automático de células</td><td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td><td>IC1000</td><td>&nbsp; Para el recuento de células</td></tr><tr><td>BALB/c ratones atímicos</td><td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td><td>Macho</td><td>de 6-8 semanas de edad, ratones machos</td></tr><tr><td>Sistema de imagen de bioluminiscencia</td><td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td><td>Vieworks</td><td>Para rastrear el crecimiento tumoral y la metástasis pulmonar si las células inyectadas están marcadas con luciferasa</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga (15 mL, 50 mL)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>&nbsp; 430790, Corning</td><td></td></tr><tr><td>Solución EDTA</td><td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1105</td><td>&nbsp; Para la descalcificación de la tisura ósea</td></tr><tr><td>F-12</td><td>medio Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>21700075, GIBCO</td><td>Medio de cultivo celular</td></tr><tr><td>Solución de formalina</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>BL539A</td><td>Para la fijación de la muestra de cada ratón</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>VETEASY</td><td>Para anestesia&nbsp;</td></tr><tr><td>Lipofectamina 2000</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>11668027, Thermo fisher</td><td>Reactivo de transfección de plásmidos</td></tr><tr><td>Línea celular PC-3</td><td>Banco de células de la Academia China de Ciencias</td><td>TCHu 158</td> Línea celular de <td>cáncer de próstata</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Beyotime Biotechnology</td><td>ST447</td><td>Lavar las células de osteosarcoma humano</td></tr><tr><td>Tripsina (0.25%)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co. , Ltd</td><td>25200056, Gibco</td><td>Para separar las células</td></tr><tr><td>Vector (pLV-luciferasa)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>VL3613</td><td>Plásmido para el</td></tr><tr><td>sistema de imágenes de rayos X</td> de transfección <td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td><td>FX PRO</td><td>Para obtener imágenes de rayos X para detectar el crecimiento tumoral</td></tr><tr><td>&mu; CT80</td><td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td><td>Scanco Medical AG, Suiza</td><td>Para la detección de la destrucción ósea. El mico-CT está equipado con 3DCalc, reconstrucción de conos, &nbsp; y &mu; Software de visualización de modelos CT Ray V3.4A.</td></tr></tbody></table>

inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

Como la neoplasia maligna masculina más común, el cáncer de próstata (CP) ocupa el segundo lugar en mortalidad, principalmente debido a una tasa de metástasis ósea del 65% al 75%. Por lo tanto, es esencial comprender el proceso y los mecanismos relacionados con la metástasis ósea del cáncer de próstata para desarrollar nuevas terapias. Para ello, un modelo animal de metástasis ósea es una herramienta esencial. Aquí, informamos procedimientos detallados para generar un modelo de ratón con metástasis ósea a través de la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata. Un sistema de imágenes de bioluminiscencia puede determinar si las células de cáncer de próstata se han inyectado con precisión en el corazón y controlar la metástasis de las células cancerosas, ya que tiene grandes ventajas en el seguimiento del desarrollo de lesiones metastásicas. Este modelo replica el desarrollo natural de las células cancerosas diseminadas para formar micrometástasis en el hueso e imita el proceso patológico de la metástasis ósea del cáncer de próstata. Proporciona una herramienta eficaz para una mayor exploración de los mecanismos moleculares y los efectos terapéuticos in vivo de esta enfermedad.

Las imágenes de bioluminiscencia ofrecen enormes ventajas en el monitoreo del desarrollo de lesiones metastásicas para un modelo de inyección intracardíaca. Poco después de la inyección de células cancerosas (dentro de las 24 h), se utilizaron imágenes de bioluminiscencia para visualizar las células cancerosas que ingresan a la circulación general (Figura 3A). La señalización obvia de bioluminiscencia en todo el cuerpo se verá cuando las células cancerosas se inyecten correctamente en la cir...

Aquí, presentamos un protocolo para la inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para generar un modelo de ratón con lesiones de metástasis óseas.

Inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Este método puede ayudar a producir un modelo ideal que imita de cerca el progreso natural de la metástasis ósea de las células de cáncer de próstata in vivo. Esta técnica tiene la ventaja de una metástasis ósea y representa el proceso natural de metástasis ósea de las células de cáncer de próstata in vivo. Esta técnica beneficia la exploración de los mecanismos moleculares y la investigación de los efectos terapéuticos in vivo para la metástasis ósea del cáncer de próstata.El día de la inyección, tome células PC3 marcadas con luciferasa confluente del 80 al 90% cultivadas en una placa de cultivo celular de 10 centímetros y comience a preparar las células para la inyección lavándolas dos veces con PBS estéril en frío. Tripsinizar las células lavadas con 1,5 mililitros de tripsina al 0,25% durante tres minutos, después de lo cual apagar la tripsina añadiendo seis mililitros de medio F12 que contiene 10% de suero y recoger las células en un tubo de centrífuga de 15 mililitros. Transfiera 20 microlitros de la suspensión celular recolectada a una placa de conteo celular y calcule la concentración celular utilizando un contador automático de células.A continuación, centrifugar las células a temperatura ambiente durante cinco minutos a 800 G.Deseche el sobrenadante con una pipeta y vuelva a suspender el pellet de la celda en medio F12 para lograr la densidad celular final deseada. Ahora lleve las células a la sala de cirugía y realice la inyección de células dentro de dos horas. Mantenga las células en hielo hasta la inyección.Para comenzar la cirugía, coloque al ratón anestesiado en posición supina e inmovilice ambas extremidades superiores estirándolas perpendicularmente lejos de la línea media. Usando cinta adhesiva quirúrgica, inmovilice al ratón desde el abdomen hacia abajo sin presionar con fuerza y desplazando los órganos internos. Desinfecte la piel del tórax con un hisopo de etanol al 70%.A continuación, palpe por el centro de la pared torácica anterior para localizar el proceso xifoide del ratón en la depresión en el extremo más bajo del esternón medio. Etiquete el punto más inferior del proceso xifoide. Luego, palpando hacia arriba desde el centro de la pared torácica anterior, ubique la muesca yugular del ratón en la depresión central en el borde superior del manubrio y marque el punto más inferior de la muesca yugular.Ahora localice y marque el punto medio entre las dos marcas anteriores, ligeramente hacia la derecha y justo sobre el corazón en el tercer espacio intercostal. Este es el punto de inyección. Mezcle bien la suspensión celular antes de cargar 200 microlitros de la suspensión en una jeringa de un mililitro montada con una aguja de calibre 26.Deje un poco de aire en la jeringa entre el émbolo y la suspensión para permitir la entrada de sangre pulsante durante la inyección. Para realizar la inyección, inserte verticalmente la aguja a través del sitio de inyección. Si la punta de la aguja se inserta correctamente en el ventrículo izquierdo, la sangre pulsante de color rojo brillante será visible en el cubo de la aguja.Vuelva a intentar inyectarse si la pulsación sanguínea no es visible o si la sangre se coagula. Una vez que la aguja se inserta correctamente, inyecte 100 microlitros de la suspensión celular muy lentamente durante 40 a 60 segundos con una mano estable. Después de completar la inyección, retraiga la aguja mientras aplica presión en el lugar de la inyección con un hisopo de algodón seco durante 15 segundos para asegurar la hemostasia.Devuelva el ratón a la jaula limpia y controle al animal hasta que se recupere completamente de la anestesia. Las imágenes de bioluminiscencia realizadas 24 horas después de inyectar células PC3 marcadas con luciferasa en el ratón mostraron señales de todo el cuerpo del animal que indican la presencia de células cancerosas en la circulación sistémica. Las lesiones metastásicas aparecieron en las extremidades posteriores del ratón dos semanas después de la inyección.Las lesiones metastásicas se hicieron más grandes a medida que avanzaba el tiempo y comenzaron a aparecer en otros sitios. Las lesiones metastásicas inducidas por células de cáncer de próstata en los huesos se detectaron aún más utilizando imágenes de rayos X que mostraron destrucción ósea en la tibia proximal del animal. Lo mismo también fue confirmado por micro tomografía computarizada.Las lesiones metastásicas se confirmaron aún más en los tejidos embebidos en parafina mediante tinción con hematina y eosina. El sitio de inyección preciso es muy importante para garantizar la tasa de éxito de este modelo. Esto se puede lograr mediante la práctica.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Los modelos animales se utilizan con frecuencia para estudiar la metástasis del cáncer de hueso. En este protocolo vamos a describir dos métodos comunes de la inoculación del tumor para los estudios de metástasis óseas y describir brevemente algunos de los análisis utilizados para supervisar y cuantificar estos modelos.

Los modelos de metástasis en los huesos

El video muestra la técnica de inoculación ortotópica del cáncer de mama en un modelo de ratón. Esta técnica produce una alta tasa de tumorigénesis con menos variabilidad en el tamaño y la forma del tumor en comparación con la inyección subcutánea o no quirúrgica.

Inyección ortotópica: implantación de células cancerosas específicas de tejido en un ratón adulto

En este video, demostramos el procedimiento para administrar la inyección intraprostática de células de cáncer de próstata en un modelo de ratón. Los modelos murinos ortotópicos se pueden utilizar para estudiar el origen de la enfermedad y la respuesta a las terapias de tratamiento en un entorno no invasivo y clínicamente relevante.

Inyección intraprostática de células cancerosas: una técnica para administrar células cancerosas para establecer un modelo ortotópico de cáncer de próstata en ratones

Este modelo ortotópico de cáncer de próstata humano permite la cuantificación del tamaño del tumor, las células tumorales circulantes, y formación de distinta metástasis al pulmón. Como las células deben escapar del órgano principal, entrar en el torrente sanguíneo, y se implanta en un sitio secundario, este modelo recapitula efectivamente el escenario en los seres humanos.

Un modelo murino de cáncer de próstata humano Metástasis ortotópico

La técnica establecida para inocular ortotópico xenoinjertos de cáncer de vejiga invasivos primarios requiere laparotomía y la movilización de la vejiga. Este procedimiento inflige una morbilidad significativa en los ratones, es técnicamente difícil y consume mucho tiempo. Lo tanto, desarrolló una alta precisión, abordaje percutáneo utilizando la guía del ultrasonido.

Mínimamente Invasiva Establecimiento de murino ortotópico xenoinjertos vejiga

El cáncer es una enfermedad compleja que se ve influenciada por el tejido que rodea al tumor, así como pro- local y anti-inflamatorias mediadores. Por lo tanto, los modelos de inyección de ortotrópicos, en lugar de los modelos subcutáneos pueden ser útiles para estudiar la progresión del cáncer de una manera que imita mejor la patología humana.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

Este manuscrito detalla un método utilizado para generar xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer de próstata (PDX) a partir de células tumorales circulantes (CTC). La generación de modelos PDX a partir de CTCs proporciona un modelo experimental alternativo para estudiar el cáncer de próstata; Es el tumor más comúnmente diagnosticado y una causa frecuente de muerte por cáncer en los hombres.

Generación del paciente con cáncer de próstata Derivado modelos de xenoinjertos de células tumorales circulantes

El cáncer de próstata es la segunda causa más común de muertes relacionadas con el cáncer en los Estados Unidos. Un modelo ortotópico de cáncer proporciona un enfoque útil para comprender la biología del cáncer de próstata y evaluar la eficacia de los regímenes terapéuticos. Este protocolo describe los pasos detallados necesarios para establecer un modelo ortotópico de cáncer de próstata en ratones.

Preclínica modelo murino ortotópico de cáncer de próstata humano

El objetivo de este protocolo es demostrar la inyección intra prostática de las células de cáncer de próstata, con la posterior castración. Modelos preclínicos ortotópico de cáncer de próstata andrógeno-dependiente y resistente a la castración son críticos para el estudio de la enfermedad en el contexto de un microambiente tumoral clínicamente relevante y un anfitrión inmunocompetente.

Un modelo murino Syngeneic bioluminiscente y fluorescente ortotópico de cáncer de próstata andrógeno-dependiente y resistente a la castración

Los modelos PDX de metástasis del sistema nervioso central representan las características fenotípicas y moleculares de la metástasis humana, lo que los convierte en excelentes modelos para estudios preclínicos. Aquí se describe cómo establecer modelos PDX y las rutas de inoculación que se utilizan mejor para estudios preclínicos.

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Aprende a crear un modelo de ratón con metástasis ósea mediante inyección intracardíaca de células PC3 de cáncer de próstata humano. Este método permite estudiar la progresión tumoral y evaluar terapias in vivo.

Inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea

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