Name: Cirugía y pruebas conductuales en el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T13:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Aprende el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas para evaluar dolor neuropático mediante filamentos de Von Frey. Este método permite cuantificar independientemente el dolor del neuroma y la hiperalgesia generalizada.

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Nos gustaría agradecer a Sabine Versteeg por ayudar durante la microcirugía y a Anja van der Sar y Trudy Oosterveld-Romijn del Common Animal Laboratory (Gemeenschappelijk Dieren Laboratorium) por su ayuda en la preparación del microscopio y la sala quirúrgica y el cuidado de los animales.
Esta investigación fue financiada por Axogen.

Esta investigación se realizó de acuerdo con el IVD (Instantie voor Dierenwelzijn Utrecht) y las directrices para la investigación con animales, número de proyecto AVD1150020198824.
1. Mediciones de referencia de Von Frey
<ol><li>Antes de la cirugía, realice mediciones basales de acuerdo con el procedimiento de prueba de Von Frey, descrito a continuación en las secciones 5 y 6.</li>
</ol>2. Anestesia y preparación
NOTA: Este estudio se realizó en 15 ratas Sprague Dawley macho que tenían 12 semanas de edad.
<ol><li>Anestesiar a los animales por inducción con isoflurano al 5% y mantener la anestesia con isoflurano al 2%-3%. NOTA: El mantenimiento con isoflurano al 2% generalmente resulta en anestesia suficiente y respiración espontánea, sin necesidad de intubación traqueal o ventilación mecánica.</li>
	<li>Compruebe los reflejos de los animales pellizcando el pie con pinzas. Asegúrese de que el animal no responda antes de continuar. Afeite el campo operatorio desde la rodilla hasta el tobillo con una afeitadora eléctrica y aplique ungüento oftálmico en los ojos para evitar la sequedad. Inyectar 0,5 mg/kg de carprofeno analgésico por vía subcutánea en la región abdominal.</li>
	<li>Coloque la rata anestesiada boca arriba con la cabeza hacia la izquierda o hacia la derecha y la pierna a operar cerca del cirujano. Exorotar la extremidad posterior inferior de modo que el maléolo medial mire hacia arriba. Coloque la rata bajo un microscopio quirúrgico estereoscópico con un aumento de 6x.</li>
	<li>Desinfecte el área afeitada con tres rondas alternas de exfoliante a base de yodo seguido de alcohol. Coloque una lámina estéril con un orificio quirúrgico sobre la pierna, de modo que solo el campo operatorio sea visible. Asegúrese de mantener estas condiciones estériles durante la cirugía.</li>
</ol>3. Cirugía
<ol><li>Coloque un pequeño hisopo de algodón debajo del tobillo para mantener el campo operatorio horizontal. Localice la rodilla y haga suavemente una incisión longitudinal de 1-2 cm con un bisturí sobre el lado medial de la pata trasera desde la mitad de la pantorrilla hasta el tobillo. Si es necesario, abra la piel y el subcutis aún más con micro tijeras hasta que las capas musculares sean visibles.</li>
	<li>Identifique el haz neurovascular superficial como dos o tres blancos y una línea púrpura / roja más gruesa, a veces con ramas menores, que pueden moverse libremente sobre las capas musculares. Usando una electrocauterización (ver Tabla de materiales), coagule cualquier sangrado activo o supuración en el campo operatorio. Tenga cuidado de no dañar el haz neurovascular.</li>
	<li>Diseccionar sin rodeos para abrir la fascia entre los músculos gastrocnemios, justo después del haz neurovascular superficial de 3.2. Entre la fascia de los músculos, se puede encontrar el nervio tibial. El nervio tibial es aproximadamente tres veces el tamaño del nervio superficial en el haz neurovascular. Use el hueso tibial como un punto de referencia adicional (el nervio tibial se encuentra justo después del hueso tibial).</li>
	<li>Identificar el nervio tibial y su bifurcación. NOTA: La bifurcación suele ser visible con una línea más clara longitudinalmente sobre el nervio.</li>
	<li>Diseccionar cuidadosamente el nervio tibial libre de los haces vasculares circundantes. Realice la disección moviendo sin rodeos el nervio tibial y cortando el tejido expuesto que muestra algo de estiramiento mientras mueve el nervio tibial. NOTA: Si el nervio tibial está unido a las venas cruzadas después de la disección, estas venas pueden coagularse para exponer todo el nervio tibial. Tenga cuidado de no coagular el haz tibial en sí.</li>
	<li>Exponga el nervio tibial proximalmente hasta que desaparezca debajo de una capa muscular cruzada. En este punto, el nervio tibial parece sumergirse más profundamente en la pata trasera hacia la rodilla. Exponga el nervio tibial distalmente hasta el tobillo. NOTA: Cuando el nervio tibial está expuesto más distalmente, la cantidad de fibras de colágeno que cruzan (es decir, fibras perpendiculares a la dirección de las fibras nerviosas) aumentará. Estas fibras de colágeno deben cortarse para permitir una longitud suficiente para transponer el nervio tibial.<ol><li>Cuando todo el nervio tibial esté expuesto, coloque las capas musculares hacia atrás para evitar la deshidratación del nervio. Si el nervio se deshidrata (es decir, se vuelve más rígido, opaco y arrugado), y cubrirse con capas musculares no es suficiente, agregue gotas de solución salina para hidratarlo.</li>
	</ol></li>
	<li>Usando una herramienta de microcirugía contundente, preferiblemente un soporte de microagujas, diseccionar la piel pretibial de la capa muscular subcutánea para hacer un túnel subcutáneo. Para hacer esto, sostenga la piel hacia arriba y empuje la punta roma hacia el tejido, paralela a la piel. Asegúrese de que el extremo del túnel esté ubicado pretibialmente o más lateralmente para garantizar un fácil acceso al área para la prueba del neuroma.</li>
	<li>Aumentar el isoflurano al 5%. Regrese al nervio tibial y exponerlo (es decir, regrese al lugar descrito en el paso 3.6). Cortar el nervio tibial (es decir, ambas ramas plantares) en el nivel más distal cerca del tobillo. Disminuir el isoflurano al nivel normal de 2% -3%.</li>
	<li>Cambie el aumento del microscopio a 10x o 16x. Identificar el epineuro del nervio tibial proximal al corte realizado en el paso 3.8, o en caso de una bifurcación más proximal del nervio tibial, identificar el epineuro de las ramas plantares medial y lateral proximal al corte en el paso 3.8. NOTA: El epineuro es más blanco y firme en comparación con las fibras nerviosas en su interior, que son más amarillas y suaves.</li>
	<li>Coloque cuidadosamente un 8-0 sutura de nylon (consulte la Tabla de materiales) a través del epineuro del extremo del nervio proximal sosteniendo cuidadosamente el epineuro con pinzas y colocando la aguja entre el nervio y el epineuro con una mordida de aproximadamente 0,5 mm. Tire de la sutura y muerda con la aguja por vía subcutánea al final del túnel subcutáneo realizado en el paso 3.7. Haga un nudo, que transpondrá el nervio lateralmente en el túnel subcutáneo. NOTA: Si ambas ramas plantares comparten un epineuro común, una sutura debería ser suficiente. Si ambas ramas plantares tienen su propio epineuro, cada epineuro debe fijarse individualmente. Evite colocar la sutura a través de la piel; Solo fíjalo por vía subcutánea.</li>
	<li>Coloque una sutura más gruesa con un color oscuro (preferiblemente una sutura 4-0 azul o negra) al ras del extremo nervioso fijado, sin penetrar en la piel. Asegúrese de que la sutura sea visible desde el exterior de la piel. Verifique si el nervio permanece en su lugar después de mover la pata y los músculos. El corte de la sutura termina con un extremo de sutura ligeramente más largo en el 4-0 que en el 8-0 sutura.</li>
	<li>Cambie el aumento del microscopio a 6x. Cerrar la piel con suturas intraepidérmicas usando el 8-0 suturar y limpiar suavemente la piel con NaCl al 0,9% con un hisopo de algodón.</li>
</ol>4. Tratamiento postquirúrgico
<ol><li>Coloque a la rata en una jaula limpia debajo de una toalla de papel en una posición cómoda. Si la habitación está fría, coloque una almohadilla térmica debajo de una parte de la jaula (solo debajo de una parte de la jaula, ya que el animal debe poder escapar del calor cuando sea necesario). Garantizar un fácil acceso a los alimentos y al agua.</li>
	<li>No deje a la rata postquirúrgica desatendida hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal. La rata puede ser devuelta a la compañía de otros animales cuando se haya recuperado completamente de la anestesia después de la cirugía. Esto es generalmente después de 1 h y cuando la rata exhibe su patrón y comportamiento normal de caminar.</li>
	<li>A las 24 h y 48 h después de la cirugía, administrar una dosis de 0,5 mg/kg de carprofeno por vía subcutánea (región abdominal) para tratar el dolor postquirúrgico.</li>
</ol>5. Prueba de Von Frey del lado plantar de las patas traseras
NOTA: La prueba de Von Frey (pasos 5 y 6) se realiza antes de la cirugía (para la medición inicial) y desde 3 días después de la cirugía.
<ol><li>Coloque a las ratas en jaulas de fondo de alambre de malla 1 semana antes de la medición inicial, o 2 semanas antes de la cirugía, para garantizar la aclimatación al entorno de prueba.</li>
	<li>Comience con las medidas iniciales al menos 1 semana antes de la cirugía. Asegúrese de que se realicen tres mediciones de referencia independientes en días separados.</li>
	<li>Verifique que las ratas estén tranquilas en las jaulas inferiores con alambre de malla. Aplicar una serie de monofilamentos de Von Frey con una escala logarítmica perpendicular a la superficie plantar de la pata trasera.<ol><li>Para estimular el nervio sural (hipersensibilidad), aplique el monofilamento en el lado lateral cerca del borde del cabello. Evite tocar las almohadillas de los pies, ya que son más sensibles.</li>
		<li>Para estimular el nervio tibial (hiposensibilidad), aplique el monofilamento en el centro de la superficie plantar de la pata trasera. Si el monofilamento se aplica en el área más medial, esto también podría estimular el nervio safeno, una rama del nervio femoral (Figura 1). Evite tocar las almohadillas de los pies.</li>
	</ol></li>
	<li>Comience con el monofilamento de 4 g. Aplique suficiente fuerza al monofilamento para que el pelo se doble y mantenga durante 3 s, y luego verifique las respuestas del animal en el monofilamento. Una respuesta positiva es la retirada repentina de la pata, el aleteo repentino, el lamido repentino de las patas o la vocalización. En algunos casos, la rata se mueve y trata de encontrar/atacar el monofilamento.</li>
	<li>Elija el siguiente monofilamento dependiendo de la respuesta al estímulo a través del método arriba-abajo23. Por ejemplo, si la rata responde, estimule a continuación con el monofilamento de 2 g; Si la rata no responde, estimule con el monofilamento de 6 g, y así sucesivamente. En total, aplique 5-10 estímulos dependiendo de la reacción.</li>
</ol>6. Prueba de von Frey del sitio del neuroma
<ol><li>Manipular a los animales diariamente durante un mínimo de 5-7 días antes de las medidas basales o 2 semanas antes de la cirugía. Asegúrese de que los animales se mantienen como se describe en el paso 6.2, de modo que se sientan cómodos con la posición.</li>
	<li>Sostenga a las ratas con la nariz apuntando hacia el pliegue del codo. Si la rata se sostiene en la mano derecha, su pata trasera izquierda debe colgar libremente entre el pulgar derecho y el dedo índice (primer espacio web). Si la rata se sostiene en la mano izquierda, su pata trasera derecha debe colgar libremente entre el pulgar izquierdo y el índice.</li>
	<li>Comience con las medidas iniciales al menos 1 semana antes de la cirugía. Asegúrese de que se realicen tres mediciones de referencia independientes en días separados.</li>
	<li>Verifique que las ratas estén tranquilas y cómodas mientras están en brazos. Al inicio del estudio, coloque el monofilamento de 15 g suavemente sobre la superficie pretibial de la pata trasera expuesta. Después de la cirugía, coloque el monofilamento de 15 g en la sutura visible (por ejemplo, en la ubicación del neuroma). Aplicar suficiente fuerza al monofilamento para que el cabello se doble y aguante durante 1 s.<ol><li>Registre la reacción a cada estímulo. Las opciones de reacción incluyen sin reacción, retirada lenta, retirada rápida y vocalización. Registre la respuesta como 0 puntos para ninguna reacción y un punto para retirada lenta, retirada rápida o vocalización.</li>
	</ol></li>
	<li>Repita cinco grupos de cinco aplicaciones del monofilamento, con 2-3 s entre cada aplicación y 2-3 min o más entre los cinco grupos. En total, cada pata trasera debe tener 25 aplicaciones del monofilamento con respuestas registradas.</li>
</ol>7. Recuperación de la muestra para histología y preparación
NOTA: El examen histológico se realiza 12 semanas después de la cirugía inicial.
<ol><li>Inducir la anestesia y preparar a los animales como se describe en los pasos 2.2, 2.3 y 2.4.</li>
	<li>Haga suavemente una incisión de 2-3 cm con un bisturí sobre la cicatriz que se hizo en la cirugía inicial, pero tenga cuidado de no cortar demasiado profundo ya que el nervio se coloca superficialmente.</li>
	<li>Determine la posición del neuroma, diseccione cuidadosamente el neuroma y el nervio libre del tejido cicatricial circundante y coloque el neuroma cosechado en fijador. Para evaluar la morfología del neuroma, el tejido está preferiblemente incrustado longitudinalmente en parafina o resina epoxi como lo describen Tork et al.18.</li>
	<li>Después de cosechar el tejido, sacrificar a las ratas bajo anestesia terminal (5% de isoflurano) mediante punción cardíaca o decapitación. NOTA: Se aconseja cosechar primero el neuroma antes de matar a las ratas, porque entonces es más fácil distinguir el neuroma de su tejido circundante in vivo.</li>
</ol>

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</ol>

Los autores informan que no tienen ningún conflicto de intereses. Aunque este trabajo de investigación fue financiado en parte por Axogen, la empresa no tuvo influencia en la ejecución del estudio y en los resultados.

Pasos críticos en el protocolo El modelo TNT consiste en cortar el nervio tibial y transponerlo lateral y subcutáneamente a una ubicación pretibial para permitir pruebas de sensibilidad del neuroma, además de la hiperalgesia plantar sobre el nervio sural. En el modelo TNT, es clave que el lugar del neuroma sea visible para los investigadores. Por lo tanto, se prefiere una cepa de rata albina porque las suturas subcutáneas son fácilmente visibles a través de la piel y el color de la sutura debe ser pre...

Cada herida, que varía desde simples laceraciones hasta amputaciones de extremidades completas, se acompaña de diversos grados de lesión de nervios periféricos. Tal lesión nerviosa puede resultar en la formación de un neuroma, un enredo desorganizado de fibras nerviosas que brotan. Los neuromas se vuelven dolorosos en el 8% -30% de los pacientes, afectando gravemente su calidad de vida 1,2,3,4,5. Después de la amputación de la extremidad, el dolor del neuroma se desarrolla en el 50% de los pacientes 6,7,8. Los síntomas descritos incluyen sensibilidad, dolor espontáneo, alodinia, hiperalgesia e hipersensibilidad mecánica o térmica en el área inervada9. Cuando no se trata adecuadamente dentro de 1 año, el dolor del neuroma puede avanzar a un estado de dolor crónico, lo que resulta en una alta carga social y costos médicos asociados 10,11,12,13,14. Debido a la escasa eficacia de las intervenciones farmacológicas actuales, el dolor del neuroma es tratado preferentemente mediante la extirpación quirúrgica del neuroma doloroso, y el nervio tratado por diversas técnicas quirúrgicas, como se describe en la literatura15. Es importante tener en cuenta que el alivio completo del dolor es raro, el dolor a menudo empeora con el tiempo y el 40% de los pacientes no se benefician de la cirugía, lo que indica que se necesitan nuevos tratamientos 1,16.
Un modelo estandarizado de dolor de neuroma en ratas ayuda a comprender los mecanismos que impulsan el dolor del neuroma y puede ayudar a identificar nuevos tratamientos o evaluar los existentes utilizados en la clínica. El modelo de transposición del neuroma tibial (TNT) fue descrito por primera vez por Dorsi et al. en 200817 y ha sido utilizado por diferentes grupos de investigación18,19,20. El objetivo general de este método es poder probar diferentes técnicas de tratamiento para el dolor del neuroma. La ventaja del modelo sobre, por ejemplo, el modelo21 de lesión nerviosa evitada (SNI), es que permite probar la alodinia en el sitio del neuroma. Esto se debe a que el modelo implica transponer la terminación nerviosa proximal del nervio tibial a una posición pretibial subcutánea, donde se puede sondear con monofilamentos de von Frey. Además, la alodinia se desarrolla en la superficie plantar de la pata trasera inervada por el nervio sural intacto, que puede evaluarse independientemente del dolor del neuroma en el mismo animal. Esto es similar a los síntomas del dolor del neuroma en pacientes, donde el dolor neuropático persistente después de la extirpación de un neuroma doloroso a veces es causado por los nervios vecinos22. Además, la alodinia sobre un nervio cortado con un neuroma es una modalidad de dolor diferente a la alodinia sobre el nervio vecino intacto. Por lo tanto, este modelo facilita la evaluación del efecto de las nuevas terapias tanto en la alodinia presente en el sitio del neuroma como en el dolor neuropático más generalizado probado en la superficie plantar de la pata trasera. Como la cirugía realizada para crear el modelo TNT puede ser un desafío, este documento elabora el procedimiento para apoyar a los investigadores que implementan el modelo en sus instalaciones.

<table><tbody><tr><td>Aesthesio</td><td>Linton Instrumentación</td><td>514007 hasta 514015</td><td>0,6 g hasta 15 g monofilamentos</td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>Farmacia Veterinaria Local</td><td>n/a</td><td>La farmacia veterinaria local hace la dilución de caprofeno</td></tr><tr><td>Bastoncillos de algodón</td><td>Nobamed</td><td>974255</td><td></td></tr><tr><td>Electrocautery Fine</td><td>Science Tools</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Etanol 70%</td><td>Interchema BV</td><td></td><td></td>400406</tr><tr><td>Ethilon 4.0</td><td>Johnson & Johnson</td><td>1854G</td><td>IMPORTANTE: el color debe ser azul o negro</td></tr><tr><td>Ethilon 8.0</td><td>Johnson & Johnson</td><td>BV130-5</td><td></td></tr><tr><td>Isoflo, isoflurano Zoetis</td><td>Dechra Productos veterinarios</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td>Jaulas de fondo de malla</td><td>StoeltingCo</td><td>57816 y 57824</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinzas</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Micro soporte de agujas&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Micro tijeras</td><td>Fine Science Tools</td><td>15019-10</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinzas</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Trademed</td><td>H7 1000-FRE</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>Fine Science Tools</td><td>12004-16</td><td></td></tr><tr><td>Pomada oftálmica&nbsp;</td><td>Farmacia veterinaria local</td><td>n/a</td><td>La farmacia veterinaria local fabrica el ungüento oftálmico</td></tr><tr><td>Bisturí</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-12</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio quirúrgico estereoscópico</td><td>Leica</td><td>A60 F</td><td></td></tr><tr><td>Hoja estéril con orificio</td><td>Evercare OneMed</td><td>1555-01</td><td></td></tr><tr><td>Cuchilla quirúrgica nr.15</td><td>Herramientas de Ciencias Finas</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>Herramientas de Ciencias Finas</td><td>11617-12</td><td></td></tr></tbody></table>

cirugía y pruebas conductuales en el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas

Surgery and Behavioral Testing in the Tibial Neuroma Transposition Model in Rats

La transposición del neuroma tibial (TNT) es un modelo de rata en el que la alodinia en el sitio del neuroma (nervio tibial) se puede evaluar independientemente a partir de la alodinia en la superficie plantar de la pata trasera inervada por el nervio sural intacto. Este modelo de TNT es adecuado para probar terapias para el dolor del neuroma, como la superioridad potencial de ciertas terapias quirúrgicas que ya se utilizan en la clínica, o para evaluar nuevos fármacos y su efecto sobre ambas modalidades de dolor en el mismo animal. En este modelo, se produce una lesión distal (neurotmesis) en el nervio tibial, y el extremo del nervio proximal se transpone y fija por vía subcutánea y pretibial para permitir evaluaciones del sitio del neuroma con un monofilamento de Von Frey de 15 g. Para evaluar la alodinia sobre el nervio sural, los monofilamentos de Von Frey se pueden usar a través del método arriba-abajo en la región lateral plantar de la pata trasera. Después de cortar el nervio tibial, la hipersensibilidad mecánica se desarrolla en el sitio del neuroma dentro de 1 semana después de la cirugía y persiste al menos hasta 12 semanas después de la cirugía. La alodinia en la superficie plantar inervada sural se desarrolla dentro de las 3 semanas posteriores a la cirugía en comparación con la extremidad contralateral. A las 12 semanas, se forma un neuroma en el extremo proximal del nervio tibial cortado, indicado por dispersión y remolino de axones. Para la cirugía modelo TNT, se deben seguir múltiples pasos (micro) quirúrgicos críticos, y se recomienda alguna práctica quirúrgica bajo anestesia terminal. En comparación con otros modelos de dolor neuropático, como el modelo de lesión nerviosa preservada, la alodinia sobre el sitio del neuroma se puede probar de forma independiente a partir de la hipersensibilidad del nervio sural en el modelo TNT. Sin embargo, el sitio del neuroma solo se puede probar en ratas, no en ratones. Los consejos e instrucciones proporcionados en este protocolo pueden ayudar a los grupos de investigación que trabajan en el dolor a implementar con éxito el modelo TNT en sus instalaciones.

La evaluación en el sitio del neuroma mostró una mayor sensibilidad a la aplicación del monofilamento de von Frey de 15 g. Al inicio del estudio, las ratas respondieron típicamente al 10% -15% (± 13%) de las 25 aplicaciones de un monofilamento de 15 g. La tasa de respuesta aumentó a 45%-50% (± 24%) 1 semana después de la cirugía TNT. En el lado contralateral, el número de respuestas después de la cirugía fue similar al basalente (Figura 2A). Alrededor del 20% de las ratas no desarrollaron un...

Este protocolo describe el modelo de transposición del neuroma tibial, que implica una lesión del nervio tibial con posterior transposición del extremo del nervio proximal hacia una posición subcutánea pretibial o lateral. Las pruebas conductuales del dolor neuroma y la hiperalgesia plantar se cuantifican utilizando monofilamentos de Von Frey.

Cirugía y pruebas conductuales en el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas

The tibial neuroma transposition (TNT) is a rat model in which allodynia at the neuroma site (tibial nerve) can be independently evaluated from allodynia ...

Este método ayuda a encontrar mejores tratamientos para el dolor del neuroma. La ventaja de esta técnica es que puede medir tanto el dolor neuroma como el dolor generalizado de forma independiente en el mismo modelo de repetición. El modelo TNT se ajusta particularmente a las pruebas del dolor del neuroma, ya que el neuroma en sí puede estimularse mecánicamente con los monofilamentos de Von Frey.Comience colocando a la rata anestesiada sobre su espalda con la cabeza hacia la izquierda o hacia la derecha. Coloque la pierna a operar cerca del cirujano. Exorotar la extremidad posterior inferior para que el maléolo medial mire hacia arriba.Antes de colocar a la rata bajo un microscopio quirúrgico estereoscópico con un aumento de 6x, desinfecte el área afeitada con al menos tres rondas alternas de exfoliante a base de yodo y alcohol. Localice la rodilla y haga suavemente una incisión longitudinal de dos a tres centímetros sobre el lado medial de la pata trasera desde la mitad de la pantorrilla hasta el tobillo con un bisturí. Si es necesario, abra la piel y el subcutis aún más con microtijeras hasta que las capas musculares sean visibles.Identifique el haz neurovascular superficial como dos o tres líneas blancas, púrpuras o rojas que pueden moverse libremente sobre las capas musculares. Mantenga intacto el haz neurovascular. Diseccionar la parte posterior de este paquete.A continuación, disecciona para abrir la fascia entre los músculos gastrocnemio. Entre la fascia de los músculos, se puede encontrar el haz neurovascular más profundo con el nervio tibial, que es aproximadamente tres veces el tamaño del haz neurovascular superficial. Use el hueso tibial como un punto de referencia adicional, ya que el nervio tibial vuela justo después del hueso tibial.Para diseccionar el nervio tibial libre de los haces vasculares circundantes, mueva sin rodeos el nervio tibial y corte el tejido expuesto que muestra algo de estiramiento mientras mueve el nervio tibial. Una vez que todo el nervio tibial está expuesto, coloque las capas musculares hacia atrás para evitar la deshidratación del nervio hasta la disección de la piel pretibial del músculo subcutáneo. Para diseccionar la piel pretibial de la capa muscular subcutánea y hacer un túnel subcutáneo, sostenga la piel hacia arriba y empuje la punta roma hacia el tejido paralelo a la piel con una herramienta de microcirugía roma.Asegúrese de que el extremo del túnel esté ubicado pretibial o lateralmente para facilitar el acceso al área para la prueba del neuroma. Después de cortar el nervio tibial en el extremo distal cerca del tobillo, cambie el aumento del microscopio a 10x o 16x e identifique el epineuro del nervio tibial proximal al corte hecho cerca del tobillo. O, en el caso de una bifurcación más proximal del nervio tibial, identificar el epineuro de las ramas medial y lateral de la sembradora proximal al corte realizado cerca del tobillo.Coloca con cuidado un 8-0 Sutura de nylon a través del epineuro del extremo del nervio proximal sosteniendo el epineuro con pinzas y colocando la aguja entre el nervio y el epineuro con una mordida de aproximadamente 0,5 milímetros. Tome un bocado con la aguja por vía subcutánea al final del túnel subcutáneo y tire de la sutura para transponer el nervio lateralmente en el túnel subcutáneo. Arregle la sutura haciendo un nudo.Coloque una sutura más gruesa de 4-0 con un color oscuro enrojecido hasta el extremo nervioso fijado sin penetrar en la piel. Asegúrese de que la sutura sea visible fuera de la piel. Verifique si el nervio permanece en su lugar después de mover la pata y los músculos.Corte de los extremos de la sutura con un extremo de sutura ligeramente más largo en el 4-0, luego en el 8-0 sutura. Cambie el aumento del microscopio a 6x y cierre la piel con suturas intraepidérmicas usando el 8-0 sutura. Limpie suavemente la piel con cloruro de sodio al 0,9% con un hisopo de algodón.Si la habitación está fría, coloque una almohadilla térmica debajo de una parte de una jaula limpia y coloque a la rata en la jaula debajo de una toalla de papel en una posición cómoda. Garantizar un fácil acceso a los alimentos y al agua. Para estimular la hipersensibilidad del nervio estéril, aplique el monofilamento en el lado lateral cerca del borde del cabello sin tocar las almohadillas de los pies.Para estimular la hiposensibilidad del nervio tibial, aplique el monofilamento en el centro de la superficie de la maceta de la pata trasera. Para la prueba del sitio del neuroma, sostenga a las ratas con la nariz apuntando hacia el pliegue del codo. Si la rata se sostiene en la mano derecha, su pata trasera izquierda debe colgar libremente entre el pulgar derecho y el índice.Después de verificar que la rata está tranquila y cómoda mientras sostiene, al inicio del estudio, coloque el monofilamento de 15 gramos suavemente en la superficie pretibial de la pata trasera expuesta. Después de la cirugía, coloque el monofilamento de 15 gramos en la sutura visible y aplique suficiente fuerza al monofilamento para doblar el cabello y mantenerlo durante un segundo. Von Frey, del sitio del neuroma, mostró que al inicio del estudio, las ratas respondieron al 10% al 15% de las aplicaciones de un monofilamento de 15 gramos.Una semana después de la cirugía de transposición del neuroma tibial, la tasa de respuesta aumentó del 45% al 50%En el lado contralateral, las respuestas después de la cirugía fueron similares a la línea de base. Alrededor del 20% de las ratas no desarrollaron un neuroma doloroso y la tasa de respuesta no aumentó en comparación con la línea de base. Al final del muñón del nervio tibial transeccionado y transpuesto 12 semanas después de la cirugía, todas las ratas desarrollaron un neuroma.La transección del nervio tibial redujo la sensibilidad mecánica en el centro del lado de la maceta de la pata trasera inervada por el nervio tibial. La hiposensibilidad presente una semana después de la cirugía fue significativamente diferente del lado contralateral y basal de tres semanas después de la cirugía y se mantuvo hasta 12 semanas después de la cirugía. En la parte lateral del lado de la maceta de la pata trasera inervada por el nervio sural intacto, las ratas desarrollaron una hipersensibilidad mecánica significativamente diferente del lado contralateral y la línea de base desde una semana después de la cirugía.Persistió durante 12 semanas después de la cirugía. En la pata contralateral, la sensibilidad mecánica no se vio afectada en comparación con la línea de base en las áreas inervadas por el nervio sural o tibial. Recuerde crear una longitud fuera del nervio tibial para el rango de movimiento para la transposición lateral.También recuerde marcar este sitio de neuroma con una sutura oscura.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Fuente: Brakkee, E. M., et al. Cirugía y pruebas conductuales en el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas. J. Vis. Exp. (2023). Este video muestra un procedimiento para generar un modelo de transposición de neuroma tibial (TNT) en ratas. Después de exponer el nervio tibial en la pata trasera de una rata anestesiada, transecte el nervio. A continuación, crea un túnel subcutáneo, pasa el nervio cortado a través del túnel y sutura en su lugar. En ausencia de un objetivo para la...

Generación de un modelo de rata de la transposición del neuroma tibial

El modelo de transección del nervio tibial es un bien tolerado, validado, y reproducible modelo de atrofia del músculo esquelético. El modelo de protocolo quirúrgico se describe y se demuestra en C57Black6 ratones.

Transección del nervio tibial - Un modelo normalizado para la atrofia del músculo esquelético denervación inducida en ratones

El tracto corticoespinal, una de las principales vías sensoriomotoras, puede ser lesionada unilateralmente en el tronco cerebral de roedor con el fin de probar terapias de inducción de neuroplasticidad para el sistema nervioso central. Este procedimiento quirúrgico ("pyramidotomy") y las evaluaciones postoperatorias se describen en este protocolo.

Unilateral Pyramidotomy del Tracto corticoespinal en ratas de Evaluación de Terapias Neuroplasticity inductores

Hemos demostrado que una implantación de microelectrodos en la corteza motora de las ratas causa déficit motor inmediato y duraderos. Los métodos aquí propusieron contorno una cirugía de implantación de microelectrodos y tres roedores tareas conductuales para dilucidar posibles cambios en la función motora fina o gruesa debido al daño causado por la implantación a la corteza motora.

Comportamiento pruebas para evaluar el déficit funcional causado por la implantación de microelectrodos en la corteza de Motor rata roedor

Este protocolo presenta un modelo robusto y reproducible de alotrasplante compuesto vascularizado (VCA) orientado al estudio simultáneo de la inmunología y la recuperación funcional. El tiempo invertido en la técnica meticulosa en un trasplante ortotópico de las extremidades traseras de la parte media derecha con anastomosas vasculares cosidas a mano y coaptación neuronal produce la capacidad de estudiar la recuperación funcional.

Dar el siguiente paso: un modelo de trasplante de extremidades hindópicos ortotópicos de coaptación neuronal para maximizar la recuperación funcional en rata

Proporcionamos un protocolo para la evaluación del comportamiento motor a través de una batería de prueba de comportamiento en ratas después de una lesión por aplastamiento del nervio ciático.

Evaluación Multifactorial Del Comportamiento Motor En Ratas Después De La Lesión Unilateral Por Aplastamiento Del Nervio Ciático

Presentamos un protocolo para el uso de la punción subcutánea de Fu en un modelo de lesión por constricción crónica para inducir dolor del nervio ciático en ratas.

Eficacia de la punción subcutánea de Fu en el dolor del nervio ciático: cambios conductuales y electrofisiológicos en un modelo de rata con lesión por constricción crónica

Este protocolo demuestra cómo realizar una amputación por debajo de la rodilla en ratas y realizar inmediatamente la inervación muscular dirigida (iTMR) para investigar estrategias que traten y previenen el dolor relacionado con la amputación y para comprender mejor los mecanismos del dolor asociados a la amputación.

Modelo de amputación de la extremidad posterior de rata por debajo de la rodilla y reinervación muscular dirigida inmediata

Este protocolo presenta un modelo de rata reproducible que utiliza nervios sensoriales para imitar el dolor del neuroma humano y evaluar los tratamientos quirúrgicos, ofreciendo una herramienta valiosa para la investigación traslacional del neuroma.

Nuevo modelo quirúrgico de roedores para estudiar las opciones de tratamiento del dolor del neuroma mediante la reinervación muscular dirigida a través del nervio safeno

Este procedimiento demuestra el transporte transverso de la corteza tibial en ratas, permitiendo la visualización y el análisis de la revascularización durante la isquemia de la extremidad.

Un modelo de rata de transporte transversal de la corteza tibial para el tratamiento de la isquemia de la extremidad inferior

Aprende el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas para evaluar dolor neuropático mediante filamentos de Von Frey. Este método permite cuantificar independientemente el dolor del neuroma y la hiperalgesia generalizada.

Cirugía y pruebas conductuales en el modelo de transposición del neuroma tibial en ratas

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