Name: Trasplante intraperitoneal para la generación de leucemia mieloide aguda en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Aprende a generar leucemia mieloide aguda en ratones mediante trasplante intraperitoneal de células lin-negativas. Este método ofrece una alternativa más conveniente y económica que la inyección intravenosa convencional.

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Los autores agradecen a la Instalación Central de Citometría de Flujo del Instituto Huck y a la Instalación Central de Histopatología del Laboratorio de Diagnóstico Animal, Departamento de Ciencias Veterinarias y Biomédicas, Universidad Estatal de Pensilvania, por brindar apoyo técnico oportuno. Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Instituto Americano para la Investigación del Cáncer (KSP), Penn State College of Agricultural Sciences, Penn State Cancer Institute, USDA-NIFA project 4771, Número de Acceso 00000005 a K.S.P. y R.F.P.

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</ol>

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

Estos estudios descritos anteriormente proporcionan evidencia de apoyo de que el trasplante de células Lin es comparable a las células LSK en la generación de LMA murina de 1°. Además, los datos actuales también muestran que la inyección i.p. es un método eficiente y conveniente para establecer la LMA murina en comparación con la inyección intravenosa (o r.o.).
Además de las células LSK, se ha informado que otras poblaciones como el progenitor granulocítico-monocitos (GMP), el proge...

La leucemia mieloide aguda (LMA) es un tipo de neoplasia maligna hematológica de etiología diversa con mal pronóstico1. La generación de modelos animales de LMA sienta las bases para la comprensión de sus complejas variaciones y patobiología en un esfuerzo por descubrir nuevas terapias2. La leucemogénesis en ratones implica el trasplante de células donantes que expresan oncoproteínas de fusión, incluidas las fusiones que involucran el gen de la leucemia de linaje mixto (MLL) para inducir potentemente la LMA, para imitar la enfermedad en humanos3. Se han reportado varios orígenes celulares de células de donantes en el trasplante de LMA4 asociada al gen MLL, y se sabe muy poco sobre las células responsables del origen de la enfermedad.
Se han desarrollado múltiples vías para el trasplante en ratones; en lugar de una inyección intrafemoral, que introduce directamente células mutantes del donante en la médula ósea5, una inyección intravenosa que utiliza el plexo sinusal venoso, la vena de la cola y la vena yugular se ha utilizado ampliamente para generar modelos murinos de LMA 6,7,8,9. En el caso de la inyección retroorbitaria (r.o.), varias desventajas inherentes, como la limitación de volumen, la alta demanda técnica, las pocas posibilidades de repetidos intentos o errores, y las posibles lesiones oculares, han sido grandes obstáculos con alternativas limitadas o inviables7. La inyección de venas de la cola puede tener problemas similares además de las lesiones locales; Para facilitar el procedimiento, los ratones a menudo necesitan ser calentados para dilatar sus venas de la cola10. También es difícil localizar la vena de la cola sin una fuente de luz adicional, particularmente en la cepa de ratones C57BL / 6. Para la inyección de vena yugular, el personal de investigación requiere suficiente capacitación para localizar la vena y limitar las posibles complicaciones. Además, tanto las inyecciones de seno venoso como las de venas yugulares deben realizarse bajo anestesia, lo que agrega otro nivel de complejidad. Por lo tanto, es tentador explorar nuevas rutas de trasplante para facilitar el establecimiento de modelos murinos de LMA.
La inyección intraperitoneal (i.p.) se usa comúnmente para administrar medicamentos, colorantes y anestésicos 11,12,13,14,15; También se ha utilizado para introducir células hematopoyéticas para la hematopoyesis ectópica16 y para trasplantar células madre mesenquimales derivadas de médula ósea en varios modelos de ratón17,18,19,20,21. Sin embargo, se ha utilizado con poca frecuencia para establecer neoplasias malignas hematopoyéticas en ratones, particularmente para estudiar la progresión de la enfermedad de LMA.
El presente estudio describe la viabilidad de la inyección i.p. en la generación de modelos de ratón LMA, además de comparar la eficiencia del trasplante de poblaciones de linaje negativo (Lin-) y Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) como células donantes. Estos hallazgos proporcionan una manera simple y eficiente de generar modelos experimentales de AML y leucemias mieloides relacionadas. Tal método tiene el potencial de ampliar nuestra comprensión de los mecanismos de la enfermedad, así como proporcionar un modelo relativamente fácil para probar terapias experimentales.

<table><tbody><tr><td>a-Seleccionar células competentes&nbsp;</td><td>Bioline</td><td>BIO-85027</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de amonio (NH4Cl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Gato# A-9434</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Gato# A0797</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina (BSA), fracción V&mdash; Bioproductos Gemini de grado de baja endotoxina</td><td></td><td>Cat # 700-102P</td><td></td></tr><tr><td>Ciprofloxacina HCl</td><td>GoldBio.com</td><td>Cat # C-861-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, alto contenido de glucosa, sin glutamina</td><td>Gibco</td><td>Cat # 11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Corning</td><td>Cat# 21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, Sal Disódica (EDTA-2Na), Dihidratado, Grado de Biología Molecular</td><td>Calbiochem</td><td>Cat# 324503</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino - Premium Select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>Cat# S11550</td><td></td></tr><tr><td>Holotransferrina, Sigma bovino</td><td>Aldrich</td><td>Cat# T1283</td><td></td></tr><tr><td>Solución de insulina Sigma humano</td><td></td><td>Cat# I-9278</td><td></td></tr><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12440-053</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina 200 mM (100&times;) solución</td><td>HyClone, Gelifesciences</td><td>Cat# SH30034.01</td><td></td></tr><tr><td>LB caldo, Lennox</td><td>NEOGEN</td><td>Cat #: 7290A</td><td></td></tr><tr><td>LB Caldo con agar (Miller)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# L-3147</td><td></td></tr><tr><td>Ratón anti-ratón CD45.1 (FITC)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Cat# 130-124-211</td><td></td></tr><tr><td>Interleucina-3 de ratón (IL-3)</td><td>Bioproductos de Gemini</td><td>Cat# 300-324P</td><td></td></tr><tr><td>Interleucina-6 de ratón (IL-6)</td><td>Bioproductos de Gemini</td><td>Cat# 300-327P</td><td></td></tr><tr><td>Factor de células madre de ratón (SCF)</td><td>Bioproductos de Gemini</td><td>Cat# 300-348P</td><td></td></tr><tr><td>Solución de penicilina-estreptomicina, 100x</td><td>Corning</td><td>Cat# 30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Células Phenix-Eco (pECO)</td><td>ATCC</td><td>CRL-3214</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de potasio (KHCO3), granular</td><td>JT. Panadero</td><td>Cat# 2940-01</td><td></td></tr><tr><td>Rata anti-ratón CD117 (c-kit) (APC)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>Gato # 105812</td><td></td></tr><tr><td>Rata anti-ratón Ly-6A/E (Sca-1) (PE-Cy7)</td><td>BD Pharmingen</td><td>Cat# 558162</td><td></td></tr><tr><td>Ligando recombinante murino Flt3 Pepro</td><td>Tech, INC.</td><td>Cat# 250-31L</td><td></td></tr><tr><td>RetroNectin Fragmento de fibronectina humana recombinante</td><td>TaKaRa</td><td>Cat# T100A</td><td></td></tr><tr><td>TransIT-293 Reactivo</td><td>MirusBio Cat</td><td># MIR 2705</td><td></td></tr><tr><td>TRI Reactivo</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T9424</td><td></td></tr><tr><td>Solución de Azul de Tripano, 0.4%</td><td>Gibco</td><td>Cat # 15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0.25%), rojo</td> <td>fenolGibco</td><td>Cat# 25200-056</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoetanol (BME)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# M3148</td><td></td></tr><tr><td>Ensayos comerciales&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasySep Kit de aislamiento de células progenitoras hematopoyéticas de ratón&nbsp;</td><td>Tecnologías StemCell</td><td>Cat# 19856A</td><td></td></tr><tr><td>Kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad&nbsp;</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>Gato# 4368813</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa qPCR</td><td>SuperMix Quanta Bio</td><td>Gato# 95051-500</td><td></td></tr><tr><td>Plásmido Maxi Kit (25)</td><td>Qiagen</td><td>Gato#:12163</td><td></td></tr><tr><td>Animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ai14TdTomato ratones</td><td>Jackson Laboratory Strain</td><td># 007914</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 C57BL6/J ratones& nbsp;</td><td>Cepa</td><td>de laboratorio Jackson # 002014</td><td></td></tr><tr><td>ratones CD45.2 C57BL6/J &nbsp;</td><td>Cepa de laboratorio Jackson</td><td># 000664</td><td></td></tr><tr><td>Instrumentos y softwares</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe illustrator&nbsp;</td><td>Versión 25.2.3</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Citómetro de flujo BD accuri C6</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 10.8.0</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GeneSys programa de software&nbsp;</td><td>Versión 1.5.7.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism versión 6&nbsp;</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemavet 950FS&nbsp;</td><td>Drew Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7300 Sistema de PCR en tiempo real</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syngene G:BOX Chemi XR5 Chemiluminescence Fluorescence Imaging</td><td>G:Box Chemi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

trasplante intraperitoneal para la generación de leucemia mieloide aguda en ratones

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

Existe una necesidad insatisfecha de nuevas terapias para tratar la leucemia mieloide aguda (LMA) y la recaída asociada que involucra células madre de leucemia persistente (LSC). Un modelo experimental de roedores AML para probar terapias basadas en el trasplante exitoso de estas células a través de inyecciones retroorbitarias en ratones receptores está lleno de desafíos. El objetivo de este estudio fue desarrollar un método fácil, confiable y consistente para generar un modelo murino robusto de LMA utilizando una ruta intraperitoneal. En el presente protocolo, las células de la médula ósea se transdujeron con un retrovirus que expresa la oncoproteína de fusión MLL-AF9 humana. Se probó la eficiencia de las poblaciones de linaje negativo (Lin-) y Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) como LSC de donantes en el desarrollo de LMA primaria, y se adoptó la inyección intraperitoneal como un nuevo método para generar LMA. La comparación entre las inyecciones intraperitoneales y retroorbitarias se realizó en trasplantes seriados para comparar y contrastar los dos métodos. Tanto las células Lin como las LSK transducidas con el virus MLL-AF9 humano se injertaron bien en la médula ósea y el bazo de los receptores, lo que llevó a una LMA en toda regla. La inyección intraperitoneal de células del donante estableció la LMA en los receptores tras el trasplante seriado, y la infiltración de células de LMA se detectó en la sangre, la médula ósea, el bazo y el hígado de los receptores mediante citometría de flujo, qPCR y análisis histológicos. Por lo tanto, la inyección intraperitoneal es un método eficiente de inducción de LMA mediante el trasplante en serie de células leucémicas de donantes.

Comparación de la eficiencia del trasplante de células murinas de LMA mediante las vías de trasplante r.o. e i.p. Anteriormente, se informó el establecimiento de 1° LMA en ratones receptores trasplantados retroorbitalmente con células LSK transducidas por MLL-AF9, y la capacidad de trasplante de células de LMA de 1° se demostró mediante trasplante seriado30. El presente estudio es el primero en evaluar la posibilidad de utilizar células Lin- de médula ósea para reali...

Aquí, la inyección intraperitoneal de células leucémicas se utiliza para establecer y propagar la leucemia mieloide aguda (LMA) en ratones. Este nuevo método es eficaz en el trasplante seriado de células de LMA y puede servir como una alternativa para aquellos que pueden experimentar dificultades e inconsistencias con la inyección intravenosa en ratones.

Trasplante intraperitoneal para la generación de leucemia mieloide aguda en ratones

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...

Este protocolo es significativo porque las células lin-negativas y las células SK aisladas de los mismos ratones donantes no tuvieron diferencias aparentes en la generación de LMA inducida por MLL-AF9. Además, la inyección IP de células leucémicas puede desarrollar con éxito un modelo de ratón de AML. En comparación con los métodos de trasplante convencionales, esta técnica es más conveniente y menos costosa.Para comenzar, esterilice el ratón hembra CD45.1 C57BL / 6J de 8 a 10 semanas de edad con 70% de etanol. Coloque el ratón en una almohadilla quirúrgica estéril en una tabla de espuma de poliestireno y fije las patas a través de las almohadillas de las patas del ratón. Corte la piel por encima de la cavidad abdominal en la línea media y amplíe el espacio subcutáneo hacia las patas traseras con tijeras estériles afiladas.Extienda la incisión desde la línea media abdominal hasta los tobillos y amplíe el espacio subcutáneo debajo de las patas traseras con las hojas de tijeras afiladas. Corte el tendón de Aquiles con tijeras afiladas. Sostenga el tendón con fórceps con dientes y corte el otro extremo unido al fémur para extraer el músculo gastrocnemio.Corte el tendón del cuádriceps unido a la rodilla con tijeras afiladas. Sostenga el tendón y corte la cabeza muscular unida al fémur para extirpar el músculo gastrocnemio. Corte los otros músculos que rodean el fémur en el extremo unido a la tibia.A continuación, corte el tobillo con tijeras afiladas, asegurándose de que la tibia permanezca intacta. Sostenga el extremo distal del fémur y corte la articulación de la cadera con tijeras de punta afilada, asegurando que la cabeza femoral permanezca intacta. Transfiera las tibias y los fémures a un tampón de flujo en un tubo de 15 mililitros.Separe la tibia y el fémur rompiendo la rodilla con la mano. Retire la rótula, el cartílago y los cóndilos femorales para exponer la meseta tibial y el fémur distal. Retire los músculos con una gasa estéril y remoje los huesos en un tampón de flujo.Corte el cuello femoral y enjuague las células de la médula ósea con tampón de flujo desde ambos extremos del fémur con una jeringa de 10 mililitros con una aguja de calibre 23. A continuación, corte el maléolo tibial y enjuague las células de la médula ósea con amortiguador de flujo desde ambos extremos de la tibia. Dispersar las células pipeteando hacia arriba y hacia abajo usando una jeringa de 10 mililitros con una aguja de calibre 18.Centrifugar la suspensión unicelular a cuatro grados centígrados y 400 g durante tres minutos. Deseche el sobrenadante y resuspenda las células en cinco mililitros de glóbulos rojos, o RBC, tampón de lisis para lisar los glóbulos rojos durante tres minutos. Agregue cinco mililitros de tampón de flujo para detener la lisis.Luego centrifugar la suspensión celular y resuspender el pellet en cinco mililitros de tampón de flujo. Coloque un filtro de células de 70 micras en un tubo de 50 mililitros y pase la suspensión a través del filtro para recoger las células. Ajuste la concentración de la celda con tampón de flujo a una vez de 10 a ocho por mililitro en tubos de polipropileno de fondo redondo.Seleccione células de linaje negativo utilizando un kit de aislamiento de células hematopoyéticas de ratón de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Una vez hecho esto, centrifugar las células madre hematopoyéticas clasificadas y las células negativas de linaje no clasificadas y resuspender en tres mililitros de 2X de citoquinas, medios IMDM y tres mililitros de sobrenadante viral en un plato recubierto retrorreductor. Incubar el plato en una incubadora humidificada de dióxido de carbono al 5% a 37 grados centígrados durante 6 o 24 horas.Después de la transducción, cosechar las células por centrifugación. Si es necesario, use tripsina para recolectar las células adheridas al fondo del plato. Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet en PBS precalentado.Inyecte células en el ratón receptor primario retroorbital o intraperitonealmente con una media aguja de calibre 27. Monitoree el mouse diariamente. Después de un mes, recolectar sangre semanalmente por sangrado retroorbitario para controlar la leucocitosis mediante la evaluación del hemograma completo en un HEMAVET.Propólta el ojo con el pulgar y el índice, luego penetre el plexo sinusal venoso con un tubo capilar de hematocrito estéril a través del canto interno. Recoja de 20 a 25 microlitros de sangre en un tubo de recolección de sangre EDTA y cierre los párpados para detener el sangrado. Aplique una gota de solución oftálmica de sulfato de gentamicina en el ojo.Cuando los glóbulos blancos alcancen cuatro veces 10 a cuatro células por microlitro, aísle las células de la médula ósea enjuagando los fémures y las tibias con tampón de flujo, seguido de lisis de glóbulos rojos como se describió anteriormente. Luego, para cosechar los esplenocitos, coloque el ratón en una almohadilla quirúrgica estéril en una tabla de espuma de poliestireno y fije las patas a través de las almohadillas de las patas del ratón. Esterilizar el ratón con etanol al 70%.Corte la piel y el músculo en la línea media para exponer la cavidad abdominal con tijeras estériles de punta afilada. Aísle el bazo y colóquelo en un tampón de flujo en un tubo de 15 mililitros. Engranar el bazo a través de un colador de 70 micras en un plato de seis centímetros con tres mililitros de tampón de flujo.Transfiera las células del plato a un tubo de 15 mililitros, luego centrifugue la suspensión de una sola celda, deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet en cinco mililitros de tampón de lisis RBC durante tres minutos. Agregue cinco mililitros de tampón de flujo para detener la lisis y centrifugar la suspensión celular. Resuspenda el pellet en cinco mililitros de tampón de flujo, mezcle y pase a través de un filtro de células de 70 micras para recoger las células en un tubo de 50 mililitros.Identificar las células primarias de leucemia mieloide aguda, o LMA, tiñendo los esplenocitos y las células de la médula ósea con el anticuerpo anti-ratón CD45.1 conjugado FITC y detectando en un citómetro de flujo. Las células se bloquean primero en FSC-A FSC-H y FSC-A SSC-A para adquirir singletes. La población CD45.1 positiva se cierra en la gráfica FL1 comparándola con células no teñidas.Para el trasplante secundario, resuspender las células esplénicas de LMA CD45.1 de receptores retroorbitarios primarios en PBS e inyectarlas retroorbitalmente en ratones machos CD45.2. La presencia de leucocitosis aberrante y el aumento de la infiltración de células leucémicas en la médula ósea y el bazo apoyan la viabilidad de utilizar células negativas para el linaje de la médula ósea para generar LMA primaria. No se observaron diferencias significativas en los receptores primarios traducidos con LSK o células negativas para linaje.Las células de LMA se diseminan en la cavidad abdominal de los receptores primarios mediante leucemia de linaje mixto o células de linaje negativo transducidas MLL-AF9. Estos resultados también confirmaron el establecimiento de LMA primaria mediante inyección intraperitoneal de células negativas de linaje de médula ósea transducidas MLL-AF9 en forma de leucocitosis y la presencia de células de LMA en la médula ósea y el bazo de ratones receptores. Sin embargo, el trasplante primario mediante inyección intraperitoneal tardó más en desarrollar LMA que mediante inyección retroorbitaria a pesar del mismo número de células del donante.Los receptores secundarios mostraron leucocitosis y hepatoesplenomegalia significativa en menos de un mes después del trasplante. Las células de AML también se detectaron en la sangre periférica, la médula ósea y el bazo, así como en la cavidad peritoneal. La inyección intraperitoneal de ocho veces 10 a las cinco células de LMA logró un injerto comparable a la inyección retroorbitaria de ocho veces 10 a las cinco LMA.Los ratones receptores terciarios exhibieron agudamente signos de LMA que incluyen leucocitosis y hepatoesplenomegalia, la presencia de células leucémicas en la sangre, la médula ósea y el bazo, la observación histológica del fémur y el bazo demostraron aún más la infiltración de células leucémicas. En comparación con los trasplantes secundarios y terciarios, el trasplante terciario progresó mucho más rápido que el trasplante secundario. Para el modelo actual, no es necesario ordenar las celdas LSK.Las células lin-negativas se pueden transducir con el virus de la AML durante 6 horas o 24 horas. No afectará la eficiencia del establecimiento del modelo.

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En este video, realizamos una inyección intraperitoneal de suspensión de células de cáncer de ovario en un modelo de ratón para estudiar la colonización de células de cáncer de ovario en tejidos adiposos peritoneales y su posterior metástasis.

Inyección intraperitoneal de células: un método de administración de células cancerosas en el tejido adiposo peritoneal de un modelo murino

Este video muestra la inducción de la enfermedad de injerto contra huésped intestinal, EICH, en un ratón receptor irradiado letalmente utilizando células madre hematopoyéticas alogénicas y linfocitos T aloreactivos esplénicos inductores de EICH. Este protocolo ayuda a establecer un modelo de EICH intestinal aguda grave para comprender el mecanismo de la enfermedad y desarrollar opciones terapéuticas innovadoras.

Inducción de la enfermedad de injerto contra huésped en modelos de ratón mediante trasplante alogénico de médula ósea y células esplénicas

Describimos un protocolo mediante el cual el condicionamiento de busulfano permite que la médula ósea de un ratón receptor sea reemplazada por células de médula ósea de ratones donantes que expresan de forma ubicua proteína fluorescente verde, en ausencia de irradiación. Esta técnica es útil para estudiar la acumulación de células de la médula ósea en el sistema nervioso central.

El busulfán como agente mielosupresor para Generación estable de alto nivel de Médula Ósea quimerismo en ratones

Microscopía de fluorescencia intravital (IVFM) de la bóveda craneal se aplica en combinación con la genéticos modelos animales para estudiar el autoguiado hacia el blanco y el engraftment de células hematopoyéticas en la médula (BM) nichos.

Combina la microscopia Intravital fluorescente (IVFM) con modelos genéticos para estudiar dinámica del Engraftment de células hematopoyéticas a nichos de la médula ósea

Este manuscrito proporciona una descripción de la metodología utilizada para establecer modelos de ratón de transducción-trasplante. Se da cuenta detallada de los errores técnicos que se deben evitar al realizar trasplantes de médula ósea. Se debe obtener una comprensión clara de la importancia del título viral alto, la transfección/transducción y la irradiación.

Transducción-Trasplante modelo de ratón de Neoplasias mieloproliferativas

Aquí, describimos un protocolo en el que se utiliza un modelo de xenoinjerto derivado de pacientes con leucemia linfoblástica aguda como estrategia para evaluar y monitorear las toxicidades asociadas a las células T del receptor de antígeno quimérico dirigido a CD19.

Evaluación de los efectos tóxicos asociados a las células T del receptor de antígeno quimérico mediante un modelo de ratón de xenoinjerto derivado de pacientes con leucemia linfoblástica aguda

Este protocolo describe la inyección intrafemoral de unas pocas células madre hematopoyéticas o leucémicas, incluidas las células editadas genéticamente, en modelos de xenoinjertos murinos, lo que no solo permitirá el trasplante rápido y seguro de células, sino también análisis seriados de la médula ósea.

Las inyecciones intrafemorales simplificadas con ratones vivos permiten un análisis continuo de la médula ósea

Las inyecciones intrafemorales permiten el injerto de un pequeño número de células madre y progenitoras hematopoyéticas (HSPC), colocando las células directamente en la cavidad de la médula ósea. En este trabajo describimos un protocolo experimental de inyección intrafemoral de HSPCs humanas en ratones inmunodeficientes.

Inyección intrafemoral de células madre y progenitoras hematopoyéticas humanas en ratones inmunocomprometidos 

Aquí, se describe un método basado en citometría de fosfoflujo para analizar la señalización aguas abajo de las vías mTORC1, JAK/STAT5 y MAPK en células de leucemia mieloide humana aguda xenoinjertadas en ratones y obtenidas de aspirados de médula ósea. Los niveles de p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 y p-ERK1/2 se miden simultáneamente utilizando un citómetro de flujo espectral de última generación con alta sensibilidad.

Citometría de fosfoflujo intracelular de xenotrasplantes derivados de pacientes con leucemia mieloide aguda

El protocolo tiene como objetivo describir un modelo de ratón para generar recaídas de leucemia linfoblástica aguda, basado en la dinámica de la respuesta a la quimioterapia de inducción.

Modelo murino de leucemia Recaída a quimioterapia de inducción para la leucemia linfoblástica aguda

Este protocolo demuestra la inyección temporal en venas para la administración intravenosa de células cancerosas pediátricas a ratones neonatales, permitiendo un modelado preciso y reproducible de las respuestas inmunitarias en la vida temprana contra el cáncer. El método permite evaluar el impacto de intervenciones, como la inmunomodulación o la terapia, cuando se aplican durante el periodo neonatal.

Un modelo de trasplante intravenoso neonatal para la evaluación de las actividades inmunitarias en la vida temprana contra células cancerosas

Aprende a generar leucemia mieloide aguda en ratones mediante trasplante intraperitoneal de células lin-negativas. Este método ofrece una alternativa más conveniente y económica que la inyección intravenosa convencional.

Trasplante intraperitoneal para la generación de leucemia mieloide aguda en ratones

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