Name: Ablación del tallo ocular para aumentar la maduración ovárica en cangrejos de fango (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Aprende la ablación del tallo ocular mediante cauterización y cirugía para inducir la maduración ovárica en cangrejos de fango hembra. Este método mejora la reproducción en acuicultura sin afectar la supervivencia.

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Este estudio fue apoyado por el Ministerio de Educación, Malasia, bajo el programa del Centro de Excelencia de la Institución Superior (HICoE), Malasia, acreditado ante el Instituto de Acuicultura y Pesca Tropical, Universiti Malaysia Terengganu (Vot No. 63933 & Vot No. 56048). Reconocemos el apoyo de Universiti Malaysia Terengganu y Sayap Jaya Sdn. Bhd. a través de la Beca de Investigación de Asociación Privada (Vot. No. 55377). También se reconoce un puesto de becario académico adjunto de la Universidad Sains de Malasia a Khor Waiho y Hanafiah Fazhan.

Este protocolo sigue el Código de Prácticas de Malasia para el Cuidado y Uso de Animales con Fines Científicos descrito por la Asociación de Ciencia de Animales de Laboratorio de Malasia. El sacrificio de las muestras experimentales se realizó de acuerdo con la Guía de los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (NIH Publications No. 8023, revisada en 1978). Los cangrejos de fango hembra sexualmente prematuros (cangrejo de fango naranja S. olivacea) fueron recolectados del mercado local (5°66′62′′N, 102°72′33′′E) en los humedales de Setiu en Malasia. La especie de cangrejo de fango fue identificada con base en características morfológicas1.
1. Recogida y desinfección de muestras
<ol><li>Recolecte cangrejos de fango hembras sanas, activas y prematuras (Figura 1). NOTA: Los cangrejos hembras prematuros tienen colgajos abdominales triangulares y de color claro junto con un rango CW de 80-85 mm.</li>
	<li>Lave los cangrejos con agua del grifo clorada (agua dulce) para eliminar los desechos y los parásitos osmófilos.</li>
	<li>Remoje los cangrejos en 150 ppm de formaldehído con 20 ppt de salinidad durante 30 min.</li>
	<li>Mantener una aireación continua y suave con piedras de aire durante el tratamiento con formaldehído. La fuente de aireación puede ser de una línea de aireación central o de una bomba de aireación de acuario.</li>
	<li>Lave los cangrejos con agua de mar que fluye para eliminar cualquier formaldehído residual.</li>
</ol><img alt="Comparación de la morfología de cangrejos hembra prematuros vs maduros; referencia de escala de tamaño incluida; biología marina." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65039/65039fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figura 1: Morfología abdominal de las hembras de cangrejos de fango utilizadas para identificar las etapas de maduración sexual. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65039/65039fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
2. Aclimatación
<ol><li>Transfiera cada hembra desinfectada a un tanque circular separado de 32 L.</li>
	<li>Criar a las hembras durante 3 días en 20 ppt de salinidad y continuar alimentándose dos veces al día (mañana 09:00 am y noche 20:00 pm) con peces marinos picados a aproximadamente 4% −5% del peso corporal del cangrejo.</li>
	<li>Elimine el exceso de alimento y el alimento no consumido mediante un sifón antes de la alimentación de la mañana.</li>
	<li>Intercambie el 10% del agua de mar de cría de cangrejos (20 ppt) diariamente.</li>
</ol>3. Muda inducida para la madurez sexual
<ol><li>Corte todas las piernas excepto las piernas de natación con tijeras esterilizadas.<ol><li>Atrape el cangrejo con una red de cuchara y sostenga el cangrejo con cuidado. Corte primero ambos quelípedos y luego las piernas para caminar en la segunda articulación con tijeras. El cangrejo autotomizará automáticamente los apéndices dañados. No se requiere anestesia para la autotomía de las extremidades.</li>
	</ol></li>
	<li>Lave el cangrejo en agua dulce inmediatamente después de la autotomía de la extremidad.</li>
	<li>Transfiera individualmente los cangrejos autotomizados a cestas de plástico perforadas (28 cm L x 22 cm W x 7 cm H) y colóquelos en un tanque de fibra de vidrio (305 cm L x 120 cm W x 60 cm H). NOTA: Se pueden atar y recortar dos canastas juntas. La cesta superior se utiliza como cubierta para que el cangrejo no pueda escapar de la canasta.</li>
	<li>Utilice un sistema de acuicultura de recirculación (RAS) con 20 ppt de salinidad y una profundidad de agua de al menos 10 cm para garantizar que toda la canasta de plástico esté sumergida.</li>
	<li>Continúe alimentando al cangrejo hembra autotomizado con peces marinos picados dos veces al día al 5% −7% del peso corporal del cangrejo.</li>
	<li>Criar los cangrejos hasta que maduren sexualmente a través de la muda (35 días). NOTA: La muda inducida se puede omitir para la maduración ovárica comercial y la producción de semillas con cangrejos de fango hembras maduras silvestres. Las hembras maduras cosechadas de la naturaleza deben aclimatarse y someterse directamente a anestesia de choque frío y posterior ablación del tallo ocular.</li>
</ol>4. Anestesia
<ol><li>Seleccione hembras sexualmente maduras con un colgajo abdominal ovalado de color oscuro con una CW &gt;86 mm (Figura 1).</li>
	<li>Atrape los cangrejos con una red de cuchara y manténgalos individualmente en pequeños acuarios para anestesia.</li>
	<li>Después de 5 minutos de período de aclimatación, agregue 2-fenoxietanol (2-PE) a 2 ml / L en cada acuario y permita 15 minutos de tratamiento anestésico.</li>
	<li>Asegúrese de que los cangrejos estén completamente anestesiados por la falta de movimiento espontáneo.</li>
</ol>5. Ablación del tallo ocular
<ol><li>Técnica de cauterización<ol><li>Realice todos los procedimientos encima de una mesa y en un área abierta.</li>
		<li>Tome una varilla de metal de níquel-acero de cabeza plana (por ejemplo, un destornillador) con un mango de madera o plástico, y cubra el mango con una toalla de algodón húmeda.</li>
		<li>Esterilice dos pinzas quirúrgicas inoxidables en un autoclave.</li>
		<li>Prepare etanol al 70% en una botella rociadora y manténgalo alejado de cualquier fuente relacionada con el fuego, como el soplete y el destornillador al rojo vivo. Tenga papel de seda listo para usar. NOTA: El etanol es altamente inflamable. Mantenga una distancia segura de las fuentes de incendio.</li>
		<li>Conecte un soplete a un cilindro de gas (butano) de forma segura. PRECAUCIÓN: Siga las instrucciones del soplete y del cilindro de gas. Asegúrese de que el soplete esté apagado cuando se conecte con el cilindro de gas. Lea y siga todas las precauciones de seguridad contra incendios mencionadas en el cilindro de gas.</li>
		<li>Use guantes gruesos de algodón para evitar lesiones por objetos calientes.</li>
		<li>Sujete la punta de la varilla de metal al fuego del soplete hasta que la varilla de metal esté de color rojo brillante.</li>
		<li>Cubra el cangrejo anestesiado con una toalla de algodón húmeda. NOTA: Cubra las antenas del cangrejo para evitar daños innecesarios.</li>
		<li>Sostenga un ojo del cangrejo con fórceps esterilizados. NOTA: Esterilice los fórceps en un autoclave para su primer uso y desinfecte con etanol al 70% para su uso posterior en otros cangrejos.</li>
		<li>Sostenga la punta plana de metal al rojo vivo sobre el ojo del cangrejo y presione ligeramente durante aproximadamente 10-15 s hasta que el tallo ocular se vuelva de color naranja o naranja rojizo. Tenga cuidado al realizar este paso para evitar daños a las estructuras adyacentes. NOTA: Se necesitan dos personas para ejecutar la ablación de tallo ocular siguiendo el método de cauterización: una para sostener el cangrejo y otra para realizar el procedimiento de ablación.</li>
		<li>Desinfecte las pinzas con aerosol de etanol al 70% para garantizar que no haya contaminación cruzada entre cangrejos. NOTA: Solo realice este paso al menos esperando 5 minutos después del procedimiento de ablación del tallo ocular para asegurarse de que los fórceps se enfríen antes de la desinfección con etanol al 70% para evitar posibles riesgos de incendio.</li>
		<li>Después de realizar la ablación del tallo ocular en todos los cangrejos, sumerja la varilla metálica de acero al níquel caliente (destornillador) en agua del grifo.</li>
		<li>Desinfecte la toalla antes de volver a utilizarla. Se pueden usar varias toallas para ahorrar tiempo. NOTA: Lave la toalla con agua del grifo y sumérjala en 30 ppm de agua clorada durante 5 minutos. Luego, lave la toalla con agua del grifo nuevamente y sumérjala en una solución de tiosulfato de sodio de 1 g / L.</li>
		<li>Mantenga el soplete en un lugar seguro después de apagarlo y espere hasta que vuelva a la temperatura ambiental (aproximadamente 30 minutos) antes de desconectarlo.</li>
	</ol></li>
	<li>Técnica quirúrgica<ol><li>Realice el procedimiento en un área bien ventilada.</li>
		<li>Esterilice dos tijeras quirúrgicas y fórceps en un autoclave.</li>
		<li>Vierta 50 ml de etanol al 70% en un vaso de precipitados de vidrio de 100 ml.</li>
		<li>Use guantes gruesos de algodón.</li>
		<li>Sostenga el cangrejo anestesiado y cúbralo con una toalla de algodón húmeda.</li>
		<li>Sostenga un ojo del cangrejo con fórceps esterilizados.</li>
		<li>Corte rápidamente el tallo ocular con tijeras quirúrgicas esterilizadas. NOTA: La hemolinfa puede perderse de la parte herida del cangrejo.</li>
		<li>Sumerja las tijeras y las pinzas en etanol al 70% después de cada uso, y séquelas con papel de seda antes de volver a utilizarlas.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Cuidados postanestésicos
<ol><li>Prepare 20 ppt de agua de mar filtrada y manténgala en un tanque superior con aireación continua.</li>
	<li>Conecte una tubería flexible con el tanque superior para el flujo de agua gravitacional.</li>
	<li>Inmediatamente después de la ablación del tallo ocular, coloque el cangrejo en la canasta y someta el cangrejo al agua de mar que fluye (temperatura del agua ambiente: 28 ° C) desde el tanque superior.</li>
	<li>Mantenga el agua de mar fluyendo y controle el cangrejo hasta que pueda moverse espontáneamente, lo que indica la recuperación de la anestesia. NOTA: El agua de mar se puede preparar en un tanque de tierra, y se puede usar una bomba de agua sumergible para el flujo de agua.</li>
	<li>Mantenga los cangrejos individualmente en 20 ppt de agua de mar con aireación en un acuario durante 30 minutos para una mayor observación. NOTA: Los cangrejos recuperados se cultivarán individualmente en el proceso posterior de cultivo de reproductores.</li>
</ol>7. Observación de la maduración ovárica
<ol><li>Cría de reproductores<ol><li>Transfiera los cangrejos maduros a tanques circulares individuales de 32 L.</li>
		<li>Continúe alimentando con pescado marino picado (congelado a -20 ° C) dos veces al día (mañana 09:00 am y noche 20:00 pm), y retire el alimento no consumido antes de la alimentación de la mañana.</li>
		<li>Criar los reproductores individualmente durante 30 días en 20 ppt de salinidad.</li>
		<li>Retire las heces e intercambie el 10% del agua de mar (20 ppt) diariamente.</li>
	</ol></li>
	<li>Disección<ol><li>Limpie una bandeja de disección, tijeras y pinzas con etanol al 70%.</li>
		<li>Anestesiar a las hembras individualmente con el método de anestesia de inmersión 2-PE.</li>
		<li>Seleccione al azar hembras recién maduras (después de la muda de hembras prematuras) que no hayan pasado por la ablación del tallo ocular para confirmar sus etapas gonadales.</li>
		<li>Sacrifique todas las hembras experimentales ablacionadas por el tallo ocular individualmente e identifique las etapas de maduración de las gónadas. Destruya los ganglios torácicos del cangrejo con un punzón estéril afilado. Retire primero el caparazón superior y luego el hepatopáncreas para hacer visible el ovario. Observe el color del ovario e identifique la etapa de maduración ovárica (Figura 2).</li>
	</ol></li>
	<li>Identificación de etapas de maduración ovárica<ol><li>Observe el color del ovario a simple vista o bajo un microscopio estereoscópico.</li>
		<li>Identificar las etapas de maduración ovárica basadas en la coloración30: la inmadura (etapa-1) muestra un color blanco translúcido o cremoso; La maduración temprana (etapa-2) muestra un color pálido a amarillento claro; (iii) la premaduración (etapa-3) muestra un color amarillo a naranja claro; y (iv) el completamente maduro (etapa-4) muestra un color naranja oscuro a rojizo.</li>
	</ol></li>
</ol>

Ninguno de los autores tiene ningún conflicto de intereses.

Este protocolo fue desarrollado para la ablación del tallo ocular del cangrejo de fango, Scylla spp., y se puede aplicar como un método eficiente para inducir la maduración de las gónadas. Este protocolo se puede replicar fácilmente para la maduración comercial de los ovarios de los cangrejos de fango y se puede implementar para reducir el período latente (tiempo de un desove a otro) en la producción de semillas de cangrejo de fango.
La ablación del tallo ocular de los crustáceos (es ...

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Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Las cuatro especies de cangrejo de fango pertenecientes al género Scylla son especies de crustáceos comercialmente importantes en la acuicultura 1,2. El crecimiento de crustáceos, incluidos los cangrejos de fango, y su transformación de la fase prematura (subadulta o pubertal) a la fase sexualmente madura (adulto) ocurre a través de un proceso de muda que implica el desprendimiento periódico de exoesqueletos más viejos y más pequeños. El ancho del caparazón (CW), los quelípedos y las morfologías del colgajo abdominal se usan ampliamente para determinar la madurez sexual de Scylla spp. 3,4,5. El proceso de muda está regulado por la acción de varias hormonas y requiere una gran cantidad de energía6. Además del proceso normal de muda, la pérdida de extremidades, ya sea voluntaria o inducida por factores externos, acelera la muda de los cangrejos sin afectar su tasa de supervivencia 7,8,9. Por lo tanto, la autotomía de extremidades se utiliza comúnmente para la inducción de muda en la industria de cultivo de cangrejo de fango de caparazónblando 7,9.
La ablación unilateral o bilateral del tallo ocular es más popular en camarones de agua dulce y camarones marinos para la maduración de las gónadas y la producción de semillas10,11,12,13. Las técnicas comunes de ablación del tallo ocular en crustáceos incluyen las siguientes: (i) ligadura en la base del tallo ocular usando una cuerda14,15; (ii) cauterización del tallo ocular utilizando fórceps calientes o dispositivos de electrocauterio16; (iii) extracción o pellizco directo del tallo ocular para dejar una herida abierta12; y (iv) extracción del contenido del tallo ocular a través de la incisión después de cortar la porción distal del ojo con una navaja de afeitar17. Los órganos X del tallo ocular son órganos endocrinos importantes en los crustáceos, ya que regulan las hormonas hiperglucémicas (CHH) de los crustáceos, las hormonas inhibidoras de la muda (MIH) y las hormonas inhibidoras de la vitelogénesis (VIH)6,18,19,20,21,22. Los órganos X de Eyestalk (o el complejo de glándulas sinusales) sintetizan y liberan hormonas inhibidoras de las gónadas (GIH), también conocidas como hormonas inhibidoras de la vitelogénesis (VIH), pertenecientes a la familia de hormonas neuropeptídicas6. La ablación unilateral o bilateral del tallo ocular reduce la síntesis de GIH, resultando en el predominio de hormonas estimulantes (es decir, hormonas estimulantes de gónadas, GSH) y la aceleración del proceso de maduración ovárica en crustáceos23,24,25,26. Sin la influencia de la GIH después de la ablación ocular, las hembras de crustáceo dedican su energía al desarrollo de los ovarios27. Se ha encontrado que la ablación unilateral del tallo ocular es suficiente para la inducción de la maduración ovárica en crustáceos11 y que el tallo ocular ablacionado de camarones y cangrejos puede regenerarse después de varias mudas28. Hay cuatro etapas de desarrollo ovárico registradas en Scylla spp.: i) inmadura (etapa-1), ii) maduración temprana (etapa-2), iii) premaduración (etapa-3) y iv) completamente madura (etapa-4)29,30. La etapa ovárica inmadura se encuentra en mujeres inmaduras. Después de la muda puberal y el apareamiento, el ovario inmaduro comienza a desarrollarse y finalmente madura (etapa 4) antes de desovar31.
Un protocolo de ablación del tallo ocular es esencial para el desarrollo de reproductores de cangrejo de fango y la producción de semillas. En el mercado mundial de alimentos, los consumidores prefieren los cangrejos de fango maduros con ovarios completamente maduros (etapa 4) en lugar de cangrejos con mayor contenido muscular y, por lo tanto, tienen un valor comercial más alto, incluso más alto que los machos grandes. No existe un protocolo completo para la ablación ocular de los cangrejos de fango. El protocolo de ablación del tallo ocular en este trabajo minimiza el estrés mediante el uso de cangrejos completamente anestesiados y minimiza las lesiones físicas al personal por mordeduras de cangrejo. Este protocolo es fácil y rentable. Aquí, presentamos un protocolo para la ablación ocular de Scylla spp. que puede inducir la maduración de la gónada. Se probaron dos técnicas de ablación del tallo ocular (cauterización y cirugía) y se compararon sus eficiencias en función de la tasa de desarrollo gonadal de las hembras de cangrejo de fango.

<table><tbody><tr><td>Tubo de aireación&nbsp;</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>acuario y tienda de mascotas</td></tr><tr><td>Airstone</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>acuario y tienda de mascotas</td></tr><tr><td>Máquina de autoclave</td><td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td><td>N/A</td><td>HECHO EN JAPÓN</td></tr><tr><td>Polvo blanqueador (Hi-Chlon 70%)</td><td>Nippon Soda Co., Ltd,Japón</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Soplete&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Tanque circular (32L)</td><td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Guantes de mano de algodón (gruesos)&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Toalla de algodón</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Termómetro digital</td><td>Hanna Instrument</td><td>HI9814</td><td>Hanna&nbsp; Instrumentos&nbsp; GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Medidor portátil HI9814</td></tr><tr><td>Calibrador digital Vernier</td><td>INSIZE Co., Ltd.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Bandeja de disección</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Centro de Investigación de la Universidad de Malasia Terengganu</td></tr><tr><td>Frasco cuentagotas/Pipetas de plástico</td><td>Dropper Shopee</td><td>Malasia N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Etanol 70%</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>033361.M1</td><td>Diluido al 70% con agua doble destilada</td></tr><tr><td>Tanque de fibra de vidrio (1 tonelada)</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Centro de Investigación de la Universidad de Malasia Terengganu</td></tr><tr><td>Arena fina</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>recogida de la playa del mar de la Universidad de Malasia Terengganu</td></tr><tr><td>Botiquines de primeros auxilios</td><td>Watsons Malasia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Varilla de metal de acero al níquel de cabeza plana (Destornillador)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/</td><td>A N/A</td></tr><tr><td>Formaldehído</td><td>Thermo Scientific Chemicals 119690010</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bombona de gas (gas butano) para soplado&nbsp; antorcha</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Pistola de gas (cabeza larga)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Vaso de precipitados de vidrio (100 mL))</td><td>Corning Life Sciences</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>Bolsa de hielo&nbsp;</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Cestas de plástico perforadas&nbsp;</td><td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Tubo de PVC de 15 mm</td><td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td> <td>N/A</td> N<td>/</td></tr><tr><td>A Refractómetro</td><td>ATAGO CO., LTD.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Refrigerador</td><td>Sharp Corporation Japan</td><td>N/A</td><td>arcón congelador SHARP 110L - SJC 118</td></tr><tr><td>Scoop net</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td></td><td>N/A</td></tr><tr>Criadero<td>de agua de mar</td><td>AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Centro de Investigación de la Universidad de Malasia Terengganu Tubo de</td></tr><tr><td>sifón</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Botella de spray</td><td>Mr. DIY Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Pinzas quirúrgicas de acero inoxidable&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas de acero inoxidable&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Bomba de agua sumergible&nbsp;</td><td>Modelo AS</td><td>N/A</td><td>: Astro 4000</td></tr><tr><td>Tintura de solución de yodo&nbsp; (Povidona Yodada)</td><td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Papel de seda&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Acuario de plástico transparente</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>acuario y tienda de mascotas</td></tr><tr><td>Mesa impermeable</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Centro de Investigación de la Universiti Malaysia Terengganu</td></tr></tbody></table>

ablación del tallo ocular para aumentar la maduración ovárica en cangrejos de fango

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Los cangrejos de fango (Scylla spp.) son especies de crustáceos comercialmente importantes que se pueden encontrar en toda la región del Indo-Pacífico occidental. Durante el cultivo, la inducción de la maduración ovárica es importante para satisfacer la demanda de los consumidores de cangrejos de fango maduros y acelerar la producción de semillas. La ablación del tallo ocular es una herramienta eficaz para mejorar la maduración ovárica en cangrejos de fango. Sin embargo, no existe un protocolo estándar para la ablación ocular de los cangrejos de fango. En este estudio, se describen dos técnicas de ablación del tallo ocular: cauterización (el uso de metal caliente para extirpar el tallo ocular de un cangrejo anestesiado) y cirugía (la eliminación del tallo ocular con tijeras quirúrgicas). Antes de la ablación del tallo ocular, las hembras sexualmente maduras (CW > 86 mm) fueron anestesiadas usando una bolsa de hielo (-20 ° C) con agua de mar. Cuando la temperatura del agua alcanzó los 4 °C, la bolsa de hielo se retiró del agua. El agua de mar que fluye (temperatura ambiente: 28 ° C) se utilizó para la recuperación de la anestesia inmediatamente después de la ablación del tallo ocular. La mortalidad no ocurrió durante o después del proceso de ablación del tallo ocular. El protocolo de ablación del tallo ocular presentado aquí aceleró la maduración ovárica de los cangrejos de fango.

Maduración de las gónadas Se encontraron tejidos ováricos blancos cremosos (ovarios inmaduros, estadio-1) en el 100% de las hembras disecadas (n = 6) antes de realizar la ablación del tallo ocular (Figura 2). La tasa de maduración de las gónadas de los cangrejos hembras ablacionados (n = 63; 31 hembras con la técnica de cauterización y 32 hembras con la técnica quirúrgica) fue mayor en comparación con las hembras de cangrejo que no fueron sometidas a ablación ocular (n = ...

Se realizaron dos protocolos de ablación del tallo ocular (es decir, enfoques de cauterización y cirugía) en cangrejos hembra anestesiados. La ablación ocular de los cangrejos de barro aceleró la maduración de los ovarios sin disminuir la tasa de supervivencia.

Ablación del tallo ocular para aumentar la maduración ovárica en cangrejos de fango

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

El protocolo descrito minimiza el estrés durante la ablación ocular de los cangrejos de fango, reduciendo así la aparición de mortalidad debido a la ablación del tallo ocular. La eficiencia del tiempo es la clave para minimizar el estrés de los animales. Asegúrese de que todo esté preparado antes de realizar el procedimiento.Comience lavando los cangrejos de fango hembras saludables, activos y prematuros con agua del grifo clorada para eliminar cualquier residuo y parásito. Remoje los cangrejos en formaldehído durante 30 minutos. Asegurar la aireación continua y suave con piedras de aire durante el tratamiento con formaldehído.A continuación, use agua de mar que fluye para lavar los cangrejos para eliminar cualquier formaldehído residual. Para realizar la cauterización del tallo ocular del cangrejo, comience calentando la punta de una varilla de metal con un soplete hasta que la varilla esté de color rojo brillante. Cubra un cangrejo anestesiado con una toalla de algodón húmeda y sostenga un ojo del cangrejo con fórceps esterilizados.Presione la punta de metal rojo caliente sobre el ojo del cangrejo durante unos 10 a 15 segundos hasta que el tallo ocular se vuelva de color naranja o naranja rojizo. Desinfecte las pinzas con etanol al 70% y límpielas con papel de seda estéril para garantizar que no haya contaminación cruzada entre cangrejos. Después de realizar la ablación en todos los cangrejos, sumerja la varilla de metal en agua del grifo.Para realizar la ablación quirúrgica, sostenga el cangrejo anestesiado con guantes gruesos de algodón y cúbralo con una toalla de algodón húmeda. Use fórceps estériles para sostener un ojo del cangrejo y corte rápidamente el tallo ocular con tijeras quirúrgicas. Después de la cirugía, prepare un tanque superior con agua de mar filtrada de 20 partes por mil con aireación continua.Conecte una tubería flexible con el tanque para el flujo de agua gravitacional. Coloque el cangrejo en una canasta y sométalo al agua de mar que fluye desde el tanque superior. Controle el cangrejo bajo el agua de mar que fluye hasta que pueda moverse espontáneamente.Coloque los cangrejos individualmente en otro acuario con agua de mar durante 30 minutos para una mayor observación. Seleccione al azar hembras recién maduras que no se hayan sometido a ablación ocular. Después de retirar el caparazón superior y el hepatopáncreas, observe e identifique la etapa de maduración del ovario de cangrejo.Las etapas de maduración ovárica se pueden identificar en función de su coloración, siendo la etapa inmadura uno translúcida o blanca cremosa, la etapa de maduración temprana dos siendo de color amarillo pálido a amarillo claro, la etapa de premaduración tres siendo amarilla a naranja claro, y la etapa cuatro completamente madura siendo de color naranja oscuro a rojizo. La tasa de maduración de las gónadas fue mayor en las hembras ablacionadas con tallo ocular en relación con las que no fueron ablacionadas. El mayor porcentaje de ovarios en etapa tres se encontró en cangrejos hembra ablacionados por el tallo ocular.El análisis unidireccional de la varianza mostró diferencias significativas entre las etapas experimentales de maduración ovárica de los cangrejos hembra. El grupo de control tuvo una mayor prevalencia de cangrejos hembras inmaduras en relación con los grupos ablacionados. Solo los grupos ablacionados pudieron producir cangrejos hembras en etapa cuatro desde una etapa inmadura 30 días después del tratamiento.Es importante asegurarse de que el tallo ocular del cangrejo de fango se haya ablacionado completamente después de la cauterización o la técnica quirúrgica. La ablación del tallo ocular permite a los criadores de crustáceos inducir la maduración ovárica y la muda fácilmente. También permite a los investigadores investigar más a fondo el papel del tallo ocular en la regulación de la reproducción del cangrejo de fango.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

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Describimos métodos de manipulación de ovocitos inmaduros de Xenopus laevis, maduración in vitro de ovocitos a óvulos e inyección intracitoplasmática de espermatozoides. Este protocolo permite la degradación de algunas proteínas maternas y la sobreexpresión de genes de interés en la fertilización, por lo que es valioso para estudiar el papel de factores específicos en el desarrollo embrionario temprano.

La manipulación y<em&gt; In Vitro</em&gt; La maduración de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Los ovocitos, seguido de inyección intracitoplasmática de espermatozoides, para estudiar el desarrollo embrionario

Describimos un sistema de ovocitos y capuchones animales de Xenopus para la clonación de expresión de genes capaces de inducir una respuesta en ectodermo competente, y discutimos técnicas para el análisis posterior de dichos genes. Este sistema es útil en la identificación funcional de una amplia gama de productos génicos.

Clonación funcional utilizando una<em&gt; Xenopus</em&gt; Sistema de Expresión de ovocitos

El estudio de la biología de los anfibios proporciona información valiosa sobre los procesos reproductivos, fisiológicos, embrionarios y de desarrollo que impulsan los organismos de muchos grupos taxonómicos. Aquí, presentamos una guía completa sobre diferentes metodologías que se pueden utilizar para estudiar el control y monitoreo ovárico en anfibios.

Técnicas Reproductivas para el Monitoreo y Control de La Ovacada en Anfibios

Este protocolo describe los enfoques para la detección y cuantificación de grandes extrusiones de agregados y/o orgánulos (4 m) producidos por células C. elegans en forma de exoferos unidos a la membrana. Describimos las tensiones, las condiciones de crecimiento, los criterios de puntuación, el momento y las consideraciones de microscopía necesarias para facilitar la disección de este mecanismo de expulsión de escombros.

Enfoques cuantitativos para la puntuación in vivo de la extrusión de agregados neuronales y organelle en vesículas de exoféro grandes en C. elegans

Este protocolo describe la construcción de un sistema de microinyección de bajo costo, su implantación estereotáxica en estructuras cerebrales profundas y el procedimiento para microinyecciones cronometradas de tetrodotoxina en ratas despiertas y sin restricciones. El objetivo es revelar la participación de las estructuras hipotalámicas en la regulación de la ovulación mediante la inhibición de su actividad neuronal.

Desentrañando el papel de las áreas discretas del cerebro de la rata en la regulación de la ovulación a través de la inactivación reversible por microinyecciones de tetrodotoxina

Se presenta un protocolo optimizado que permite el agotamiento de los centros organizadores de microtúbulos citoplasmáticos en ovocitos de ratón durante la metafase I utilizando un láser de femtosegundo de infrarrojo cercano.

Ablación con láser multifotón de centros organizadores de microtúbulos citoplasmáticos en ovocitos de ratón

El protocolo demuestra un método de disección simple y fácil, adecuado para insectos hembra migratorios de tipo silvestre capturados con trampas de reflectores. Esta técnica puede aclarar significativamente la misma especie comparando ambos tejidos reproductivos, es decir, el saco de apareamiento y el desarrollo ovárico de insectos hembra de tipo salvaje.

Disección y clasificación del desarrollo ovárico en insectos hembra de tipo silvestre

Este protocolo establece métodos para extraer y cuantificar las respuestas a la feromona sexual volátil en C. elegans, proporcionando herramientas para estudiar la comunicación química y la trayectoria de navegación.

Extracción de feromonas sexuales volátiles y ensayo de quimioatracción en Caenorhabditis elegans

Aquí, presentamos protocolos y herramientas para visualizar el calcio durante la fertilización y la embriogénesis temprana utilizando un reportero de calcio codificado genéticamente expresado en la línea germinal del nematodo modelo C. elegans.

Visualización in vivo de transitorios de calcio durante la fertilización y el desarrollo temprano en C. elegans

Aprende la ablación del tallo ocular mediante cauterización y cirugía para inducir la maduración ovárica en cangrejos de fango hembra. Este método mejora la reproducción en acuicultura sin afectar la supervivencia.

Ablación del tallo ocular para aumentar la maduración ovárica en cangrejos de fango

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