Name: Un modelo de oreja de ratón para la evaluación de la dermatitis alérgica de contacto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:55:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Aprende a inducir dermatitis alérgica de contacto en orejas de ratón usando DNFB. Este protocolo estable y eficiente permite evaluar la patogénesis y probar nuevos tratamientos terapéuticos en investigación preclínica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (NSFC) a N.-N. Y. (81904212); Proyecto de Ciencia y Tecnología de Medicina Tradicional China de Jiangsu (YB201995); y el Proyecto de Financiación Especial para Investigadores Postdoctorales en China (2020T130562).

Todo el cuidado y tratamiento de los ratones estuvo de acuerdo con las pautas establecidas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Yangzhou y fueron aprobadas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales bajo la licencia del proyecto SYXK (SU) 2022-0044. En este estudio se utilizaron ratones machos y hembras BALB/c de 6 a 8 semanas de edad. Cada grupo consistía en seis ratones (ver Tabla de Materiales). Las jaulas se colocaron en una cámara de temperatura controlada (22 ± 2 °C, ciclo de luz/oscuridad de 12 h) con libre acceso a alimentos y agua. En la Figura 1 se muestra un diagrama de flujo experimental.
1. Preparación de animales
<ol><li>Comience el modelado después de 1 semana de aclimatación al medio ambiente.</li>
	<li>Use una lámpara ultravioleta y desinfectante con alcohol al 75% para limpiar y desinfectar el ambiente y las encimeras antes de manipular a los ratones. NOTA: Para evitar la influencia de factores externos, no se puede marcar los ratones para su identificación en la oreja del ratón; La tinción en la espalda o en la cola se puede utilizar como alternativa.</li>
	<li>Use un pequeño hisopo de algodón para aplicar agua jabonosa en el abdomen de los ratones (aproximadamente 1-2 cm2 de tamaño). Afeite el área en la dirección del crecimiento del cabello con una cuchilla o afeitadora (consulte la Tabla de materiales) al comienzo del modelado (día 0; Figura 2A). NOTA: El uso de una cuchilla de afeitar recta para la depilación requiere un operador experto. Si no se realiza correctamente, puede causar irritación de la piel. Considere usar crema depilatoria, cortapelos o una maquinilla de afeitar de seguridad para la depilación.</li>
	<li>Pesa el ratón y compara los cambios de peso entre cada grupo.</li>
</ol>2. Estimulación de la sensibilización abdominal
<ol><li>Asegurar la recuperación completa de cualquier lesión menor en la piel del abdomen inducida por el afeitado. Aplicar sensibilización abdominal 2 días después del afeitado (día 2).</li>
	<li>Prepare la solución de DNFB al 0,5%: diluya DNFB con una mezcla de acetona: aceite de oliva en una proporción de 4: 1 (por ejemplo, 400 μL de acetona mezclada con 100 μL de aceite de oliva; consulte la Tabla de materiales). Use una pistola de pipeta para soplar y mezclar 20 veces para mezclar bien la solución DNFB. Antes de cada administración de la solución DNFB al ratón, sople y mezcle de tres a cinco veces. NOTA: Prepare la solución antes de usarla y envuélvala en papel de aluminio para protegerla de la luz solar directa.</li>
	<li>Aplique 25 μL de la solución de DNFB al 0,5% en la piel del área afeitada en el abdomen de los ratones con una pipeta (Figura 2B).</li>
	<li>Gotee la solución de DNFB sobre el centro del área de afeitado abdominal y extiéndala ligeramente con el lado liso de la punta de la pipeta para dispersarla uniformemente.</li>
	<li>A los 30 s después de la estimulación con DNFB, coloque a los ratones en jaulas vacías sin ropa de cama para evitar que se froten la solución de DNFB. Cuando la solución de DNFB esté completamente seca (aproximadamente 2 minutos), devuelva los ratones a su jaula original.</li>
	<li>Use guantes cuando manipule la solución DNFB, ya que es muy irritante para la piel humana.</li>
</ol>3. Estimulación de la sensibilización del oído
<ol><li>Prepare una solución de DNFB al 0,2% como la anterior, la solución del vehículo (una mezcla 4: 1 de acetona y aceite de oliva) y agua pura.</li>
	<li>Oriente el cuerpo del ratón y haga que el borde exterior de la aurícula mire hacia abajo durante toda la operación para evitar que la solución entre en el canal auditivo durante la estimulación DNFB.</li>
	<li>En los días 4, 6, 8 y 10, use una pipeta para aplicar 20 μL de la solución de DNFB al 0,2% o solución vehicular lenta y uniformemente a la superficie interna de las aurículas izquierdas de los ratones. Para evitar que la solución de DNFB entre en el canal auditivo, use el lado liso de la punta de la pipeta para distribuir suavemente la solución de DNFB durante la administración. Deje las orejas derechas sin tratar (Figura 2C).</li>
	<li>Espere hasta que la solución de DNFB esté seca y vuelva a colocar los ratones en la jaula (aproximadamente 30 s).</li>
	<li>Use guantes cuando manipule la solución DNFB.</li>
</ol>4. Registro del peso del ratón y los síntomas de ACD
<ol><li>Pese el ratón todos los días, comience el día 1 y compare con su peso correspondiente el día 0; evaluar el efecto de ACD en el peso corporal de ratones como cambio de peso (g) ± error estándar de la media (SEM).</li>
	<li>Tome fotos de alta resolución de las orejas de ratón para registrar los síntomas clínicos de ACD cada 2 días, a partir del día 1.</li>
</ol>5. Medición del espesor de la aurícula
<ol><li>Mida el grosor de la aurícula cada 2 días, a partir del día 1. Mide y registra ambos oídos en detalle.</li>
	<li>Use calibradores vernier (consulte la Tabla de materiales) para medir el grosor de la aurícula a la misma hora cada día para obtener resultados precisos (Figura 3A). Evite que las pinzas vernier continúen sujetando hacia adentro cuando haya un ligero bloqueo, para evitar daños tisulares en la oreja del ratón. Mantenga la posición fija y registre los datos.</li>
	<li>Recoja el grosor de tres ubicaciones diferentes en cada aurícula (Figura 3B). Registre el promedio de los tres datos como un valor válido. Evaluar la hinchazón del oído en micrómetros (μm) ± error estándar de la media (SEM).</li>
</ol>6. Evaluación del grado de inflamación inflamatoria
<ol><li>Prepare una solución de colorante azul Evans al 0,5% (consulte la Tabla de materiales): diluya el colorante azul Evans con solución salina tamponada con fosfato (PBS) el día 11. Use una bata de laboratorio y guantes en todo momento, ya que el tinte azul Evans es ligeramente tóxico para los humanos.</li>
	<li>Inmovilice a los ratones con un fijador: abra la tapa del fijador (consulte la Tabla de materiales), sostenga la cola del mouse, haga que la cabeza del mouse mire hacia el fijador y haga que el mouse se suba instintivamente al fijador. Cubra la tapa, haga que la cola del ratón salga del orificio de la tapa y ajuste la longitud del fijador para exponer toda la cola del ratón.</li>
	<li>Limpie la cola repetidamente con una bola de algodón con alcohol o sumérjala en agua tibia durante 30 s, y pellizque suavemente la raíz de la cola para rellenar y expandir las venas en ambos lados. Realizar la inyección bajo la irradiación de una fuente de luz fría.</li>
	<li>Inyecte lentamente la solución de colorante azul Evans en la vena de la cola del ratón con una aguja de insulina de 1 mm. Espere 15 minutos y luego tome fotografías de las orejas del ratón. NOTA: Coloque el ratón sobre la mesa y sosténgalo suavemente para exponer la región del oído para la adquisición de imágenes. Poco después de la inyección con la solución de colorante azul Evans y observando las indicaciones correspondientes, use la luxación cervical para sacrificar al ratón.</li>
</ol>

<ol><li>Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+allergic+contact+dermatitis.+Part+I%3A+Clinical+features+and+common+contact+allergens+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).</li>
<li>Koppes, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+knowledge+on+biomarkers+for+contact+sensitization+and+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis.</a> Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).</li>
<li>Martin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+chemical-induced+innate+immunity+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).</li>
<li>Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Allergic contact dermatitis.</a> International Immunopharmacology. 2 (2-3), 201-211 (2002).</li>
<li>Vocanson, M., Hennino, A., Rozieres, A., Poyet, G., Nicolas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+and+regulatory+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 64 (12), 1699-1714 (2009).</li>
<li>Gamradt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+checkpoint+receptors+control+CD8%2B+resident+memory+T+cells+to+prevent+skin+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).</li>
<li>Fraginals, R., Blasi, N. A., Lepoittevin, J. P., Benezra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+successful+murine+model+for+contact+sensitization+to+a+sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone%3A+sensitization+to+alantolactone+in+four+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A successful murine model for contact sensitization to a sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone: sensitization to alantolactone in four strains of mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 97 (3), 473-477 (1991).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%3A+5.+Evidence+that+inhibition+of+suppressor+T+lymphocytes+by+Corynebacterium+parvum+is+mediated+by+interferon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).</li>
<li>Polak, L., Scheper, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+T-cell+lines+in+DNCB-contact+sensitivity+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific T-cell lines in DNCB-contact sensitivity in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 80 (5), 398-402 (1983).</li>
<li>Witten, V. H., March, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+mechanism+of+allergic+eczematous+contact+dermatitis.+II.+Use+of+C14+labelled+2%3A4-dinitrochlorobenzene+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Studies of the mechanism of allergic eczematous contact dermatitis. II. Use of C14 labelled 2:4-dinitrochlorobenzene in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 31 (2), 97-102 (1958).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanism+in+allergic+contact+dermatitis.+IV.+Selective+inhibition+of+suppressor+T-lymphocytes+by+serum+obtained+from+Corynebacterium+parvum+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanism in allergic contact dermatitis. IV. Selective inhibition of suppressor T-lymphocytes by serum obtained from Corynebacterium parvum treated mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 77 (6), 469-473 (1981).</li>
<li>Rubic-Schneider, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPR91+deficiency+exacerbates+allergic+contact+dermatitis+while+reducing+arthritic+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice.</a> Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).</li>
<li>Stampf, J. L., Benezra, C., Byers, V., Castagnoli Jr, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+poison+ivy+urushiol+in+the+guinea+pig+by+epicutaneous+application+of+the+structural+analog+5-methyl-3-n-pentadecylcatechol%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to poison ivy urushiol in the guinea pig by epicutaneous application of the structural analog 5-methyl-3-n-pentadecylcatechol.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 86 (5), 535-538 (1986).</li>
<li>Dhingra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+profiling+of+contact+dermatitis+skin+identifies+allergen-dependent+differences+in+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).</li>
<li>Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+photoallergic+contact+dermatitis%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).</li>
<li>Qiu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dysregulated+sebum-microbial+metabolite-IL-33+axis+initiates+skin+inflammation+in+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">A dysregulated sebum-microbial metabolite-IL-33 axis initiates skin inflammation in atopic dermatitis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 219 (10), e2021397(2022).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+activities+of+Dictamnus+dasycarpus+Turcz.%2C+root+bark+on+allergic+contact+dermatitis+induced+by+dinitrofluorobenzene+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice.</a> Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).</li>
<li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6%27-acetylpaeoniflorin+on+dinitrochlorobenzene-induced+allergic+contact+dermatitis+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunologic+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of 6'-acetylpaeoniflorin on dinitrochlorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice.</a> Immunologic Research. 64 (4), 857-868 (2016).</li>
<li>Donglang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+different+skin+pruritus+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative study on different skin pruritus mouse models.</a> Frontiers in Medicine. 8, 630237(2021).</li>
<li>Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology-based+analysis+to+explore+the+therapeutic+mechanism+of+Cortex+Dictamni+on+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023(2023).</li>
</ol>

Los autores no reportan conflictos de intereses en este trabajo.

El protocolo descrito aquí para inducir síntomas similares al ACD en los oídos de ratones se puede utilizar para estudiar la fisiopatología de ACD y como una herramienta de detección para el desarrollo de nuevos fármacos.
Hay dos pasos clave para establecer un modelo de ACD: sensibilización inicial y estimulación posterior. El abdomen suele ser el sitio de sensibilización inicial, pero el sitio de estimulación posterior se eligió de manera ligeramente diferente. Estudios previos han demostrado...

La dermatitis alérgica de contacto (ACD) es una enfermedad común de la piel que se caracteriza por síntomas similares al eccema en el sitio de contacto, edema y eritema en casos moderados, y pápulas, erosión, exudación o incluso cicatrices masivas en casos graves1. Afecta hasta al 20% de la población y puede afectar a personas de cualquier edad2. La ACD a menudo ocurre en individuos que han estado expuestos a alérgenos repetidamente y puede ser causada por la respuesta inmune del individuo a uno o más alérgenos en su hogar o lugar de trabajo3. La hipersensibilidad retardada tipo IV se considera el principal tipo de respuesta inmune en ACD4. En áreas de la piel que han sido expuestas repetidamente a alérgenos, las células T de memoria circulantes se acumulan en grandes cantidades e inducen respuestas inmunes e inflamatorias 3,5,6. El propósito de este trabajo es proponer una técnica de laboratorio confiable para una mayor investigación de las respuestas inmunológicas e inflamatorias en el desarrollo de ACD.
La aparición de ACD generalmente se debe a la hipersensibilidad de contacto causada por la exposición repetida a productos químicos. Numerosos investigadores han desarrollado varios modelos animales de ACD en ratones domésticos7,8, conejillos de indias9,10 y otros animales en el transcurso de las últimas décadas, con el fin de simular el inicio de la enfermedad. La mayoría de los métodos experimentales constan de dos etapas: sensibilización abdominal (inducción) y proporcionar estímulos en la espalda o el lóbulo de la oreja (estimulación). Las sustancias químicas de uso común incluyen principalmente 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB)/1-cloro-2,4-dinitrobenceno (DNCB)8,9,11, oxazolona 12, urushiol 13, etc. Entre ellos, DNFB y DNCB son los más utilizados, reportados por primera vez en octubre de 195810. El modelo de sensibilización al níquel14 y la dermatitis de contacto fotoalérgica modelo15 también se utilizan con frecuencia.
Presentamos un método experimental para construir el modelo ACD. Este método se resume y optimiza sobre la base de estudios previos y tras la comparación con múltiples experimentos. En comparación con otros modelos de ACD, este modelo tiene algunas ventajas, como pequeñas diferencias individuales, períodos experimentales cortos, una pequeña cantidad de estimulación química, etc. Además, este estudio es aplicable a ratones, que no solo son económicos, sino que también tienen más opciones para la eliminación de genes o la preparación de ratones transgénicos16. También describimos los diversos métodos utilizados para monitorear el progreso de ACD en el experimento, como medir el grosor de la oreja, usar colorante azul de Evans para medir la exudación inflamatoria, etc. Este modelo no solo puede analizar orejas de ratón, sangre, bazo y otras muestras por medios de laboratorio para explorar la patogénesis de la ACD, sino que también es aplicable para la evaluación preclínica de nuevos métodos terapéuticos, que tiene un cierto significado promocional.

<table><tbody><tr><td>1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB)</td><td>Merck</td><td>200-734-3</td><td>1-fluoro-2,4-dinitrobenceno, &ge; 99%</td></tr><tr><td>Acetona</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd 10000418</td><td></td><td>&ge; 99.5%</td></tr><tr><td>Papel de aluminio &nbsp;</td><td>Cleanwrap</td><td>CF-2</td><td></td></tr><tr><td>Evans tinte azul</td><td>Solarbio</td><td>314-13-6</td><td>Contenido de colorante aprox. 80%</td></tr><tr><td>Fijador de ratón</td><td>ZHUYANBANG</td><td>GEGD-SM1830</td><td></td></tr><tr><td>Aceite de oliva</td><td>Solarbio</td><td>8001-25-0</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Punta de pipeta</td><td>Biofount</td><td>FT-200</td><td>10 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>Pipeta</td><td>Eppendorf AG</td><td>3123000250</td><td>20 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>Hoja de afeitar Shanghai</td><td>Gillette Co. LTD</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Vernier</td><td>Delixi Electric</td><td>DECHOTVCS1200</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo de oreja de ratón para la evaluación de la dermatitis alérgica de contacto

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

La piel es la primera línea de defensa del cuerpo humano y uno de los órganos más expuestos a los productos químicos ambientales. La dermatitis alérgica de contacto (ACD) es una enfermedad común de la piel que se manifiesta como una erupción local, enrojecimiento y lesiones cutáneas. La aparición y el desarrollo de ACD están influenciados por factores genéticos y ambientales. Aunque muchos estudiosos han construido una serie de modelos de ACD en los últimos años, los protocolos experimentales de estos modelos son todos diferentes, lo que dificulta que los lectores los establezcan bien. Por lo tanto, un modelo animal estable y eficiente es de gran importancia para estudiar más a fondo la patogénesis de la dermatitis atópica. En este estudio, detallamos un método de modelado que utiliza 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB) para inducir síntomas similares a ACD en los oídos de ratones y describimos varios métodos para evaluar la gravedad de la dermatitis durante el modelado. Este protocolo experimental se ha aplicado con éxito en algunos experimentos y tiene un cierto papel promocional en el campo de la investigación del ACD.

Bajo estimulación repetida de DNFB, las orejas de ratón del grupo DNFB mostraron síntomas clínicos evidentes comparables a ACD, con áreas sensibles que muestran los síntomas típicos de enrojecimiento, sequedad e incluso erosión y exudación. Sin embargo, la administración en el oído de agua pura (grupo control) o control con disolvente (grupo de vehículos) no produjo síntomas similares (Figura 4).
Mientras tanto, en el grupo DNFB, en comparación con el oído derecho...

Aquí, describimos los métodos para inducir dermatitis alérgica de contacto en orejas de ratón por 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB) y cómo evaluar la gravedad de la dermatitis alérgica de contacto.

Un modelo de oreja de ratón para la evaluación de la dermatitis alérgica de contacto

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...

Este modelo no solo se puede utilizar para explorar la patogénesis de la ACD, sino que también es aplicable para la evolución preclínica de nuevos métodos terapéuticos, que tiene un significado importante. Este es un modelo animal estable y eficiente con muchas ventajas, como un corto período experimental, fácil operación, síntomas obvios y una alta tasa de éxito. Nuestro protocolo experimental es muy detallado y fácil de operar.Asegúrese de seguir cada paso del protocolo correctamente. Antes de comenzar el modelado, aclimatar a los ratones al medio ambiente durante una semana con acceso gratuito a alimentos y agua. El día del modelado, utilizando una lámpara ultravioleta y 75% de alcohol, limpie y desinfecte el ambiente y las encimeras.Aplique agua jabonosa en el abdomen de los ratones con un hisopo de algodón y afeite el área en la dirección del crecimiento del vello con una cuchilla o afeitadora. Pesa el ratón y compara los cambios de peso entre cada grupo. Antes de realizar la estimulación de sensibilización abdominal, asegúrese de la recuperación completa de cualquier lesión menor en la piel del abdomen del ratón inducida por el afeitado.Prepare una solución de DNFB al 0,5% y dilúyala con acetona a la mezcla de aceite de oliva en una proporción de 4 a 1. Con una pistola de pipetas, sople y mezcle 20 veces para mezclar bien la solución DNFB. Aplique 25 microlitros de la solución de DNFB al 0,5% sobre el centro del área de afeitado abdominal con un pipeteo, y extiéndalo ligeramente con el lado liso de la punta del pipeter para dispersarlo uniformemente.Después de 30 segundos de estimulación DNFB, coloque el ratón en una jaula vacía sin ropa de cama para evitar que el ratón frote la solución de DNFB. Cuando la solución esté completamente seca, devuelva el ratón a su jaula original con acceso gratuito a alimentos y agua. Para la estimulación de la sensibilización del oído, oriente el cuerpo del ratón y haga que el borde exterior de la aurícula mire hacia abajo para evitar que la solución ingrese al canal auditivo durante la estimulación DNFB.En los días 4 y 10, usando un pipeter, aplique 20 microlitros del vehículo, o solución de DNFB al 0,2% lenta y uniformemente a la superficie interna de la aurícula izquierda, y distribuya suavemente la solución usando el lado liso del pipeter. Deje el oído derecho sin tratar. Espere hasta que la solución DNFB esté seca y vuelva a colocar el ratón en la jaula.Después de la estimulación de sensibilización abdominal y auditiva, pesar a los ratones cada dos días a partir del primer día. Compare el peso de cada ratón con el día cero y evalúe el efecto de ACD en el peso corporal de los ratones a medida que cambia el peso. Capture fotos de alta resolución de las orejas del ratón para registrar los síntomas clínicos de ACD cada dos días, a partir del primer día.Usando calibradores vernier, mida el grosor de la aurícula a la misma hora cada día para obtener resultados precisos. Evite que las pinzas vernier continúen sujetando hacia adentro cuando haya un ligero bloqueo para evitar daños tisulares en la oreja del ratón. Mantenga la posición fija y registre los datos para ambos oídos.Registre el promedio de los tres datos y evalúe la hinchazón del oído en micrómetros. Para evaluar el grado de inflamación inflamatoria en el día 11, prepare una solución de colorante Evans Blue al 0,5% y dilúyala con PBS. Para inmovilizar el mouse con un fijador, abra la tapa, sostenga la cola del mouse, haga que la cabeza del mouse mire hacia el fijador y permita que el mouse se suba instintivamente al fijador.Cubra la tapa. Haga que la cola del ratón salga del orificio de la tapa y ajuste la longitud del fijador para exponer toda la cola del ratón. Limpie la cola repetidamente con una bola de algodón con alcohol, o sumérjala en agua tibia durante 30 segundos, y pellizque suavemente la raíz de la cola para rellenar, y expanda las venas en ambos lados.Inyecte lentamente la solución de Evans Blue Dye en la vena de la cola del ratón utilizando una aguja de insulina de 1 mm bajo la irradiación de una fuente de luz fría. Espere 15 minutos para tomar fotografías de las orejas del ratón. Las orejas de ratón del grupo DNFB mostraron síntomas clínicos evidentes comparables a ACD, con áreas sensibles que muestran los síntomas típicos de enrojecimiento, sequedad, erosión y exudación.Sin embargo, la administración en el oído de agua pura o control con disolventes no produjo ningún síntoma similar al grupo DNFB. En el grupo DNFB, en comparación con el oído derecho no tratado, el grosor del oído izquierdo aumentó significativamente después de la estimulación DNFB. No hubo diferencias significativas en los grupos control y de vehículos.La oreja izquierda de los ratones del grupo DNFB se volvió azul oscuro después de la inyección del tinte Evans Blue, que era visualmente diferente de la oreja derecha. Las orejas izquierda y derecha de los ratones en los grupos de control y vehículos eran aproximadamente del mismo color. El aumento de peso del ratón se redujo ligeramente por DNFB, o estimulación simple del vehículo, pero no resultó en una pérdida de peso significativa.La estimulación repetida de DNFB en el oído del ratón resultó en agrandamiento del bazo y un aumento en el índice del bazo. En contraste, el índice de bazo de los ratones en el grupo de vehículos no cambió significativamente. Asegúrese de que la solución de DINFB esté completamente mezclada y se aplique uniformemente a la oreja del ratón sin fluir hacia el canal auditivo.Esta es la clave del éxito del modelado.

a-mouse-ear-model-for-allergic-contact-dermatitis-evaluation

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Los modelos experimentales de ratón de asma alérgica ofrecen nuevas posibilidades para el estudio de patogénesis de la enfermedad y el desarrollo de nuevas terapias. Estos modelos se adaptan bien a los factores de medición que regulan la respuesta inmune alérgica, inflamación de las vías, y la fisiopatología pulmonar.

Modelo murino de asma inducida por alergenos

Este video describe un método para medir la sensibilidad a los rayos UV en un modelo de ratón humanizado, un modelo de ratón que imita la piel humana. Determinamos la dosis eritematosa mínima (MED) de radiación UV que puede causar eritema o edema en la piel. El método puede ayudar a averiguar la eficacia de los fármacos utilizados para reducir la sensibilidad a los rayos UV.

Ensayo de dosis mínima eritematosa: un método para medir la sensibilidad a los rayos UV en modelos de ratón

Este vídeo muestra una técnica in vivo para evaluar un antígeno de prueba mediante la inducción de inflamación de la piel en un modelo murino. El antígeno de prueba, un hapteno en una solución de aceite y acetona, se aplica tópicamente en la piel de la oreja del ratón y se evalúa la inflamación de la piel después de un período adecuado.

Técnica para evaluar la respuesta inmunitaria frente a un antígeno mediante la inducción de inflamación de la piel

Este video muestra la infección cutánea inducida por Malassezia en ratones. La suspensión de aceite de Malassezia se aplica sobre el oído herido, lo que provoca inflamación e hinchazón del tejido del oído. Posteriormente, las mazorcas se diseccionan, se homogeneizan y se extienden en una placa de agar para su crecimiento. El número de colonias indica la carga fúngica resultante de la inflamación de la piel.

Análisis de la inflamación de la piel y la carga fúngica inducida por Malassezia en un modelo murino

Las respuestas alérgicas, caracterizados por la activación de los mastocitos y basófilos, están impulsados ​​por la reticulación de IgE y liberación de mediadores proinflamatorios. Una evaluación cuantitativa de las respuestas alérgicas se puede lograr mediante el uso de colorante azul de Evans para monitorear los cambios en la permeabilidad vascular después de la provocación con alergeno.

Medición anafilaxia local en ratones

Aquí, describimos un método imagenológico de alta resolución Monte todo en la piel de oreja de ratón adulto entero, que nos permite visualizar la ramificación de la morfogénesis y el patrón de los nervios periféricos y vasos sanguíneos, así como distribución de células inmunes.

Whole-mount Microscopía Confocal para el oído adulto piel: un sistema modelo para el estudio de morfogénesis Neuro-vascular de ramificación y distribución de células inmunes

Se describe un enfoque para la detección en tiempo real de la respuesta inmune innata a heridas cutáneas y la infección de Staphylococcus aureus de los ratones. Por que comparan LysM-EGFP ratones (que poseen fluorescentes neutrófilos) con un LysM-EGFP mestizas cepa de ratón inmunodeficiente, avanzar en nuestra comprensión de la infección y el desarrollo de enfoques para combatir la infección.

Un modelo de ratón para evaluar respuesta inmune innata a la infección por Staphylococcus aureus

La hipersensibilidad de contacto (CHS) es un modelo experimental murino de dermatitis alérgica de contacto (ACD). El CHS se basa en la sensibilización con hapteno reactivo mediante la pintura de la piel afeitada del pecho y el abdomen, con un posterior desafío de la piel del oído con un hapteno diluido, causando una reacción de hinchazón que se evalúa de varias maneras.

Hipersensibilidad de contacto como modelo murino de dermatitis alérgica de contacto

Este protocolo describe el procedimiento para inducir la inflamación del acné en la piel de rata con ácido oleico y Cutibacterium acnes.

Un modelo de rata de acné compuesto

El estudio demuestra el papel de la piel en la modulación de las respuestas inmunitarias en ratones a través de la inmunización epicutánea (EC). La inmunización de la AE con un antígeno proteico puede suprimir las respuestas inmunitarias en la hipersensibilidad de contacto o revertir la supresión inducida por la piel cuando se combina con patrones moleculares asociados a patógenos. La inmunización anticonceptiva anticonceptiva (AE) se muestra prometedora como un enfoque eficaz y sin agujas para...

Modelo murino de inmunomodulación inducida epicutáneamente

Aprende a inducir dermatitis alérgica de contacto en orejas de ratón usando DNFB. Este protocolo estable y eficiente permite evaluar la patogénesis y probar nuevos tratamientos terapéuticos en investigación preclínica.

Un modelo de oreja de ratón para la evaluación de la dermatitis alérgica de contacto

Explorar más videos