Name: Cultivo primario de células madre de pulpa dental (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-05T13:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 45 s
Description: Aprende el método de cultivo primario de células madre de pulpa dental mediante el método de explante. Esta técnica permite aislar una población homogénea de células para aplicaciones en regeneración ósea y medicina regenerativa personalizada.

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Reconocemos el apoyo financiero a AK por parte del Departamento de Investigación en Salud (DHR), ICMR, Gobierno de la India (Subvención DHR-NRI # R.12015/01/2022-HR). SR ha recibido fondos de ICMR, Gobierno de la India (Subvención # 2020-7593/SCR-BMS) y PS ha recibido una beca del CSIR, Gobierno de la India. También agradecemos a la Sra. Sandhya Tokhi y a la Sra. Bhupinder Kaur por su asistencia en citometría de flujo y núcleo central de instrumentación sofisticada (CSIC) y a PGIMER, Chandigarh por proporcionar apoyo a la infraestructura.

Establecimiento del cultivo primario de células madre de la pulpa dental

<ol><li>Bhattacharyya, S., Kumar, A., Lal Khanduja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voyage+of+stem+cell+toward+terminal+differentiation%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">The voyage of stem cell toward terminal differentiation: a brief overview.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 44 (6), 463-475 (2012).</li>
<li>Prentice, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adult stem cells.</a> Circulation Research. 124 (6), 837-839 (2019).</li>
<li>Raik, S., Kumar, A., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+cell-free+therapeutic+approach%3A+Role+of+stem+cell+%26%2334%3Bsoup-ernatant%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Applied+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Insights into cell-free therapeutic approach: Role of stem cell &#34;soup-ernatant&#34.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 65 (2), 104-118 (2018).</li>
<li>Rodriguez-Fuentes, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+current+clinical+applications%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells current clinical applications: a systematic review.</a> Archives of Medical Research. 52 (1), 93-101 (2021).</li>
<li>Yamazaki, K., Kawabori, M., Seki, T., Houkin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+of+stem+cell+treatment+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Clinical trials of stem cell treatment for spinal cord injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 3994(2020).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+spectrum+of+secretome+regulates+the+relative+hepatogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow+and+dental+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15015(2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+cues+modulate+the+neurogenic+potential+of+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Secretome cues modulate the neurogenic potential of bone marrow and dental stem cells.</a> Molecular Neurobiology. 54 (6), 4672-4682 (2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+proteins+regulate+comparative+osteogenic+and+adipogenic+potential+in+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Secretome proteins regulate comparative osteogenic and adipogenic potential in bone marrow and dental stem cells.</a> Biochimie. 155, 129-139 (2018).</li>
<li>Kumar, A., Bhattacharyya, S., Rattan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+uncontrolled+freezing+on+biological+characteristics+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Effect of uncontrolled freezing on biological characteristics of human dental pulp stem cells.</a> Cell Tissue Bank. 16 (4), 513-522 (2015).</li>
<li>Raik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+post-thaw+quality+of+dental+mesenchymal+stromal+cells+after+long-term+cryopreservation+by+uncontrolled+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Assessment of post-thaw quality of dental mesenchymal stromal cells after long-term cryopreservation by uncontrolled freezing.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 191 (2), 728-743 (2020).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Tsutsui, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+advances+to+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Cloning%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: advances to applications.</a> Stem Cells and Cloning. 13, 33-42 (2020).</li>
<li>Huang, G. T. -J., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources%3A+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> Journal of Dental Research. 88 (9), 792-806 (2009).</li>
<li>La Noce, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+state+of+the+art+and+suggestions+for+a+true+translation+of+research+into+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: state of the art and suggestions for a true translation of research into therapy.</a> Journal of Dentistry. 42 (7), 761-768 (2014).</li>
<li>Xiao, L., Tsutsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+dental+pulp+cells-derived+spheroids+in+serum-free+medium%3A+stem+cells+in+the+core%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of human dental pulp cells-derived spheroids in serum-free medium: stem cells in the core.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2624-2636 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Yun, H., Funderburgh, M. L., Du, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+therapy+for+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Regenerative therapy for the cornea.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 87, 101011(2022).</li>
<li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function%2C+induce+angiogenesis%2C+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26 (3), 638-645 (2008).</li>
<li>Yong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+angiogenic+ability+between+SHED+and+DPSC+in+a+mice+model+with+critical+limb+ischemic%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of the angiogenic ability between SHED and DPSC in a mice model with critical limb ischemic.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (4), 861-870 (2022).</li>
<li>Zhang, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+transplantation+in+a+rat+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of dental pulp stem cell transplantation in a rat model of Alzheimer's disease.</a> Neural Regeneration Research. 16 (5), 893-898 (2021).</li>
<li>Kabir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imperative+role+of+dental+pulp+stem+cells+in+regenerative+therapies%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nigerian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Imperative role of dental pulp stem cells in regenerative therapies: a systematic review.</a> Nigerian Journal of Surgery. 20 (1), 1-8 (2014).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cell+secretome+ameliorates+d-galactose+induced+accelerated+aging+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cell secretome ameliorates d-galactose induced accelerated aging in rat model.</a> Cell Biochemistry and Function. 40 (5), 535-545 (2022).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+therapeutic+benefits+of+factors+derived+from+dental+pulp+stem+cells+for+mouse+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multifaceted therapeutic benefits of factors derived from dental pulp stem cells for mouse liver fibrosis.</a> Stem Cells Translational Medicine. 5 (10), 1416-1424 (2016).</li>
<li>Fujii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regeneration+by+human+dental+pulp+stem+cells+using+a+helioxanthin+derivative+and+cell-sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">regeneration by human dental pulp stem cells using a helioxanthin derivative and cell-sheet technology.</a> Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 24(2018).</li>
<li>Ferrua, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+has+dental+pulp+stem+cells+isolation+been+conducted%3F+A+scoping+review%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">How has dental pulp stem cells isolation been conducted? A scoping review.</a> Brazilian Oral Research. 31, e87(2017).</li>
<li>Pilbauerova, N., Soukup, T., Suchankova Kleplova, T., Suchanek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+isolation%2C+amplification+and+characterization+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Biologica%22%5BJournal%5D)">Enzymatic isolation, amplification and characterization of dental pulp stem cells.</a> Folia Biologica. 65 (3), 124-133 (2019).</li>
<li>Tatullo, M., Marrelli, M., Shakesheff, K. M., White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+function%2C+isolation+and+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: function, isolation and applications in regenerative medicine.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 9 (11), 1205-1216 (2015).</li>
<li>Hilkens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+isolation+methodology+on+stem+cell+properties+and+multilineage+differentiation+potential+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells.</a> Cell and Tissue Research. 353 (1), 65-78 (2013).</li>
<li>Hendijani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explant+culture%3A+An+advantageous+method+for+isolation+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Explant culture: An advantageous method for isolation of mesenchymal stem cells from human tissues.</a> Cell Proliferation. 50 (2), e12334(2017).</li>
<li>Aryal Ac, S., Islam, M. S., Samsudin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+effect+of+a+time+delay+on+the+characteristics+and+survival+of+dental+pulp+stem+cells+from+extracted+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Investigation of the effect of a time delay on the characteristics and survival of dental pulp stem cells from extracted teeth.</a> Archives of Oral Biology. 119, 104896(2020).</li>
<li>Langenbach, F., Handschel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dexamethasone%2C+ascorbic+acid+and+%CE%B2-glycerophosphate+on+the+osteogenic+differentiation+of+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effects of dexamethasone, ascorbic acid and β-glycerophosphate on the osteogenic differentiation of stem cells in vitro.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4, 117(2013).</li>
<li>Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+differentiation+of+purified%2C+culture-expanded+human+mesenchymal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 64 (2), 295-312 (1997).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+alizarin+red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optimization of the alizarin red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Coe, C. L., Lubach, G. R., Schneider, M. L., Dierschke, D. J., Ershler, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+rearing+conditions+alter+immune+responses+in+the+developing+infant+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early rearing conditions alter immune responses in the developing infant primate.</a> Pediatrics. 90, 505-509 (1992).</li>
<li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo%2Fodontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcified Tissue International. 88 (2), 130-141 (2011).</li>
<li>Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+dental+pulp+stem+cells+differentiate+toward+functionally+active+neurons+under+appropriate+environmental+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues.</a> Stem Cells. 26 (7), 1787-1795 (2008).</li>
<li>Kim, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic%2Fcementoblastic+and+neural+differentiation+of+dental+stem+cells+and+their+applications+to+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic/cementoblastic and neural differentiation of dental stem cells and their applications to tissue engineering and regenerative medicine.</a> Tissue Engineering. Part B, Reviews. 18 (3), 235-244 (2012).</li>
<li>Ge, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+C+terminus+of+CaV1.2+channels+plays+a+crucial+role+in+the+neural+differentiation+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distal C terminus of CaV1.2 channels plays a crucial role in the neural differentiation of dental pulp stem cells.</a> PLoS One. 8 (11), e81332(2013).</li>
</ol>

Los autores declaran no tener conflicto de intereses financieros o no financieros.

Las células madre han depositado la esperanza de curar numerosas enfermedades, debido a su plasticidad, robustez, propiedades inmunomoduladoras, mecanismos paracrinos y eficiencias de búsqueda. El tejido de la pulpa dental se considera la fuente más potente y valiosa de células madre, con una plasticidad eminente y una capacidad regenerativa. Aquí, demostramos el aislamiento de DPSC, utilizando el método de cultivo de explantes ampliamente adoptado, en el que las células migran de trozos de tejido de pulpa o explantes pa...

Las células madre adultas se han convertido en una poderosa herramienta terapéutica para tratamientos y terapias dirigidas a células debido a su plasticidad, mecanismos paracrinos y propiedades inmunomoduladoras 1,2,3. Los datos alentadores de los estudios preclínicos basados en células madre han inspirado a los investigadores a trabajar en la traducción del laboratorio a la cabecera del paciente. El tipo de células madre utilizadas para la terapia con células madre desempeña un papel importante en los resultados exitosos. En estudios preclínicos y clínicos, la fuente más ampliamente reportada de células madre mesenquimales (MSC) sigue siendo la médula ósea 4,5. Sin embargo, los principales inconvenientes del uso de células madre derivadas de la médula ósea (BMSC) incluyen su población rara, procedimientos altamente invasivos para el aislamiento y su capacidad limitada para expandirse. Por lo tanto, se están explorando fuentes alternativas de MSC. En este sentido, los tejidos dentales, con su facilidad de accesibilidad, enorme plasticidad, alto potencial regenerativo y alta capacidad proliferativa, han sido considerados como una fuente alternativa rica y potencial de células madre 6,7,8,9,10.
Las células madre de la pulpa dental (DPSC) fueron el primer tipo de células madre dentales en ser aisladas y caracterizadas por Gronthos en el año 200011. Las DPSC han captado la atención de las aplicaciones de ingeniería de tejidos debido a su alta tasa de proliferación, su importante potencial de diferenciación, su facilidad de acceso con un cultivo sin esfuerzo y, lo que es más importante, su capacidad para obtenerse de un diente desechado sin ninguna preocupación ética12. Las limitaciones que plantean otras fuentes de células madre, como las BMSC y las células madre derivadas del tejido adiposo (ADSC), en su aislamiento y en su inadecuada capacidad de autorrenovación, son eludidas por las DPSC13. Las DPSC humanas se pueden obtener de dientes primarios humanos, dientes permanentes, muelas del juicio, dientes deciduos exfoliados (SHED) y papilas apicales. Además, las CPDP también pueden aislarse de dientes supernumerarios, que generalmente se descartan14. Las DPSCs expresan marcadores asociados a la cresta neural y tienen el potencial de diferenciarse en células neuronales tanto in vitro como in vivo15. Además de su potencial neurogénico, las DPSC pueden diferenciarse en otros linajes celulares, como osteogénicos, condrogénicos, adipogénicos, hepáticos y miogénicos, cuando se les dan condiciones de diferenciación específicas13. Por lo tanto, estas células multipotentes tienen un gran potencial para la terapia basada en células y pueden emplearse para la regeneración de varios tejidos. Los estudios también han informado sobre el papel potencial de las DPSC en la reconstrucción de la córnea16, la reparación del infarto de miocardio17 y su posible papel terapéutico en enfermedades como la isquemia de las extremidades18, el Alzheimer 19, el Parkinson 20 y el envejecimiento21. Por lo tanto, las células madre derivadas de tejidos dentales se pueden utilizar no solo para la regeneración dental, sino también para la reparación y regeneración de órganos no dentales como ojos16, corazones17, hígados22, huesos23 , etc.
Existen dos métodos particulares para el aislamiento de una población de MSC a partir de tejido pulposo: la digestión enzimática y el cultivo de explantes24,25. Ambos métodos han reportado el establecimiento exitoso de cultivos primarios sin ninguna diferencia significativa en la cantidad y las propiedades de las DPSC26. En este estudio, nos hemos centrado en el aislamiento de DPSCs por el método del explante27, ya que este método genera DPSCs sin contaminación de las células hematopoyéticas y endoteliales, en comparación con la digestión enzimática que puede resultar en contaminación de fibroblastos28.

<table><tbody><tr><td>placa de cultivo celular de 6 pocillos</td><td>Costar</td><td>3516</td><td>Para cultivo celular</td></tr><tr><td>Tinción de azul alcián</td><td>EZstain kit de tinción de condrocitos, HiMedia</td><td>CCK029</td><td></td></tr><tr><td>rojo de alizarina Tinción S</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>TMS-008</td><td>Tinción osteogénica</td></tr><tr><td>Cóctel de antibióticos</td><td>Himedia</td><td>A002-5X50ML</td><td>Para evitar la contaminación del cultivo</td></tr><tr><td>Ácido ascórbico</td><td>Himedia</td><td>TC094-25G</td><td>Inducción condrogénica</td></tr><tr><td>B27 suplemento</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Para la inducción neural</td></tr><tr><td>bFGF (factor de crecimiento básico de fibroblastos)</td><td>Gibco</td><td>PHG0024</td><td>Para la inducción neuronal</td></tr><tr><td>CD 105</td><td>BD-Pharmingen</td><td>560839</td><td></td></tr><tr><td>CD 35</td><td>Biolegend</td><td>343604</td><td></td></tr><tr><td>CD 45</td><td>Biolegend</td><td>304006</td><td></td></tr><tr><td>CD 73</td><td>Biolegend</td><td>344016</td><td></td></tr><tr><td>CD 90</td><td>Biolegend</td><td>328107</td><td>Caracterización</td></tr><tr><td>cloruro de cetilpiridinio (CPC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1104006</td><td>para la extracción de rojo alizarina</td></tr><tr><td>Dexametasona 21-fosfato disódico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1159-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco</td><td>Himedia</td><td>TS1006-5L</td><td>Para el lavado</td></tr><tr><td>EGF (factor de crecimiento epidérmico)</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td>Para inducción hepática y neural</td></tr><tr><td>Microscopio LED EVOS</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Para&nbsp; imágenes de fluorescencia</td></tr><tr><td>Tinción EZ kit de tinción de condrocitos</td><td>Himedia</td><td>CCK029-1KT Kit de</td><td>tinción de condro</td></tr><tr><td>FACS Citómetro de flujo Canto</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Para célula caracterización</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Para cultivo primario</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td>Para cultivo celular</td></tr><tr><td>G5 suplemento</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td>Para inducción neural</td></tr><tr><td>HGF (factor de crecimiento de hepatocitos)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1404</td><td>Para inducción hepática</td></tr><tr><td>HLA-DR</td><td>Biolegend</td><td>307605</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; TGF-y beta humano; 3</td><td>Peprotech</td><td>#100-36E-10U</td><td></td></tr><tr><td>Insulina-Transferrina-Premezcla de ácido selenoso</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146</td><td>Para la inducción hepática</td></tr><tr><td>Premezcla ITS</td><td>Corning</td><td>354350</td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensayo de captación de LDL</td><td>Abcam</td><td>ab133127</td><td>Para la caracterización hepática</td></tr><tr><td>DMEM de baja glucosa</td><td>Gibco</td><td>11885-084</td><td>Para la inducción</td></tr> <tr><td>hepáticaAnticuerpo MAP2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4403</td><td>Para la caracterización neuronal</td></tr><tr><td>Suplemento de N2</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Para la inducción neuronal</td></tr><tr><td>Medios basales neurales</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>Para la inducción neuronal</td></tr><tr><td>Anticuerpo NFM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4142</td><td>Para la caracterización neuronal</td></tr><tr><td>Nikon Elipse TS100 Microscopio</td><td>Nikon</td><td></td><td>For&nbsp; para imagen de fluorescencia</td></tr><tr><td>Aceite Rojo O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01391-250Ml</td><td>Tinción adipogénica</td></tr><tr><td>Oncostatina M</td><td>R& D Systems</td><td>295-OM-010/CF</td><td>Para inducción hepática</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Tarson</td><td>460090-90MM</td><td>Para corte de tejidos</td></tr><tr><td>Fosfato de potasio monobásico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15655-100G</td><td>Inducción osteogénica</td></tr><tr><td>Propan-2-ol</td><td>Thermo Fisher</td><td>Q13827</td><td>Para aceite Extracción de O</td></tr><tr><td>rojo Solución de piruvato de sodio</td><td>Sigma ciencias de la vida</td><td>S8636-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td>Para el paso de células</td></tr><tr><td>Papel de filtro Whatman</td><td>Merck</td><td>WHA1001325</td><td>papel de filtro</td></tr><tr><td>&alpha;- Medios esenciales mínimos (&alpha;-MEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0643-10X 1L Medios</td><td>para cultivo primario</td></tr><tr><td>&beta;-glicerofosfato hidrato de sal disódica</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422-50G</td><td></td></tr></tbody></table>

cultivo primario de células madre de pulpa dental

Primary Culture of Dental Pulp Stem Cells

La pulpa dental humana representa un prometedor reservorio de células madre multipotente con una competencia regenerativa preeminente que se puede extraer de un diente extraído. El origen ectomesenquimal derivado de la cresta neural de las células madre de la pulpa dental (DPSC) otorga un alto grado de plasticidad que se debe a sus beneficios multifacéticos en la reparación y regeneración de tejidos. Existen varias formas prácticas de recolectar, mantener y proliferar células madre adultas que se están investigando para su uso en medicina regenerativa. En este trabajo, demostramos el establecimiento de un cultivo primario de células madre mesenquimales a partir de tejido dental mediante el método de cultivo de explantes. Las células aisladas tenían forma de huso y se adherían a la superficie plástica de la placa de cultivo. La caracterización fenotípica de estas células madre mostró una expresión positiva de los marcadores de superficie celular recomendados por la Sociedad Internacional de Terapia Celular (ISCT) para MSC, como CD90, CD73 y CD105. Además, la expresión insignificante de marcadores hematopoyéticos (CD45) y endoteliales (CD34), y menos del 2% de expresión de marcadores HLA-DR, confirmaron la homogeneidad y pureza de los cultivos DPSC. Además, ilustramos su multipotencia basada en la diferenciación a linajes adipogénicos, osteogénicos y cronogénicos. También indujimos a estas células a diferenciarse en células de tipo hepático y neuronales mediante la adición de los medios de estimulación correspondientes. Este protocolo optimizado ayudará en el cultivo de una población altamente expandible de células madre mesenquimales para ser utilizada en el laboratorio o para estudios preclínicos. Se pueden incorporar protocolos similares en las configuraciones clínicas para practicar tratamientos basados en DPSC.

Aquí, describimos cómo los investigadores pueden establecer un cultivo puro de DPSC a través del método de explante 6,7,8,9,10 e inducirlos hacia múltiples linajes para establecer la pureza del cultivo para aplicaciones posteriores.
Establecimos un cultivo primario de CPDP a partir del pequeño tejido de pulpa extraído del t...

Este artículo proporciona una guía paso a paso para establecer un cultivo primario de células madre de pulpas dentales utilizando el método de cultivo de explantes y la caracterización de estas células basada en las directrices del ICSCRT. Las células aisladas por este protocolo pueden considerarse como células madre mesenquimales para aplicaciones posteriores.

Cultivo primario de células madre de pulpa dental

The human dental pulp represents a promising multipotent stem cell reservoir with pre-eminent regenerative competence that can be harvested from an ...

Estamos investigando el potencial de las DPSC en aplicaciones basadas en células y sin células para modelos de enfermedades, al tiempo que estudiamos los mecanismos celulares y moleculares implicados en la regeneración de tejidos. Además, estamos explorando el papel de los factores secretores derivados de las células madre en el control del destino de las células madre y la promoción de la regeneración de tejidos. Nuestro enfoque actual se centra en el uso de técnicas de cultivo 3D para obtener una comprensión más profunda de los mecanismos moleculares, los cambios genéticos y epigenéticos asociados con la regeneración de tejidos.Estamos incorporando técnicas avanzadas como la secuenciación de próxima generación, la secuenciación de ARN y la secuenciación de chips para desentrañar los dominios reguladores que gobiernan varios procesos celulares. Utilizando métodos de explantes para aislar DPSC, se puede recolectar de manera eficiente una población homogénea de células madre, libres de otras células como endoteliales y pericitos. Estos tipos de células permanecen en el cultivo celular cuando las DPSC se establecen mediante procedimientos enzimáticos.Nuestra investigación que utiliza las DPSC como modelo celular para el cribado de fármacos y la regeneración de tejidos puede desarrollar terapias novedosas, medicina personalizada avanzada y tener implicaciones de gran alcance en la medicina regenerativa, incluida la reconstrucción craneofacial y la regeneración ósea in vivo después de la extracción dental. Actualmente estamos investigando cómo se pueden usar las DPSC para tratar los defectos óseos, como los huesos largos y los defectos de la pantorrilla. Además, estamos explorando las posibles implicaciones terapéuticas de las moléculas secretoras derivadas de las DPSC en varios modelos de enfermedades, como la neurodegeneración y el glaucoma.

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Investigación

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Biología

El método se describe el aislamiento y caracterización de células humanas de la Pulpa Dental madre (hDPSCs) mediante el uso de cualquiera de los...

Diferenciación de aislamiento, caracterización y comparativo de las células madre derivadas de la Pulpa Dental de los dientes permanentes mediante dos métodos diferentes

Ofrecemos protocolos para la evaluación de las células madre mesenquimales aisladas de la pulpa dental e interacciones de la célula de cáncer de próstata basadas en métodos directos e indirectos de la cultura Co. Condición media y trans-bien membranas son adecuadas analizar actividad paracrina indirecta. Siembra diferencialmente teñidas células juntos es un modelo apropiado para la interacción directa de la célula.

Aislamiento de células madre mesenquimales del tejido de la pulpa y cocultivo con células de cáncer para estudiar sus interacciones

Aquí presentamos un protocolo para aislamiento de células de la pulpa Dental humana y propagación con el fin de evaluar la expresión de la proteína del prión durante el proceso de diferenciación neuronal.

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Este protocolo enfatiza la extracción, el cultivo y la preservación de células madre multipotentes de la pulpa dental a través de la digestión enzimática. Además, demuestra su potencial para diferenciarse en osteoblastos, adipocitos y condrocitos, lo que pone de manifiesto la importancia de la precisión y la consistencia en el proceso.

Aislamiento, cultivo y caracterización de células madre de pulpa dental a partir de dientes humanos deciduos y permanentes

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Cultivo primario de células madre de pulpa dental

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