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DOI: 10.3791/65252-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a two-step protocol for high-quality mitochondria isolation, aimed at enhancing the understanding of mitochondrial function and energy metabolism in various biological contexts, including immune activation and cancer. The method's compatibility with primary cells and tissues allows for broader application in protein discovery and quantification.
Presentamos un protocolo de dos pasos para el aislamiento de mitocondrias de alta calidad que es compatible con el descubrimiento y cuantificación de proteínas a escala de proteoma. Nuestro protocolo no requiere ingeniería genética y, por lo tanto, es adecuado para estudiar las mitocondrias de cualquier célula y tejido primario.
Nuestro laboratorio estudia los cambios en las mitocondrias y el metabolismo energético y cómo estos afectan los procesos saludables y patológicos como la activación inmune, el cáncer o los trastornos metabólicos. Nuestro objetivo es ayudar a desarrollar nuevos tratamientos para una amplia variedad de trastornos proporcionando una mejor comprensión de la función mitocondrial y el metabolismo energético. Herramientas como la proteómica basada en espectrometría de masas, la metabolómica y las pantallas genéticas CRISPR-Cas9 son cada vez más populares para identificar mecanismos moleculares tanto en la función mitocondrial como en el metabolismo energético en tipos y entornos celulares específicos.
A diferencia de otros métodos, nuestro protocolo emplea dos pasos de purificación, centrifugación diferencial y captura inmune para el aislamiento mitocondrial. Esto ofrece varias ventajas, como una mejor eliminación de contaminantes, y también es una herramienta poderosa para identificar nuevas proteínas mitocondriales. Nuestro protocolo proporciona información sobre la composición y, por lo tanto, la función mitocondrial en diferentes tipos de células y entornos.
Esto puede ayudarnos a comprender mejor los procesos normales como la activación inmune, pero también los procesos patológicos como el cáncer. Nos centraremos en los macrófagos mitocondriales. Probaremos cómo cambia la composición de las mitocondrias durante la respuesta inmune para comprender mejor su función.
Nuestros hallazgos podrían conducir a un desarrollo de fármacos con, por ejemplo, efectos antiinflamatorios.
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