Name: Caracterización cuantitativa de las propiedades de la biotinta fotosensible líquida para la impresión basada en el procesamiento digital continuo de la luz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: Aprende a optimizar la impresión 3D DLP en ingeniería de tejidos mediante el control de temperatura y composición de bioinks. Este método mejora la eficiencia y reduce el desperdicio de material en aplicaciones clínicas.

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Los autores agradecen el apoyo brindado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Subvención No. 12125205, 12072316, 12132014) y la Fundación de Ciencias Postdoctorales de China (Subvención No. 2022M712754).

1. Preparación teórica
<ol><li>Defina tres parámetros: absorbancia líquida (Al), absorbancia sólida (As) y tiempo umbral (tT)17.</li>
	<li>Reescribe la curva de trabajo tradicional de Jacobs usando estos tres parámetros17 de acuerdo con la Ecuación 1: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65277/65277eq01.jpg" style="margin: auto;">(Ecuación 1) Aquí, t H es el tiempo de curado de una sola capa, yH es la altura de una sola capa.</li>
</ol>2. Adquisición de parámetros
<ol><li>Mida el tiempo umbral de la biotinta utilizando un reómetro equipado con un elemento para el control de la temperatura.<ol><li>Utilice una fuente de luz de 365 nm para exponer la plataforma de prueba del reómetro y hacer que la intensidad de la luz tenga un cierto valor.</li>
		<li>Configure el reómetro para obtener los datos de los módulos de tiempo durante un período de 300 s y tome cada punto de datos cada 0,3 s a través de las opciones de configuración de tiempo en el software del reómetro. Haga clic en el botón Iniciar prueba del reómetro para iniciar la prueba y, al mismo tiempo, haga clic en el botón Inicio de la fuente de luz.</li>
		<li>Contando desde el inicio de la exposición, cuando los datos del módulo de almacenamiento son iguales a los datos del módulo de pérdida, el tiempo correspondiente se reconoce como el tiempo umbral. Grabar manualmente.</li>
	</ol></li>
	<li>Construir el equipo de prueba de absorbancia como se muestra en el trabajo anterior17. Utilice dos guías de vidrio superior e inferior para sujetar la estructura impresa en forma de anillo (5 mm de diámetro interior, 10 mm de diámetro exterior) con un grosor de 500 μm para que el círculo interior del anillo forme una cámara. Coloque la cámara en el área de prueba del medidor de intensidad de luz y configure la fuente de luz para exponer el área de la cámara. NOTA: La Figura 1 muestra el diagrama esquemático de los resultados de las pruebas fotorreológicas y los resultados del procesamiento de datos, y el equipo de prueba de absorbancia.<ol><li>Mida la intensidad de la luz incidente (Ii) cuando la cámara de prueba no esté llena con material del equipo de prueba de absorbancia leyendo la visualización del medidor de intensidad de luz del equipo de prueba.</li>
		<li>Llene la cámara de ensayo con 10 μL de biotinta.</li>
		<li>Exponga la cámara de prueba con biotinta a la luz UV a 365 nm. Obtenga la intensidad de la luz (Ilh) del equipo de prueba de absorbancia leyendo la visualización del medidor de intensidad de luz del equipo de prueba.</li>
		<li>Obtenga la intensidad de la luz cuando se cura la biotinta (Ish) del equipo de prueba de absorbancia leyendo la pantalla del medidor de intensidad de luz del equipo de prueba cuando el valor ya no cambie. Este valor es la absorbancia sólida, Ish.</li>
		<li>Calcula la absorbancia líquida y la absorbancia sólida usando las ecuaciones 2 y 3: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/65277/65277eq02.jpg" style="margin: auto;">     Ecuación 2 <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/65277/65277eq03.jpg" style="margin: auto;">     Ecuación 3</li>
	</ol></li>
	<li>Obtener la curva de trabajo de Jacobs según los parámetros obtenidos.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65277/65277fig01.jpg"> Figura 1: Resultados de las pruebas y equipos. (A) Diagrama esquemático de los resultados de las pruebas fotorreológicas y los resultados del procesamiento de datos. (B) Equipo de prueba de absorbancia. Esta cifra ha sido modificada con permiso de Li et al.17. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65277/65277fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
3. Configuración continua de parámetros de impresión DLP
<ol><li>Utilice el software DLP para lograr la impresión DLP y el conjunto de parámetros de impresión en el software de la siguiente manera.</li>
	<li>Establezca el tiempo de exposición de la primera capa única como el tiempo umbral (tT) en la configuración de parámetros del software.<ol><li>Calcule el tiempo de exposición del curado de materiales de 10 μmm de espesor de acuerdo con la Ecuación 1 y reste el tiempo umbral para obtener el tiempo de exposición real para curar una sola capa.</li>
	</ol></li>
	<li>Establezca el intervalo de tiempo entre capas adyacentes en 0 s en la configuración de parámetros del software.</li>
	<li>Inicie la impresora haciendo clic en el botón Inicio del software de impresión. Cuando finalice el proceso de impresión, finalice la impresión haciendo clic en el botón Detener del software de impresión.</li>
</ol>

Caracterización cuantitativa de las propiedades de la biotinta para la impresión DLP continua

<ol><li>Berthiaume, F., Maguire, T. J., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+and+regenerative+medicine%3A+history%2C+progress%2C+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Chemical+and+Biomolecular+Engineering%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering and regenerative medicine: history, progress, and challenges.</a> Annual Review of Chemical and Biomolecular Engineering. 2 (1), 403-430 (2011).</li>
<li>Ng, W. L., Chua, C. K., Shen, Y. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Print+me+an+organ%21+Why+we+are+not+there+yet%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Print me an organ! Why we are not there yet.</a> Progress in Polymer Science. 97, 101145(2019).</li>
<li>Sun, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bioprinting+roadmap%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">The bioprinting roadmap.</a> Biofabrication. 12 (2), 022002(2020).</li>
<li>Jiang, T., Munguia-Lopez, J. G., Flores-Torres, S., Kort-Mascort, J., Kinsella, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrusion+bioprinting+of+soft+materials%3A+An+emerging+technique+for+biological+model+fabrication%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Physics+Reviews%22%5BJournal%5D)">Extrusion bioprinting of soft materials: An emerging technique for biological model fabrication.</a> Applied Physics Reviews. 6 (1), 011310(2019).</li>
<li>Ng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L.cControlling+droplet+impact+velocity+and+droplet+volume%3A+Key+factors+to+achieving+high+cell+viability+in+sub-nanoliter+droplet-based+bioprinting%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Bioprinting%22%5BJournal%5D)">L.cControlling droplet impact velocity and droplet volume: Key factors to achieving high cell viability in sub-nanoliter droplet-based bioprinting.</a> International Journal of Bioprinting. 8 (1), 424(2021).</li>
<li>Yu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Printability+during+projection-based+3D+bioprinting%5BTitle%5D)+AND+%22Bioactive+Materials%22%5BJournal%5D)">Printability during projection-based 3D bioprinting.</a> Bioactive Materials. 11, 254-267 (2022).</li>
<li>Zhong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioprinting+of+dual+ECM+scaffolds+encapsulating+limbal+stem%2Fprogenitor+cells+in+active+and+quiescent+statuses%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Bioprinting of dual ECM scaffolds encapsulating limbal stem/progenitor cells in active and quiescent statuses.</a> Biofabrication. 13 (4), (2021).</li>
<li>Huh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinations+of+photoinitiator+and+UV+absorber+for+cell-based+digital+light+processing+%28DLP%29+bioprinting%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Combinations of photoinitiator and UV absorber for cell-based digital light processing (DLP) bioprinting.</a> Biofabrication. 13 (3), (2021).</li>
<li>Saed, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalized+poly+l-lactic+acid+synthesis+and+optimization+of+process+parameters+for+3D+printing+of+porous+scaffolds+via+digital+light+processing+%28DLP%29+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Manufacturing+Processes%22%5BJournal%5D)">Functionalized poly l-lactic acid synthesis and optimization of process parameters for 3D printing of porous scaffolds via digital light processing (DLP) method.</a> Journal of Manufacturing Processes. 56, 550-561 (2020).</li>
<li>Ng, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vat+polymerization-based+bioprinting-process%2C+materials%2C+applications+and+regulatory+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Vat polymerization-based bioprinting-process, materials, applications and regulatory challenges.</a> Biofabrication. 12 (2), 022001(2020).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-fidelity+and+high-efficiency+additive+manufacturing+using+tunable+pre-curing+digital+light+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Additive+Manufacturing%22%5BJournal%5D)">High-fidelity and high-efficiency additive manufacturing using tunable pre-curing digital light processing.</a> Additive Manufacturing. 30, 100889(2019).</li>
<li>Kelly, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volumetric+additive+manufacturing+via+tomographic+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Volumetric additive manufacturing via tomographic reconstruction.</a> Science. 363 (6431), 1075-1079 (2019).</li>
<li>Tumbleston, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+liquid+interface+production+of+3D+objects%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Continuous liquid interface production of 3D objects.</a> Science. 347 (6228), 1349-1352 (2015).</li>
<li>Classens, K., Hafkamp, T., Westbeek, S., Remmers, J. J. C., Weiland, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphysical+modeling+and+optimal+control+of+material+properties+for+photopolymerization+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Additive+Manufacturing%22%5BJournal%5D)">Multiphysical modeling and optimal control of material properties for photopolymerization processes.</a> Additive Manufacturing. 38, 101520(2021).</li>
<li>Gong, H., Beauchamp, M., Perry, S., Woolley, A. T., Nordin, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+approach+to+resin+formulation+for+3D+printed+microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22RSC+Advances%22%5BJournal%5D)">Optical approach to resin formulation for 3D printed microfluidics.</a> RSC Advances. 5 (129), 106621-106632 (2015).</li>
<li>Hofstetter, C., Orman, S., Baudis, S., Stampfl, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+cure+depth+and+cure+degree%2C+a+new+way+to+fully+characterize+novel+photopolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Additive+Manufacturing%22%5BJournal%5D)">Combining cure depth and cure degree, a new way to fully characterize novel photopolymers.</a> Additive Manufacturing. 24, 166-172 (2018).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theoretical+prediction+and+experimental+validation+of+the+digital+light+processing+%28DLP%29+working+curve+for+photocurable+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Additive+Manufacturing%22%5BJournal%5D)">Theoretical prediction and experimental validation of the digital light processing (DLP) working curve for photocurable materials.</a> Additive Manufacturing. 37, 101716(2021).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecularly+cleavable+bioinks+facilitate+high-performance+digital+light+processing-based+bioprinting+of+functional+volumetric+soft+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Molecularly cleavable bioinks facilitate high-performance digital light processing-based bioprinting of functional volumetric soft tissues.</a> Nature Communications. 13 (1), 3317(2022).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Los pasos críticos de este protocolo se describen en la sección 2. Es necesario unificar la intensidad de luz utilizada en la prueba de fotorrología y la intensidad de la luz de impresión en las pruebas reales. El equipo de prueba de absorbancia es la parte más importante. La forma de la cámara de prueba debe ser la misma que el área fotosensible del medidor de intensidad de luz. Debido a las propiedades de los materiales que cambian continuamente durante todo el proceso de exposición a la luz UV, la intensidad de la luz...

La ingeniería de tejidos1 es importante en el campo de la reparación de órganos. Debido a la falta de donación de órganos, algunas enfermedades, como la insuficiencia hepática y la insuficiencia renal, no se pueden curar bien, y muchos pacientes no reciben tratamiento oportuno2. Los organoides con la función requerida de los órganos pueden resolver el problema causado por la falta de donación de órganos. La construcción de organoides depende del progreso y desarrollo de la tecnología de bioimpresión3.
En comparación con la bioimpresión de tipo extrusión4 y la bioimpresión de tipo inyección de tinta5, la velocidad de impresión y la precisión de impresión del método de bioimpresión de procesamiento digital de luz (DLP) son mayores 6,7. El módulo de impresión del método de tipo extrusión es línea por línea, mientras que el módulo de impresión del método de tipo inyección de tinta es punto por punto, que es menos eficiente que el módulo de impresión capa por capa de la bioimpresión DLP. La exposición a la luz ultravioleta (UV) modulada a toda una capa de material para curar una capa en la bioimpresión DLP y el tamaño de la característica de la imagen determinan la precisión de la impresión DLP. Esto hace que la tecnología DLP sea muy eficiente 8,9,10. Debido al sobrecurado de la luz UV, la relación precisa entre el tiempo de curado y el tamaño de impresión es importante para la bioimpresión DLP de alta precisión. Además, la impresión DLP continua es una modificación del método de impresión DLP que puede mejorar en gran medida la eficiencia de impresión11,12,13. Para la impresión DLP continua, las condiciones de impresión precisas son los factores más importantes.
La relación entre el tiempo de curado y el tamaño de impresión se denomina curva de trabajo de Jacobs, que se utiliza ampliamente en la impresión DLP14,15,16. El método tradicional para obtener la relación es exponer el material durante un tiempo determinado y medir el espesor de curado para obtener un punto de datos sobre el tiempo de exposición y el espesor de curado. Repitiendo esta operación al menos cinco veces y ajustando los puntos de datos se obtiene la curva de trabajo de Jacobs. Sin embargo, este método tiene desventajas obvias; necesita consumir mucho material para lograr el curado, los resultados dependen en gran medida de las condiciones de impresión, las biotintas utilizadas en la bioimpresión DLP son caras y raras, y la conformabilidad de las biotintas generalmente no es buena, lo que puede conducir a mediciones inexactas del espesor de curado.
Este artículo proporciona un nuevo método para obtener la relación de curado de acuerdo con las propiedades físicas de la biotinta. El uso de esta teoría puede optimizar la impresión DLP continua. Este método se puede utilizar para obtener la relación de curado de forma más rápida y precisa; por lo tanto, el curado continuo de DLP se puede determinar mejor.

<table><tbody><tr><td>Aladdin azul brillante</td><td>(Shanghái, China).</td><td>6104-59-2&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Taller de creación</td> de <td>software DLP</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Fenil-2,4,6-trimetilbenzoilfosfinato</td><td></td><td>de litio N/A</td><td>LAP; sintetizado</td></tr><tr><td>Fuente de luz</td><td>OmniCure</td><td>https://www.excelitas.com/product-category/omnicure-s-series-lamp-spot-uv-curing-systems</td><td>365 nm</td></tr><tr><td>Diacrilato de polietileno (glicol)</td><td>Sigma-Aldrich 455008</td><td></td><td>PEGDA Mw ~700</td></tr><tr><td>Reómetro&nbsp;</td><td>Anton Paar, Austria</td><td>MCR302</td><td></td></tr></tbody></table>

caracterización cuantitativa de las propiedades de la biotinta fotosensible líquida para la impresión basada en el procesamiento digital continuo de la luz

Quantitative Characterization of Liquid Photosensitive Bioink Properties for Continuous Digital Light Processing Based Printing

La fabricación precisa de biotintas es un requisito previo para la ingeniería de tejidos; la curva de trabajo de Jacobs es la herramienta para determinar los parámetros de impresión precisos del procesamiento digital de luz (DLP). Sin embargo, la adquisición de curvas de trabajo desperdicia materiales y requiere una alta conformabilidad de materiales, que no son adecuados para biomateriales. Además, la reducción de la actividad celular debido a exposiciones múltiples y la falla de la formación estructural debido al posicionamiento repetido son problemas inevitables en la bioimpresión DLP convencional. Este trabajo introduce un nuevo método para obtener la curva de trabajo y el proceso de mejora de la tecnología de impresión DLP continua basada en dicha curva de trabajo. Este método de obtención de la curva de trabajo se basa en la absorbancia y las propiedades fotorreológicas de los biomateriales, que no dependen de la conformabilidad de los biomateriales. El proceso de impresión DLP continuo, obtenido al mejorar el proceso de impresión mediante el análisis de la curva de trabajo, aumenta la eficiencia de impresión más de diez veces y mejora en gran medida la actividad y la funcionalidad de las células, lo que es beneficioso para el desarrollo de la ingeniería de tejidos.

Este artículo muestra un nuevo método para obtener parámetros de curado e introduce una nueva forma de lograr la impresión DLP continua, demostrando la eficiencia de este método en la determinación de la curva de trabajo.
Utilizamos tres materiales diferentes en la impresión DLP para verificar la precisión de la curva de trabajo teórica obtenida por el método introducido en este artículo. Los materiales son 20% (v/v) de polietileno (glicol) diacrilato (PEGDA), 0,5% (p/v) de litio fenil-2,4,6-t...

Este estudio utiliza la temperatura y la composición del material para controlar las propiedades de límite elástico de los fluidos de límite fluvial. El estado sólido de la tinta puede proteger la estructura de impresión, y el estado líquido puede llenar continuamente la posición de impresión, realizando la impresión 3D de procesamiento de luz digital de biotintas extremadamente suaves.

Caracterización cuantitativa de las propiedades de la biotinta fotosensible líquida para la impresión basada en el procesamiento digital continuo de la luz

Precise printing fabrication of bioinks is a prerequisite for tissue engineering; the Jacobs working curve is the tool to determine the precise printing ...

Mi investigación consiste principalmente en la bioimpresión 3D DLP y la ingeniería de tejidos. Tratamos de optimizar y mejorar el proceso de impresión DLP y la teoría de fórmulas, para que el andamio de ingeniería de tejidos impresos pueda satisfacer mejor las necesidades reales de aplicación clínica. Las condiciones de impresión de los materiales fotocurables existentes se basan en experimentos manuales y se obtienen alimentando los datos de múltiples experimentos de realización.Tales experimentos desperdician material y reducen la eficiencia de impresión. Construí una curva de trabajo teórica y determiné las pirámides de impresión DLP solo en función de las propiedades físicas del material. Se propone que el mejor concepto de dinámica se aplique en la impresión DLP para realizar el formato DLP de estructuras dimensionales complejas de materiales extremadamente blandos.Este método puede mejorar la eficiencia de la determinación de las condiciones de impresión de los materiales fotocurables. Esta tecnología puede proporcionar apoyo técnico para la investigación y el desarrollo de materiales fotocurables y la impresión precisa de estos materiales.

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Research

Investigación

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Bioengineering

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Crear transitoria poros de la membrana de células utilizando una impresora de inyección de tinta estándar

Un método para el montaje de gradientes adhesivas y soluble en una cámara de microscopía para estudios en vivo de células de migración se describe. El entorno de ingeniería combina superficies antiincrustantes y pistas adhesivas con gradientes de solución y por lo tanto permite determinar la importancia relativa de las señales de orientación.

Creación de degradados adhesivas y soluble para la migración celular con imágenes de microscopía de fluorescencia

Una bioimpresora cartesiana fue diseñada y fabricada para permitir la deposición de múltiples materiales en geometrías precisas y reproducibles, al tiempo que permite el control de factores ambientales. Utilizando la bioimpresora tridimensional, se pueden imprimir y reproducir fácilmente construcciones complejas y viables.

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Se describe un conjunto de protocolos que en conjunto proporcionan un bioink hidrogel imitando tejido con el que construcciones de tejido 3-D funcionales y viables se pueden bioprinted para su uso en aplicaciones de cribado in vitro.

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