Detección cuantitativa de enlaces cruzados ADN-proteína y sus modificaciones postraduccionales

El presente protocolo destaca un método modificado para detectar y cuantificar los enlaces cruzados ADN-proteína (DPCs) y sus modificaciones postraduccionales (PTMs), incluyendo la ubiquitilación, la SUMOilación y la ADP-ribosilación inducida por inhibidores de la topoisomerasa y por formaldehído, permitiendo así el estudio de la formación y reparación de DPCs y sus PTMs.

Bueno, mi investigación se centra en la reparación del daño en el ADN. En particular, la reparación del daño en el ADN inducido por inhibidores de la topoisomerasa, por inhibidores de PARP y por aldehídos. Estoy tratando de ilustrar los mecanismos moleculares por los cuales las células reparan los enlaces cruzados de proteínas del ADN inducidos por estos fármacos.

Los avances recientes en la reparación de los enlaces cruzados de proteínas del ADN incluyen la identificación de nuevas vías de reparación para los enlaces cruzados de proteínas del ADN y los mecanismos de modificación posteriores al trasplante que regulan estas vías de reparación. El ensayo In Vivo Complex of Enzyme y el ensayo Rapid Approach to DNA Adduct Recovery son los métodos más utilizados para medir los enlaces cruzados de proteínas de ADN y ciertos enlaces cruzados de proteínas de ADN, como los enlaces cruzados de proteínas de ADN de topoisomerasa, se pueden detectar mediante inmunofluorescencia utilizando un anticuerpo específico. Uno de los mayores retos es el estudio del papel de las modificaciones postraduccionales en la reparación de los enlaces cruzados de proteínas del ADN.

Ha sido muy difícil enriquecer y detectar enlaces cruzados de proteínas de ADN conjugadas modificadoras postraduccionales debido a su muy baja abundancia. Este protocolo proporciona detalles de la detección de una cuantificación de enlaces cruzados de proteínas de ADN desubbiquitiladas, SUMOiladas y ADP-ribosiladas, lo que permite a los investigadores estudiar la cinética y la formación de estas modificaciones en la reparación de enlaces de proteínas de ADN de diferentes fuentes. Otros protocolos para la detección de enlaces cruzados de proteínas de ADN no contienen pasos que describan la detección de sus modificaciones postraduccionales.

Mientras que este protocolo proporciona detalles como las concentraciones de fármacos y la duración del tiempo para inducir las modificaciones y los métodos para separar y detectar las modificaciones, así como los métodos para estabilizar las modificaciones. Por lo tanto, se han identificado varias modificaciones posteriores al trasplante en la reparación de los enlaces cruzados de proteínas del ADN. La forma en que coordinan la reparación sigue siendo en gran medida desconocida.

Por lo tanto, como resultado, la interacción entre estas modificaciones justifica una mayor investigación.