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Aislamiento de núcleos de células progenitoras cardíacas de ratón para epigenoma y perfil de expr...
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Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Nuclei Isolation from Mouse Cardiac Progenitor Cells for Epigenome and Gene Expression Profiling at Single-Cell Resolution

Aislamiento de núcleos de células progenitoras cardíacas de ratón para epigenoma y perfil de expresión génica a resolución de una sola célula

Full Text
4,059 Views
10:03 min
May 12, 2023

DOI: 10.3791/65328-v

Stephanie Ibrahim1, Catherine Robert2, Camille Humbert2, Clotilde Ferreira1, Gwenaëlle Collod2, Sonia Stefanovic1

1Center for Cardiovascular Disease & Nutrition, U1263,Aix-Marseille University, 2Marseille Medical Genetics, U1251,Aix-Marseille University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Aquí, presentamos un protocolo que describe la preparación de los núcleos celulares. Después de la microdisección y la disociación enzimática del tejido cardíaco en células individuales, las células progenitoras se congelaron, seguidas del aislamiento de células viables puras, que se utilizaron para la secuenciación de ARN de un solo núcleo y el ensayo de núcleo único para la cromatina accesible a transposasa con análisis de secuenciación de alto rendimiento.

El objetivo principal de este protocolo es estudiar la interacción de factores genéticos y ambientales en el contexto del desarrollo del corazón y su contribución a los defectos cardíacos congénitos. Los enfoques de núcleos únicos, como el RNA-seq de núcleos únicos y los núcleos únicos atáxicos, están emergiendo como métodos clave para estudiar la heterogeneidad celular en la salud y la enfermedad durante el desarrollo del corazón. Un paso limitante de estos experimentos es que toda la muestra debe ejecutarse simultáneamente.

Si bien trabajar con todas las condiciones experimentales, recolectar material lo suficientemente fresco para todas las condiciones simultáneamente podría ser un desafío. Aunque ha habido un progreso significativo en el campo de la célula única en los últimos años, la principal dificultad es el procesamiento de muestras libres. Evitar la dificultad es extremadamente beneficioso para identificar el mecanismo molecular subyacente a los defectos congénitos de la cardiopatía congénita.

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Developmental Biology Issue 195 Chromatin accessibility gene expression profiling snRNA-seq and snATAC-seq cardiac progenitor cells gene regulation

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