Un conjunto de técnicas de cribado para una visión general rápida de la función de los neutrófilos
9 de febrero de 2024
Este protocolo presenta un conjunto de ensayos funcionales de neutrófilos que se utilizarán como método de cribado para cubrir las funciones de diferentes vías de señalización. El protocolo incluye una evaluación inicial y sencilla de la viabilidad celular, la pureza, la producción de especies reactivas de oxígeno, la migración en tiempo real, la fagocitosis y una sugerencia preliminar de trampas extracelulares de neutrófilos.
El protocolo de detección NeutroFun proporciona un grupo de pruebas funcionales que utilizan productos químicos de bajo costo y se pueden realizar en un solo experimento a partir de neutrófilos frescos. Esto permite una evaluación preliminar de algunas de las principales funciones de los neutrófilos para guiar estudios de seguimiento más laboriosos y costosos. La investigación de neutrófilos emplea varias condiciones de modulación.
Como citoquinas, péptidos, productos microbianos y estímulos físicos. Además, analiza citometría de flujo, multiómica, dispositivos microfluídicos e inmunocitoquímica. La amplia gama de afecciones y ensayos utilizados en combinación hace que el flujo de trabajo de la investigación de neutrófilos sea largo, laborioso y costoso.
Normalmente, en estas reducciones, el número de condiciones probadas o el número de pruebas realizadas, los métodos actuales del estado del arte requieren amplios configurables, muchas celdas y largos procedimientos de preparación. Nuestro protocolo NeutroFun Screen ofrece un enfoque más rápido y rentable para evaluar la funcionalidad celular en comparación con otros métodos. Esto se logra mediante la combinación de varios análisis dentro del protocolo, manteniendo la precisión y la exhaustividad de los resultados.
Dos investigadores realizaron este flujo de trabajo simultáneamente para obtener una visión general rápida de la función de los neutrófilos. El investigador uno aísla las PMN, ajusta la concentración e incuba los sistemas de activación, mientras que el investigador dos prepara los materiales para los casos posteriores. A continuación, el investigador uno realiza ensayos de fagocitosis y NBT colorimétricos, mientras que el investigador dos realiza pruebas de migración en tiempo real y de deslizamiento NBT.
Resumen
El protocolo de cribado NeutroFun ofrece un conjunto de pruebas funcionales para neutrófilos, utilizando productos químicos de bajo costo en un solo experimento. Este protocolo facilita una evaluación preliminar de las funciones clave de los neutrófilos, lo que ayuda en el diseño de estudios más extensos.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Biología de los neutrófilos
- Señalización celular
- Inmunología
Antecedentes
- Los neutrófilos desempeñan un papel crucial en la respuesta inmunitaria.
- La investigación a menudo implica diversas condiciones de modulación.
- Los ensayos tradicionales pueden ser intensivos en mano de obra y costosos.
- El protocolo NeutroFun tiene como objetivo optimizar este proceso.
Objetivo del estudio
- Proporcionar un método de cribado rentable para las funciones de los neutrófilos.
- Evaluar la viabilidad celular, la pureza y la producción de especies reactivas de oxígeno.
- Evaluar la migración y la fagocitosis en tiempo real.
Métodos Utilizados
- Ensayos funcionales para neutrófilos
- Evaluación de viabilidad y pureza celular
- Medición de la producción de especies reactivas de oxígeno
- Evaluación de la migración y la fagocitosis
Resultados principales
- La evaluación inicial de las funciones de los neutrófilos fue exitosa.
- Los productos químicos de bajo costo permitieron pruebas eficientes.
- Los resultados orientan estudios posteriores más detallados.
- El protocolo soporta diversas condiciones experimentales.
Conclusiones
- El protocolo NeutroFun simplifica los ensayos funcionales de neutrófilos.
- Permite evaluaciones preliminares antes de estudios extensos.
- Este enfoque puede mejorar la eficiencia de la investigación sobre neutrófilos.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
El cribado rápido y multiplexado de las funciones de los neutrófilos es fundamental para el descubrimiento temprano de fármacos en inmunología, ya que permite probar hipótesis de manera eficiente y reducir los riesgos mecanicistas. El protocolo NeutroFun Screen ofrece una visión general completa y rentable de la viabilidad de los neutrófilos, la producción de ERO, la migración, la fagocitosis y la formación de NET, apoyando la selección y priorización de carteras. Este enfoque maximiza la utilidad de las muestras y acelera la toma de decisiones en puntos críticos del descubrimiento.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Permite la interrogación rápida de las vías funcionales de los neutrófilos bajo diversas condiciones moduladoras.
- Apoya la reducción de riesgos biológicos al proporcionar lecturas funcionales multiparamétricas a partir de una sola muestra.
- Facilita la confianza predictiva en la selección de dianas y la validación mecanicista de moduladores de la inmunidad innata.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Prepara sistemas validados de neutrófilos para cribado de compuestos y ensayos funcionales posteriores.
- Normaliza las mediciones de viabilidad, ERO, migración y fagocitosis para el desarrollo reproducible de ensayos.
- Permite el cribado escalable y eficiente en costos de múltiples condiciones o compuestos en paralelo.
Investigación Traductiva y Preclínica
- Alinea los resultados funcionales de los neutrófilos con fenotipos inmunitarios relevantes para la enfermedad, facilitando la exploración de biomarcadores traslacionales.
- Proporciona continuidad desde el descubrimiento inicial hasta la validación preclínica, al preservar las células para análisis ómicos o estudios avanzados.
- Apoya decisiones de avance ajustadas al riesgo mediante la integración de datos funcionales y mecanicistas.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
La prueba NeutroFun se sitúa en la interfaz entre el descubrimiento temprano y la identificación de compuestos activos, permitiendo un perfilado funcional rápido antes de los estudios preclínicos intensivos en recursos.
- Biología del Descubrimiento: Apoya la comprobación de hipótesis y la aclaración de vías mediante la multiplexación de funciones clave de los neutrófilos.
- Selección: Proporciona resultados cuantitativos y reproducibles sobre viabilidad, ERO, migración y fagocitosis.
- Análisis: Ofrece comparación estadística de las respuestas funcionales entre diferentes condiciones y estímulos.
- Investigación Traducional: Conserva la muestra para análisis omicos posteriores o alineación de biomarcadores cuando sea necesario.
- Reutilización Empresarial: Ofrece un protocolo flexible y adaptable para diversas líneas de I+D en inmunología.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva y reduce la ambigüedad mecanicista en la validación de dianas inmunitarias innatas.
- Valor operativo: Optimiza los flujos de trabajo, reduce costos y mejora la reproducibilidad entre equipos.
- Valor estratégico: Permite tomar mejores decisiones de avance o interrupción y una mayor eficiencia del capital al centrar los estudios posteriores en las líneas prometedoras.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo y el avance de activos en inmunología.
Consideraciones de Implementación
- Requiere experiencia en el aislamiento de neutrófilos, ensayos funcionales y microscopía.
- Necesita acceso a equipos básicos de cultivo celular, espectrofotometría y análisis de migración en tiempo real.
- Exige la estandarización entre equipos de las condiciones del ensayo y la interpretación de los datos.
- Adaptable a los recursos disponibles y a las limitaciones de las muestras en diferentes laboratorios.
- Limitado por la corta vida útil y la variabilidad de las muestras primarias de neutrófilos.
Preguntas frecuentes sobre biofármacos
Chapters in this video
0:00
Introduction
2:00
Neutrophil Isolation and Activation
4:52
Nitrotetrazolium Blue Chloride (NBT) Assay for Evaluating ROS Production
7:49
Neutrophil Phagocytosis Assay
9:45
Real‐Time Polymorphonuclear Neutrophils (PMN) Chemotaxis Assay
11:09
Neutrophil Extracellular Trap (NET) Suggestive Assay
