Generación de podocitos derivados de pacientes a partir de biopsias de piel

Este manuscrito describe un protocolo de dos pasos para generar podocitos específicos del paciente a partir de fibroblastos dérmicos a través de la reprogramación episomal en células madre pluripotentes inducidas por humanos (hiPSC) y la posterior diferenciación en podocitos.

Describimos un protocolo para generar podocitos humanos mediante la reprogramación episomal de fibroblastos dérmicos en células madre pluripotentes inducidas por humanos. Estas células se parecen mucho mejor a los podocitos in vivo que a los podocitos inmortalizados en términos de procesos alimenticios de podocitos y expresión del marcador específico de podocitos. Los podocitos son células terminalmente diferenciadas.

Por lo tanto, estas células ya no proliferan y el análisis primario de podocitos en cultivo celular es limitado. A pesar de que el problema del número limitado de células se superó mediante el uso de podocitos inmortalizados condicionalmente, estos podocitos presentan un fenotipo y un comportamiento desdiferenciados, lo que cuestiona su uso en la investigación básica. Con la ayuda de células madre pluripotentes inducidas, los podocitos se pueden generar in vitro en un número de células casi ilimitado con una morfología típica de podocitos que incluye distintos procesos alimentarios y expresión de marcadores específicos de podocitos.

Cuando se utilizan las células madre específicas del paciente para diferenciarse en podocitos, es posible estudiar las alteraciones específicas de la enfermedad de la célula ex vivo. En caso de que la biopsia de piel inicial se tomara de un paciente con una enfermedad genética podocitos. Los podocitos generados con nuestro protocolo son células enfermas personalizadas portadoras de la mutación del paciente.

Por lo tanto, estas células representan un modelo ex vivo mejorado para estudiar enfermedades podocíticas y posibles sustancias terapéuticas en un enfoque individualizado.