Name: Ensayos de envejecimiento conductual y vida útil de alto rendimiento con la máquina Lifespan (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprende a realizar ensayos de envejecimiento conductual y análisis de vida útil automatizados con la Lifespan Machine utilizando C. elegans. Este método permite recopilar datos de comportamiento de grandes poblaciones de nematodos con alta frecuencia de adquisición de imágenes.

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Agradecemos a Julian Ceron y Jeremy Vicencio (IDIBELL Barcelona) por producir el alelo rpb-2(cer135). Este proyecto ha sido financiado por el Consejo Europeo de Investigación (ERC) en el marco del programa de investigación e innovación Horizonte 2020 de la Unión Europea (Acuerdo de Subvención n.º 852201), el Ministerio de Economía, Industria y Competitividad (MEIC) a la asociación EMBL, el Centro de Excelencia Severo Ochoa (CEX2020-001049-S, MCIN/AEI /10.13039/501100011033), el Programa CERCA/Generalitat de Catalunya, el premio MEIC Excelencia BFU2017-88615-P, y un premio de la Fundación Glenn para la Investigación Médica.

Desvelando los misterios del envejecimiento: Lifespan Machine para obtener información de alto rendimiento

<ol><li>Harman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+process%3A+Major+risk+factor+for+disease+and+death%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The aging process: Major risk factor for disease and death.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88 (12), 5360-5363 (1991).</li>
<li>Vaupel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodemography+of+human+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Biodemography of human ageing.</a> Nature. 464 (7288), 536-542 (2010).</li>
<li>Mair, W., Goymer, P., Pletcher, S. D., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demography+of+dietary+restriction+and+death+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Demography of dietary restriction and death in Drosophila.</a> Science. 301 (5640), 1731-1733 (2003).</li>
<li>Petrascheck, M., Miller, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+analysis+of+lifespan+experiment+reproducibility%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Computational analysis of lifespan experiment reproducibility.</a> Frontiers in Genetics. 8, 92(2017).</li>
<li>Lucanic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+genetic+background+and+experimental+reproducibility+on+identifying+chemical+compounds+with+robust+longevity+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Impact of genetic background and experimental reproducibility on identifying chemical compounds with robust longevity effects.</a> Nature Communications. 8 (1), 14256(2017).</li>
<li>Banse, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+lifespan+determination+across+Caenorhabditis+strains+and+species+reveals+assay-specific+effects+of+chemical+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Geroscience%22%5BJournal%5D)">Automated lifespan determination across Caenorhabditis strains and species reveals assay-specific effects of chemical interventions.</a> Geroscience. 41 (6), 945-960 (2019).</li>
<li>Herndon, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+and+genetic+factors+influence+tissue-specific+decline+in+ageing+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Stochastic and genetic factors influence tissue-specific decline in ageing C. elegans.</a> Nature. 419 (6909), 808-814 (2002).</li>
<li>Kirkwood, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+accounts+for+the+wide+variation+in+life+span+of+genetically+identical+organisms+reared+in+a+constant+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">What accounts for the wide variation in life span of genetically identical organisms reared in a constant environment.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 126 (3), 439-443 (2005).</li>
<li>Stroustrup, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+temporal+scaling+of+Caenorhabditis+elegans+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The temporal scaling of Caenorhabditis elegans ageing.</a> Nature. 530 (7588), 103-107 (2016).</li>
<li>Hamilton, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+for+longevity+genes+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans.</a> Genes & Development. 19 (13), 1544-1555 (2005).</li>
<li>Lee, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+identifies+a+critical+role+for+mitochondria+in+C.+elegans+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity.</a> Nature Genetics. 33 (1), 40-48 (2003).</li>
<li>Cornwell, A. B., Llop, J. R., Salzman, P., Thakar, J., Samuelson, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+replica+set+method%3A+A+high-throughput+approach+to+quantitatively+measure+Caenorhabditis+elegans+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">The replica set method: A high-throughput approach to quantitatively measure Caenorhabditis elegans lifespan.</a> Journal of Visualized Experiments. (136), e57819(2018).</li>
<li>Stroustrup, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Caenorhabditis+elegans+lifespan+machine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">The Caenorhabditis elegans lifespan machine.</a> Nature Methods. 10 (7), 665-670 (2013).</li>
<li>Xian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WormFarm%3A+A+quantitative+control+and+measurement+device+toward+automated+Caenorhabditis+elegans+aging+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">WormFarm: A quantitative control and measurement device toward automated Caenorhabditis elegans aging analysis.</a> Aging Cell. 12 (3), 398-409 (2013).</li>
<li>Churgin, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+in+a+microfabricated+device+reveals+variation+in+behavioral+decline+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Longitudinal imaging of Caenorhabditis elegans in a microfabricated device reveals variation in behavioral decline during aging.</a> Elife. 6, 26652(2017).</li>
<li>Hulme, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifespan-on-a-chip%3A+Microfluidic+chambers+for+performing+lifelong+observation+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Lifespan-on-a-chip: Microfluidic chambers for performing lifelong observation of C. elegans.</a> Lab on a Chip. 10 (5), 589-597 (2010).</li>
<li>Kerr, R. A., Roux, A. E., Goudeau, J. F., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C.+elegans+observatory%3A+High-throughput+exploration+of+behavioral+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Aging%22%5BJournal%5D)">The C. elegans observatory: High-throughput exploration of behavioral aging.</a> Frontiers in Aging. 3, 932696(2022).</li>
<li>Javer, A., Ripoll-Sánchez, L., Brown, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Powerful+and+interpretable+behavioural+features+for+quantitative+phenotyping+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Powerful and interpretable behavioural features for quantitative phenotyping of Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 373 (1758), 20170375(2018).</li>
<li>Miller, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+interaction+with+temperature+is+an+important+determinant+of+nematode+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Genetic interaction with temperature is an important determinant of nematode longevity.</a> Aging Cell. 16 (6), 1425-1429 (2017).</li>
<li>Bansal, A., Zhu, L. J., Yen, K., Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uncoupling+lifespan+and+healthspan+in+Caenorhabditis+elegans+longevity+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Uncoupling lifespan and healthspan in Caenorhabditis elegans longevity mutants.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (3), E277-E286 (2015).</li>
<li>Huang, C., Xiong, C., Kornfeld, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+age-related+changes+of+physiological+processes+that+predict+lifespan+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Measurements of age-related changes of physiological processes that predict lifespan of Caenorhabditis elegans.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (21), 8084-8089 (2004).</li>
<li>Garigan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans%3A+A+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: A role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> Genetics. 161 (3), 1101-1112 (2002).</li>
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<li>Zhang, L., Ward, J. D., Cheng, Z., Dernburg, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+auxin-inducible+degradation+%28AID%29+system+enables+versatile+conditional+protein+depletion+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The auxin-inducible degradation (AID) system enables versatile conditional protein depletion in C. elegans.</a> Development. 142 (24), 4374-4384 (2015).</li>
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<li>Banse, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+lifespan+determination+across+Caenorhabditis+strains+and+species+reveals+assay-specific+effects+of+chemical+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Geroscience%22%5BJournal%5D)">Automated lifespan determination across Caenorhabditis strains and species reveals assay-specific effects of chemical interventions.</a> Geroscience. 41 (6), 945-960 (2019).</li>
<li>Swindell, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+failure+time+models+provide+a+useful+statistical+framework+for+aging+research%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Accelerated failure time models provide a useful statistical framework for aging research.</a> Experimental Gerontology. 44 (3), 190-200 (2009).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses contrapuestos.

Aquí, proporcionamos un protocolo detallado y accesible para realizar un experimento utilizando la última versión de Lifespan Machine. Hemos demostrado que el paso crítico para lograr curvas de supervivencia bien resueltas es la exclusión manual de objetos que no sean gusanos durante la adquisición posterior a la imagen. La anotación manual del tiempo de muerte tiene un pequeño efecto en la forma general de las curvas de supervivencia, lo que demuestra que la estimación totalmente automatizada del tiempo de muerte es efi...

El envejecimiento es un proceso complejo y multifacético caracterizado por una disminución de la función fisiológica de un organismo, lo que conduce a un aumento del riesgo de enfermedad y muerte a lo largo del tiempo1. La esperanza de vida, medida como el tiempo que transcurre desde el nacimiento o el inicio de la edad adulta hasta la muerte, proporciona un resultado inequívoco del envejecimiento2 y un indicador indirecto pero rigurosamente cuantitativo para medir la tasa relativa de envejecimiento entre poblaciones3. Los estudios sobre el envejecimiento a menudo dependen de mediciones precisas de la esperanza de vida, similares a los ensayos clínicos, para comparar los resultados entre una población expuesta a una intervención y un grupo de control no expuesto. Desafortunadamente, los problemas de reproducibilidad impregnan la investigación sobre el envejecimiento, a veces debido a experimentos estadísticamente poco potentes4 y, a menudo, debido a la sensibilidad inherente de los ensayos de vida útil a las variaciones sutiles en el medio ambiente5. Los experimentos robustos requieren múltiples réplicas de grandes poblaciones, y este proceso se beneficia particularmente de la escalabilidad experimental que ofrece la automatización6.
Las rigurosas exigencias de los ensayos de vida útil se originan en la imprevisibilidad del propio proceso de envejecimiento. Los individuos isogénicos alojados en ambientes idénticos muestran diferentes tiempos de muerte y tasas de deterioro fisiológico7, lo que sugiere que la esperanza de vida implica un alto grado de estocasticidad 7,8. Por lo tanto, se requiere que las grandes poblaciones midan los cambios cuantitativos en el proceso de envejecimiento, como los cambios en la esperanza de vida media o máxima, y que superen los sesgos derivados de la variabilidad individual. Además, la capacidad de realizar ensayos de vida útil de alto rendimiento es crucial para respaldar los estudios de las formas de las curvas de supervivencia y los modelos de la dinámica del envejecimiento9.
El nematodo Caenorhabditis elegans es un modelo invaluable para la investigación del envejecimiento debido a su corta vida útil, trazabilidad genética y rápido tiempo de generación, lo que subraya su idoneidad para ensayos de envejecimiento y vida útil de alto rendimiento. Tradicionalmente, la esperanza de vida en C. El elegans se ha medido siguiendo una pequeña población sincronizada de unos 50-100 animales a lo largo del tiempo en medios sólidos y anotando el tiempo de las muertes individuales. A medida que los animales envejecen y pierden movilidad, la puntuación manual de los tiempos de muerte requiere pinchar individualmente a los animales y comprobar si hay pequeños movimientos de la cabeza o la cola. Este suele ser un proceso tedioso y laborioso, aunque se han hecho esfuerzos para acelerarlo 10,11,12. Es importante destacar que la lentitud de los procesos experimentales dificulta el progreso en nuestra comprensión del envejecimiento y la eficacia de las intervenciones probadas.
Para satisfacer las demandas de datos cuantitativos de la investigación sobre el envejecimiento, se han desarrollado muchas tecnologías para automatizar la recopilación de datos, incluida una notable gama de enfoques, desde cámaras microfluídicas hasta escáneres planos 13,14,15,16,17,18. El LSM se diferencia de otros métodos en su amplia optimización para la recopilación de datos de vida útil altamente precisos y exactos, lo que se logra mediante el desarrollo de protocolos de calibración de equipos cuidadosos combinados con un amplio paquete de software que permite a los usuarios validar, corregir y refinar los análisis automatizados13. Aunque el software puede, en principio, aplicarse a diversas modalidades de obtención de imágenes, en la práctica, la mayoría de los usuarios utilizan escáneres planos modificados para permitir un control preciso de la temperatura y la humedad ambientales, factores de importancia crítica debido a su importante efecto en la vida útil19. El LSM toma imágenes de nematodos cada 20 minutos en intervalos que van desde días hasta meses, dependiendo de las condiciones ambientales y el genotipo. Los datos producidos tienen una resolución temporal mucho mayor en comparación con los datos de los ensayos manuales, y las imágenes recopiladas proporcionan un registro visual permanente de la posición del nematodo a lo largo de la vida. Utilizando métodos de aprendizaje automático, los tiempos de muerte se asignan automáticamente a cada individuo. Estos resultados se pueden validar rápida y manualmente utilizando un software cliente llamado "Worm Browser". Como resultado de su hardware y software, el LSM puede generar curvas de supervivencia que son estadísticamente indistinguibles de la puntuación manual de muertes a manos de investigadores experimentados, con la ventaja añadida de una menor carga de trabajo y una mayor escalabilidad13.
La última versión del LSM también permite el estudio del envejecimiento conductual mediante la recopilación de datos morfológicos y conductuales a lo largo de la vida del nematodo y su informe junto con la vida útil de cada individuo. En particular, el LSM captura el tiempo de cese de movimiento vigoroso (VMC) de cada animal, un punto de referencia que a menudo se usa para cuantificar la "duración de la salud" de un individuo a diferencia de su esperanza de vida. Al recopilar simultáneamente datos sobre la esperanza de vida y el envejecimiento conductual, el LSM apoya el estudio de intervenciones que pueden tener efectos diferenciales en diferentes resultados fenotípicos del envejecimiento20. Se puede utilizar una variedad de fenotipos macroscópicamente observables para estudiar el envejecimiento conductual, como el movimiento corporal o el bombeo faríngeo21, la integridad de los tejidos22 y la velocidad de movimiento o el giro inducido por estímulos17. Las comparaciones entre diferentes fenotipos de envejecimiento pueden apoyar el análisis de la estructura causal de los procesos de envejecimiento. Por ejemplo, la comparación entre VMC y la esperanza de vida se utilizó recientemente para caracterizar dos procesos de envejecimiento distintos en C. elegans23.
Si bien se desarrolló inicialmente para medir la esperanza de vida en C. elegans, el LSM apoya la recopilación de datos de supervivencia y comportamiento de una variedad de especies de nematodos, incluido C. briggsae, C. tropicalis, C. japonica, C. brenneri, y P. Pacífico23. La tecnología facilita el estudio del efecto de las intervenciones biológicas y ambientales en la esperanza de vida, la resistencia al estrés y la resistencia a patógenos, y puede acoplarse a herramientas experimentales como ensayos dirigidos de ARN de interferencia o sistemas de degradación de proteínas inducibles por auxinas. Hasta la fecha, se ha utilizado en la literatura científica para una amplia gama de aplicaciones 6,24,25,26,27,28,29,30.
Aquí, describimos un protocolo paso a paso para realizar un experimento de Lifespan Machine utilizando placas de agar, desde las etapas iniciales de la configuración experimental hasta la salida de las curvas de supervivencia resultantes. Una característica distintiva del LSM es que el esfuerzo se concentra en gran medida en la parte inicial, lo que significa que la mayor parte del tiempo del investigador se dedica a la configuración experimental y, en menor medida, durante la adquisición posterior a la imagen. La recopilación de datos está completamente automatizada durante toda la duración del experimento y permite al investigador tener una experiencia de "manos libres". Los pasos descritos aquí son comunes a muchos tipos diferentes de ensayos de supervivencia: se realiza la misma configuración experimental para los ensayos de esperanza de vida, termotolerancia, estrés oxidativo y patogénesis. En la sección de resultados representativos, discutimos un subconjunto de datos de un manuscrito publicado recientemente para ilustrar la efectividad de la canalización de análisis y resaltar los pasos más importantes durante el análisis de imágenes23.

<table><tbody><tr><td>1-Naftalenoacético&nbsp; ácido (Auxina)</td><td>Sigma</td><td>N0640</td><td>Solubilizar Auxina en hidróxido de potasio 1M y añadir en agar fundido</td></tr><tr><td>5-fluoro-2-desoxiuridina (FUDR)</td><td>Sigma</td><td>F0503</td><td>27.5 &mu; Se utilizaron g/mL de FUDR para eliminar la progenie de las poblaciones de bacterias inactivadas por los rayos UV</td></tr><tr><td>Limpiador de</td><td>cristales Kristal-M</td><td>QB-KRISTAL-M125ml</td><td></td></tr><tr><td>Tratamiento hidrofóbico antivaho para vidrios</td><td>Rain-X Scheibenreiniger&nbsp;</td><td>C. 059140</td><td></td></tr><tr><td>Caucho mate</td><td>Crafstman</td><td></td> local <td>Cortado en una lámina de caucho EPDM de alta resistencia</td></tr><tr><td>Vidrio para escáner Proveedor</td><td></td><td></td> local de hardware <td>Hoja de vidrio de 9" x 11,5" pulgadas</td></tr><tr><td>Placas de escáner</td> Ciencias <td>de la Vida</td><td>351006</td><td>50 mm x 9 mm, placa de Petri de poliestireno</td></tr><tr><td>Termómetro de referencia</td><td>USB ULIFE055500</td><td></td> <td>USB Brando&nbsp; Para calibrar la temperatura de los escáneres</td></tr></tbody></table>

ensayos de envejecimiento conductual y vida útil de alto rendimiento con la máquina lifespan

High-Throughput Behavioral Aging and Lifespan Assays Using the Lifespan Machine

Los animales genéticamente idénticos mantenidos en un ambiente constante muestran una amplia distribución de la esperanza de vida, lo que refleja un gran aspecto estocástico no genético del envejecimiento conservado en todos los organismos estudiados. Este componente estocástico significa que para comprender el envejecimiento e identificar intervenciones exitosas que extiendan la vida útil o mejoren la salud, los investigadores deben monitorear grandes poblaciones de animales de experimentación simultáneamente. La puntuación manual tradicional de muertes limita el rendimiento y la escala necesarios para las pruebas de hipótesis a gran escala, lo que lleva al desarrollo de métodos automatizados para ensayos de vida útil de alto rendimiento. Lifespan Machine (LSM) es una plataforma de procesamiento de imágenes de alto rendimiento que combina escáneres planos modificados con software personalizado de procesamiento de imágenes y validación de datos para el seguimiento de nematodos durante toda la vida. La plataforma constituye un gran avance técnico al generar datos de vida útil altamente resueltos temporalmente de grandes poblaciones de animales a una escala sin precedentes y con una precisión estadística y exactitud igual a los ensayos manuales realizados por investigadores experimentados. Recientemente, el LSM se ha desarrollado aún más para cuantificar los cambios conductuales y morfológicos observados durante el envejecimiento y relacionarlos con la esperanza de vida. A continuación, describimos cómo planificar, ejecutar y analizar un experimento automatizado de vida útil mediante el LSM. Además, destacamos los pasos críticos necesarios para la recopilación exitosa de datos de comportamiento y curvas de supervivencia de alta calidad.

La reproducibilidad experimental en los ensayos de esperanza de vida es un reto y requiere tanto condiciones experimentales estrictamente controladas como grandes poblaciones para lograr una resolución estadística suficiente 4,36. El LSM es especialmente adecuado para el estudio de grandes poblaciones de animales en un entorno constante con alta resolución temporal. Para demostrar la capacidad del LSM, resaltar los pasos cruciales del análisis y ayudar a los inve...

La plataforma de imágenes "The Lifespan Machine" automatiza la observación de por vida de grandes poblaciones. Mostramos los pasos necesarios para realizar ensayos de esperanza de vida, resistencia al estrés, patogénesis y envejecimiento conductual. La calidad y el alcance de los datos permiten a los investigadores estudiar las intervenciones en el envejecimiento a pesar de la presencia de variaciones biológicas y ambientales.

Ensayos de envejecimiento conductual y vida útil de alto rendimiento con la máquina Lifespan

Genetically identical animals kept in a constant environment display a wide distribution of lifespans, reflecting a large non-genetic, stochastic aspect ...

En nuestro laboratorio, estudiamos los determinantes fisiológicos y moleculares del envejecimiento y la esperanza de vida, y lo hacemos de manera cuantitativa. Para ello, utilizamos el nematodo C.elegans como un modelo genéticamente manejable de envejecimiento rápido, y lo utilizamos con una combinación de herramientas como la Lifespan Machine. La reproducibilidad es un tema importante en la investigación del envejecimiento.Para superar esto, a menudo se requiere una gran población de animales para medir cambios robustos en la esperanza de vida y, por lo tanto, este proceso realmente se beneficia de los protocolos automatizados de alto rendimiento. Mucha gente ha utilizado la Lifespan Machine para muchos propósitos diferentes y están muy contentos con eso. Para nuestras propias aplicaciones, los dos hallazgos más significativos son, en primer lugar, en 2016, nuestro descubrimiento de la escala temporal como un resultado común de muchas intervenciones en el envejecimiento.Y en segundo lugar, en 2022, nuestro descubrimiento de que la duración de la salud y la esperanza de vida están determinadas por distintos deterioros físicos subyacentes. La Lifespan Machine adapta los protocolos d

high-throughput-behavioral-aging-lifespan-assays-using-lifespan

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Envejecimiento cronológico en la levadura se refiere a la pérdida de la viabilidad celular asociado con el tiempo en la fase estacionaria. Aquí se describe un método de alto rendimiento para determinar cuantitativamente la levadura abarcan la vida cronológica.

Cuantificar cronológico levadura Duración de la vida por consecuencia de células envejecidas

En este protocolo se presenta un método para...

Medición Caenorhabditis elegans Duración de la vida en 96 placas de microtitulación Bueno

Aquí describimos un protocolo simple para producir rápidamente cientos de agar medios de crecimiento nematodos, placas 96 pocillos con un número constante de Caenorhhabditis elegans por pozo. Estas culturas son útiles para la detección fenotípica de organismos enteros. Nos centramos aquí en el uso de estas culturas a los productos químicos de la pantalla para efectos de Pro-longevidad.

Un método Simple para la detección química de alto rendimiento en Caenorhabditis Elegans

Aquí describimos el método Replica Set, un enfoque cuantitativo medida vida útil/supervivencia de C. elegans y healthspan en forma robusta y de alto rendimiento, permitiendo la proyección de muchas condiciones sin sacrificar la calidad de los datos. Este protocolo detalla la estrategia y proporciona una herramienta de software para análisis de datos de conjunto de réplica.

El método de conjunto de réplica: Un enfoque de alto rendimiento para cuantitativamente medida Caenorhabditis elegans vida útil

Este papel describe un protocolo para la evaluación cognitiva de modelos genéticos de la enfermedad de Alzheimer utilizando el sistema IntelliCage, que es un sistema de monitoreo conductual alto rendimiento automatizado con condicionamiento operante.

Automatizado, ensayo conductual a largo plazo para las funciones cognitivas en múltiples modelos genéticos de la enfermedad de Alzheimer, utilizando IntelliCage

Caenorhabditis elegans sirve como un excelente sistema modelo con métodos robustos y de bajo costo para estudiar la duración de la salud, la vida útil y la resistencia al estrés.

Encuesta de métodos de bajo costo para medir la esperanza de vida y la salud en Caenorhabditis elegans

Aquí se describe un conjunto de ensayos de mutación del ADN que se pueden combinar con el modelo cronológico levadura vida a estudiar los genes / vías que regulan o contribuir a la inestabilidad del ADN genómico durante el envejecimiento.

El estudio de dependientes de la edad de Inestabilidad Genómica con el S. cerevisiae Cronológica Modelo Longevidad

Bicelles son mezclas de lípidos / anfifilo que mantienen las proteínas de membrana (MP) dentro de una bicapa lipídica, pero tienen un comportamiento de fase única que facilita la selección de alto rendimiento de los robots de cristalización. Esta técnica se ha producido con éxito una serie de alta resolución de estructuras de ambas fuentes procariotas y eucariotas. Este vídeo describe los protocolos para la generación de la mezcla lipídica bicelle, la incorporación de los diputados en la mezcla...

De alto rendimiento de cristalización de proteínas de membrana Utilizando el Método lipídico Bicelle

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Genoma escala supresiones de genes en<em&gt; Streptococcus sanguinis</em&gt; Por PCR de alto rendimiento

Drosophila melanogaster es un organismo modelo eficaz para explorar las bases moleculares de la regulación de la longevidad. Este protocolo se discutirán los pasos involucrados en la generación de un reproducible, basado en la población de medición de la longevidad, así como los posibles escollos y cómo evitarlos.

Medición de la esperanza de vida en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aprende a realizar ensayos de envejecimiento conductual y análisis de vida útil automatizados con la Lifespan Machine utilizando C. elegans. Este método permite recopilar datos de comportamiento de grandes poblaciones de nematodos con alta frecuencia de adquisición de imágenes.

Ensayos de envejecimiento conductual y vida útil de alto rendimiento con la máquina Lifespan

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