Un ensayo validable de reacción digital de la polimerasa en cadena de gotas para la detección de vectores virales adenoasociados en estudios de bioderramamiento de lágrimas

Nuestro protocolo cuantifica vectores virales adenoasociados en matrices complejas. La detección y cuantificación precisas son esenciales para evaluar su rendimiento en los ensayos clínicos. Este protocolo busca específicamente llenar los vacíos regulatorios actuales en el diseño de estudios moleculares compatibles con las buenas prácticas de laboratorio.

Como parte del desarrollo de vectores virales, las agencias reguladoras requieren la evaluación de la biodiseminación de vectores. ddPCR es una tecnología prometedora para esta evaluación, ya que permite una cuantificación precisa sin el uso de una curva estándar y una sensibilidad mejorada en comparación con la qPCR. La cuantificación precisa en las matrices complejas encontradas en entornos clínicos, como las lágrimas, puede ser difícil de validar debido a la interferencia e inhibición de la PCR.

Las cantidades limitadas de muestras clínicas también pueden limitar la capacidad de detectar eventos raros si el ensayo no es lo suficientemente sensible. Nuestro enfoque desarrolla un marco basado en ddPCR repetible y adaptable para validar ensayos para su uso en estudios regulados. Este método evita un paso específico de extracción de ADN, lo que permite una validación más ágil y proporciona criterios claros contra los cuales evaluar el rendimiento del ensayo para garantizar la robustez y la repetibilidad.

Este protocolo tiene el potencial de aplicarse a cualquier estudio de diseminación de vectores virales, no solo a la detección de AAV en lágrimas, como se presenta aquí. Crea un marco robusto y repetible sobre el cual se pueden desarrollar múltiples programas regulados adecuados para el propósito.