Evaluación rápida de la citotoxicidad in vitro del receptor de antígeno quimérico que expresa jurkat mediante imágenes fluorescentes
October 27th, 2023
Un protocolo para evaluar la destrucción cuantitativa de células tumorales por células Jurkat que expresan el receptor de antígeno quimérico (CAR) dirigido a un solo antígeno tumoral. Este protocolo se puede utilizar como plataforma de cribado para la optimización rápida de las construcciones de bisagras de CAR antes de la confirmación en células T derivadas de sangre periférica.
Las células T con CAR se mejoran constantemente para lograr mejores respuestas en ensayos clínicos en humanos. Estamos identificando formas de evaluar esto en nuestro laboratorio utilizando un método imparcial de alto rendimiento, como el uso de imágenes fluorescentes para detectar las combinaciones que funcionan mejor. Hay varias combinaciones de construcciones que se pueden diseñar para cualquier fragmento de variable de cadena única modificando la geometría de los dominios extracelular y bisagra.
Hemos diseñado este protocolo para identificar las combinaciones con mejor eficacia en la eliminación de células diana utilizando células Jurkat. Se trata de un protocolo rápido y de alto rendimiento para cribar construcciones de CAR en función de su citotoxicidad en las células diana utilizando células Jurkat, que luego se validan con células T convencionales. Se pueden probar una docena de construcciones diferentes de CAR en una placa de 96 pocillos simultáneamente utilizando esta técnica.
Aquí, en Akhavan Lab, cuantificamos en números absolutos la ciclosis directa de las células diana por las células Jurkat que expresan CAR de una manera de alto rendimiento para detectar múltiples construcciones de CAR. El objetivo principal de nuestro laboratorio es mejorar la traslación clínica de la terapia de células T con CAR contra tumores cerebrales de alto grado. Aprovechamos los cribados de fármacos de alto rendimiento como una modalidad para mejorar la citotoxicidad de las células T con CAR, así como para dirigirnos al microambiente tumoral.
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Visión general
Este protocolo describe un método de alto rendimiento para evaluar la citotoxicidad de las células Jurkat que expresan CAR contra células tumorales. Permite una rápida selección de varias construcciones de CAR para identificar las combinaciones más efectivas para dirigirse a antígenos tumorales específicos.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Inmunología
- Biología del cáncer
- Terapia celular
Antecedentes
- Las células T CAR se están refinando para mejorar los resultados clínicos.
- Los métodos de selección de alto rendimiento son esenciales para optimizar las construcciones de CAR.
- Las células Jurkat sirven como modelo para evaluar la eficacia de CAR.
- Este estudio se centra en la citotoxicidad de las construcciones de CAR contra células diana.
Propósito del estudio
- Desarrollar un protocolo para seleccionar eficientemente las construcciones de CAR.
- Cuantificar los efectos citotóxicos de las células Jurkat que expresan CAR.
- Identificar configuraciones óptimas de CAR para dirigirse a antígenos tumorales.
Métodos utilizados
- Imágenes fluorescentes para selección de alto rendimiento.
- Evaluación de múltiples construcciones de CAR en formato de placa de 96 pocillos.
- Cuantificación de la muerte de células diana por células Jurkat que expresan CAR.
- Comparación con respuestas de células T convencionales para validación.
Principales resultados
- Identificación de construcciones de CAR efectivas para la muerte de células tumorales.
- Demostración de capacidades de alto rendimiento usando células Jurkat.
- Evaluación cuantitativa de la citotoxicidad en diferentes construcciones.
- Potencial para la rápida optimización de diseños de CAR antes de la aplicación clínica.
Conclusiones
- El protocolo permite una selección eficiente de construcciones de CAR.
- Las células Jurkat proporcionan un modelo confiable para evaluar la eficacia de CAR.
- Este enfoque puede acelerar el desarrollo de terapias con células T CAR.
Preguntas frecuentes
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:42
Plating CFSE‐Labelled Tumor Cells and Co‐Culturing CAR‐Expressing Jurkats for In Vitro Cytotoxicity Evaluation
5:19
Preparation of Plate for Fluorescent Imaging and Cell Viability Assessment in CAR‐Jurkat Co‐Culture with CFSE‐Labeled Tumor Cells
![Imágenes dinámicas de células T receptoras de antígeno quimérico con [18F]Tomografía por emisión de positrones tetrafluoroborato/Tomografía computarizada](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F62334.jpg%3Fv%3D2026-06-26T13%253A51%253A27.570Z&w=384&q=75)
