Name: Mejora de la fiabilidad de los biobancos de tumores de próstata con una técnica de muestreo y caracterización histológica mejoradas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Aprende a mejorar la recolección y caracterización de muestras de cáncer de próstata mediante técnicas de muestreo y análisis histológico avanzadas. Este método optimiza la calidad de los biobancos para investigación oncológica.

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A.L. reconoce un contrato postdoctoral "Margarita Salas" (número 21-076), y MAM-T un contrato de investigación "María Zambrano" (número MAZ/2021/03 UP2021-021). Ambos contratos han sido financiados por la Unión Europea-Next generation EU.

Este método se desarrolló a través de esfuerzos colaborativos que involucraron a diferentes servicios clínicos (Urología, Anatomía Patológica y el Biobanco del Hospital La Fe). El estudio se llevó a cabo de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano, y recibió la aprobación del Comité de Ética para la Investigación Biomédica del Instituto de Investigación Sanitaria Hospital Universitario y Politécnico La Fe (Valencia, España). Todas las muestras se almacenaron en el Biobanco del Hospital La Fe (PT13/0010/0026). El procedimiento general se detalla en la Figura 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65635/65635fig01.jpg"> Figura 1: Esquema general del procedimiento. Representación esquemática del procedimiento escalonado descrito en la sección de protocolo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65635/65635fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
1. Focalización tumoral
<ol><li>Antes de la cirugía, utilice imágenes de resonancia magnética multiparamétricas o biparamétricas (mpMRI o bpMRI)17,18 para localizar el tumor y mapear su posición dentro de la glándula prostática. Combinar la información obtenida de la resonancia magnética con los hallazgos de la ecografía transrectal o del tacto rectal si este último arroja resultados discordantes.</li>
	<li>Para mejorar la localización del tumor, se deben revisar los resultados de las biopsias de próstata transrectales preoperatorias guiadas por ecografía y por resonancia magnética. NOTA: En el procedimiento diagnóstico del cáncer de próstata, las biopsias se toman directamente de la próstata por vía transrectal. Estas biopsias incluyen la toma sistemática de muestras de la próstata (con cilindros distribuidos por toda la glándula) y cilindros dirigidos directamente a los hallazgos sospechosos en la resonancia magnética. Para orientar la recuperación de estas muestras, se utiliza la ecografía transrectal, que se combina con los hallazgos de la resonancia magnética de forma cognitiva («fusión cognitiva») o con un «software de fusión de resonancia magnética y ecografía real» cuando esté disponible.</li>
</ol>2. Prostatectomía radical y recolección de próstata
<ol><li>Realizar una prostatectomía radical estandarizada asistida por robot mediante abordaje transperitoneal, siguiendo los pasos descritos por Huynh et al.19.<ol><li>Comience con el acceso abdominal, la insuflación y la colocación del puerto de la cámara (consulte la tabla de materiales). Coloque los cinco puertos restantes bajo visión directa. Ajuste el neumoperitoneo a 12 mm.</li>
		<li>Liberar la vejiga mediante una incisión en el peritoneo y diseccionar el espacio perirrectal.</li>
		<li>Abra la fascia pélvica a cada lado.</li>
		<li>Realizar una disección completa de los aspectos anterior y lateral de la próstata y la vejiga.</li>
		<li>Realizar la apertura del cuello vesical, identificar y seccionar la uretra proximal para acceder a las caras posteriores de la próstata y la vejiga.</li>
		<li>Diseccionar las vesículas seminales y el espacio recto19.</li>
		<li>Diseccionar los aspectos laterales de la próstata, preservando los haces neurovasculares.</li>
		<li>Asegurar la hemostasia de los vasos en el espacio retropúbico.</li>
		<li>Diseccionar el ápice y seccionar la uretra distal.</li>
		<li>Completar la anastomosis vesicouretral.</li>
		<li>Extraer la próstata y realizar el cierre de la incisión19.</li>
	</ol></li>
	<li>Recoja la próstata fresca en un recipiente seco. Es crucial no fijar ni incrustar la muestra en parafina.</li>
	<li>Transportar la muestra quirúrgica fresca, que incluye toda la próstata, al Biobanco para el procesamiento de la muestra.</li>
</ol>3. Procesamiento de la próstata y recogida de muestras
<ol><li>Seleccione las zonas de próstata objetivo para la toma de muestras en función de la información sobre la ubicación del tumor obtenida de la resonancia magnética nuclear preoperatoria, los resultados de la biopsia preoperatoria y la palpación directa de la muestra de prostatectomía. Registre esta información en un formulario que incluya los datos de identificación del paciente, las áreas de próstata finalmente muestreadas y el número de muestras recolectadas. NOTA: Cuando los hallazgos de la resonancia magnética, los resultados de la biopsia preoperatoria y la palpación directa de la muestra de prostatectomía coincidan con la resonancia magnética, dirija todas las muestras a esa o esas ubicaciones (entre 4 y 6 cilindros). Si hay alguna discordancia, aumente el número de cilindros y apunte por separado a todas las zonas que sean sospechosas de estar afectadas por cualquiera de esos métodos.</li>
	<li>Utilice una aguja automática desechable (cirujano) para extraer muestras cilíndricas de las áreas seleccionadas (paso 1.1). Luego, identifique (patólogo) la zona exterior del cilindro, sujete el cilindro con pinzas de tejido, colóquelo en un portaobjetos y marque la zona exterior con tinta de tejido. Repita este proceso con todos los cilindros tomados.</li>
	<li>Coloque los cilindros recolectados horizontalmente en un disco portamuestras (consulte la Tabla de materiales) lleno de medio de inclusión de criostato y transfiéralos a la placa de enfriamiento del micrótomo para su corte.</li>
	<li>Una vez colocado en la platina, fije el disco portamuestras al portamuestras y córtelo con movimientos cuidadosos de la rueda siguiendo los siguientes pasos:<ol><li>Utilice el compuesto de temperatura de corte óptimo (compuesto OCT, consulte la Tabla de materiales) para incrustar la muestra de tejido antes de la sección congelada en un micrótomo-criostato.</li>
		<li>A continuación, corte la muestra con un micrótomo criostato a -25 °C. Recoja secciones delgadas de tejido en forma de cilindro (10 μm) en portaobjetos de microscopio tratados. Asegúrese de recolectar solo unas pocas micras de tejido para garantizar una cantidad adecuada de tejido tumoral intacto para su almacenamiento en el Biobanco.</li>
		<li>Reúna dos o tres secciones delgadas por portaobjetos y tiña manualmente para controlar la coloración final. El ojo del técnico garantiza una tinción óptima y se puede volver a teñir cualquier cosa necesaria. Siga estos pasos:<ol><li>Fije los portaobjetos en etanol al 96%, hidrátelos en agua destilada y tiña con hematoxilina Harris (consulte la tabla de materiales) durante 1 minuto para teñir los núcleos. Elimine el exceso de hematoxilina enjuagando los portaobjetos con agua destilada.</li>
			<li>Trate los portaobjetos con hidróxido de amonio al 30% para que la hematoxilina se vuelva azul. Retire el exceso de solución con enjuagues de agua destilada.</li>
			<li>Manchar portaobjetos con eosina (ver Tabla de Materiales) durante 30 s.</li>
			<li>A continuación, deshidrate los portaobjetos con valoraciones crecientes de alcohol, transparentes con xileno (100%) y móntelos con DPX (una mezcla de disestireno, un plastificante, y xileno, utilizado como medio de montaje de resina sintética que reemplaza al bálsamo de xileno, consulte la Tabla de materiales). Durante estos pasos, sumerja los portaobjetos y retírelos del frasco de la solución de Coplin.</li>
			<li>Por último, coloque un cubreobjetos sobre el tejido teñido y utilice un medio con un índice de refracción adecuado (véase la Tabla de materiales) para observarlo al microscopio.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>4. Caracterización de la muestra
<ol><li>Analizar la muestra bajo un microscopio óptico (patólogo), discriminando las áreas de carcinoma y determinando la puntuación de Gleason del tumor. Documente todos estos datos y marque las zonas tumorales precisas en los portaobjetos.</li>
	<li>Durante este paso, etiquete el portaobjetos con la ubicación precisa del tumor y su respectivo Gleason Score20. Además, marcar la localización de la PIN (Neoplasia Intraepitelial Prostática) en base a la identificación morfológica.</li>
</ol>5. Micro-macro-disección y almacenamiento de muestras
<ol><li>Marque claramente los diferentes componentes histológicos con marcadores distintos en el portaobjetos (patólogo) y correlacione directamente con el tejido congelado en el disco.</li>
	<li>A continuación, con una cuchilla quirúrgica, se diseccionan macro-micro las áreas de la muestra marcadas en el portaobjetos dentro del disco OCC, dividiéndolas en tejido tumoral, peritumoral, PIN y prostático normal.</li>
	<li>A medida que el medio de inclusión comience a descongelarse, manipule el tejido con pinzas y colóquelo en criotubos correctamente etiquetados. NOTA: Almacene cuidadosamente cada fragmento disecado dentro del tubo correspondiente, siguiendo el diagnóstico histológico de los crio-cortes.</li>
	<li>Almacene los criotubos marcados con muestras histológicas completamente caracterizadas en el Biobanco a -80 °C para su uso posterior en estudios de investigación. NOTA: Los pasos descritos en esta sección pueden ser realizados por un técnico capacitado bajo la supervisión del patólogo. La muestra quirúrgica debe transportarse al Biobanco lo antes posible para evitar la degradación de los tejidos y los ácidos nucleicos. De acuerdo con las guías de referencia, se deben realizar esfuerzos para evitar el tiempo de isquemia prolongado (&gt;30 min)21. Las muestras pueden conservarse en el Biobanco indefinidamente siempre que se mantengan los principios de calidad de la muestra.</li>
</ol>

Protocolo para el mapeo y disección de muestras de prostatectomía

<ol><li>Rawla, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of prostate cancer.</a> World Journal of Oncology. 10 (2), 63-89 (2019).</li>
<li>Epstein, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2019+Genitourinary+Pathology+Society+%28GUPS%29+white+paper+on+contemporary+grading+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+%26+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">The 2019 Genitourinary Pathology Society (GUPS) white paper on contemporary grading of prostate cancer.</a> Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 145 (4), 461-493 (2021).</li>
<li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratumor+heterogeneity+and+clonal+evolution+revealed+in+castration-resistant+prostate+cancer+by+longitudinal+genomic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">Intratumor heterogeneity and clonal evolution revealed in castration-resistant prostate cancer by longitudinal genomic analysis.</a> Translational Oncology. 16, 101311(2022).</li>
<li>Haffner, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+phenotypic+heterogeneity+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Urology%22%5BJournal%5D)">Genomic and phenotypic heterogeneity in prostate cancer.</a> Nature Reviews Urology. 18 (2), 79-92 (2021).</li>
<li>Woodcock, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+cancer+evolution+from+multilineage+primary+to+single+lineage+metastases+with+implications+for+liquid+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Prostate cancer evolution from multilineage primary to single lineage metastases with implications for liquid biopsy.</a> Nature Communications. 11 (1), 5070(2020).</li>
<li>Heo, Y. J., Hwa, C., Lee, G. H., Park, J. M., An, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+multi-omics+approaches+in+cancer+research%3A+from+biological+networks+to+clinical+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules+and+Cells%22%5BJournal%5D)">Integrative multi-omics approaches in cancer research: from biological networks to clinical subtypes.</a> Molecules and Cells. 44 (7), 433-443 (2021).</li>
<li>Menyhárt, O., Győrffy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-omics+approaches+in+cancer+research+with+applications+in+tumor+subtyping%2C+prognosis%2C+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+and+Structural+Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">Multi-omics approaches in cancer research with applications in tumor subtyping, prognosis, and diagnosis.</a> Computational and Structural Biotechnology Journal. 19, 949-960 (2021).</li>
<li>Annaratone, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+principles+of+biobanking%3A+from+biological+samples+to+precision+medicine+for+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Archiv%22%5BJournal%5D)">Basic principles of biobanking: from biological samples to precision medicine for patients.</a> Virchows Archiv. 479 (2), 233-246 (2021).</li>
<li>King, C. R., Long, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+biopsy+grading+errors%3A+A+sampling+problem%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Prostate biopsy grading errors: A sampling problem.</a> International Journal of Cancer. 90 (6), 326-330 (2000).</li>
<li>Jayadevan, R., Zhou, S., Priester, A. M., Delfin, M., Marks, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+MRI-ultrasound+fusion+to+achieve+targeted+prostate+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Use of MRI-ultrasound fusion to achieve targeted prostate biopsy.</a> Journal of Visualized Experiments. 146, e59231(2019).</li>
<li>Heavey, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+magnetic+resonance+imaging+and+biopsy+data+to+guide+sampling+procedures+for+prostate+cancer+biobanking%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Use of magnetic resonance imaging and biopsy data to guide sampling procedures for prostate cancer biobanking.</a> Journal of Visualized Experiments. 152, 60216(2019).</li>
<li>Panach Navarrete, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPanach+Navarrete%2C+J+%22Estudio+metabol%C3%B3mico+en+tejido+prost%C3%A1tico+y+orina+para+el+diagn%C3%B3stico+y+pron%C3%B3stico+del+c%C3%A1ncer+de+pr%C3%B3stata%22">Estudio metabolómico en tejido prostático y orina para el diagnóstico y pronóstico del cáncer de próstata</a>. , https://roderic.uv.es/handle/10550/81853 (2022).</li>
<li>Bertilsson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+to+provide+a+fresh+frozen+prostate+slice+suitable+for+gene+expression+study+and+MR+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">A new method to provide a fresh frozen prostate slice suitable for gene expression study and MR spectroscopy.</a> The Prostate. 71 (5), 461-469 (2011).</li>
<li>Show SOP - Biospecimen Research Database. , https://brd.nci.nih.gov/brd/sop/show/522 (2022).</li>
<li>Dagher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+matters%3A+International+standards+for+biobanking%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Quality matters: International standards for biobanking.</a> Cell Proliferation. 55 (8), e13282(2022).</li>
<li>Yüzbaşıoğlu, A., Özgüç, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanking%3A+sample+acquisition+and+quality+assurance+for+%26%2334%3Bomics%26%2334%3B+research%5BTitle%5D)+AND+%22New+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Biobanking: sample acquisition and quality assurance for &#34;omics&#34; research.</a> New Biotechnology. 30 (3), 339-342 (2013).</li>
<li>Carpagnano, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiparametric+MRI%3A+local+staging+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Radiology+Reports%22%5BJournal%5D)">Multiparametric MRI: local staging of prostate cancer.</a> Current Radiology Reports. 8 (12), 27(2020).</li>
<li>Christophe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+cancer+local+staging+using+biparametric+MRI%3A+assessment+and+comparison+with+multiparametric+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Radiology%22%5BJournal%5D)">Prostate cancer local staging using biparametric MRI: assessment and comparison with multiparametric MRI.</a> European Journal of Radiology. 132, 109350(2020).</li>
<li>Huynh, L. M., Ahlering, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robot-assisted+radical+prostatectomy%3A+a+step-by-step+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endourology%22%5BJournal%5D)">Robot-assisted radical prostatectomy: a step-by-step guide.</a> Journal of Endourology. 32 (S1), S28-S32 (2018).</li>
<li>van Leenders, G. J. L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2019+International+Society+of+Urological+Pathology+%28ISUP%29+consensus+conference+on+grading+of+prostatic+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">The 2019 International Society of Urological Pathology (ISUP) consensus conference on grading of prostatic carcinoma.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 44 (8), e87-e99 (2020).</li>
<li>Liu, A., Collins, C. C., Diemer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanking+metastases+and+biopsy+specimens+for+personalized+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biorepository+Science+for+Applied+Medicine%22%5BJournal%5D)">Biobanking metastases and biopsy specimens for personalized medicine.</a> Journal of Biorepository Science for Applied Medicine. 3, 57-67 (2015).</li>
<li>Ellervik, C., Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preanalytical+variables+affecting+the+integrity+of+human+biospecimens+in+biobanking%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Preanalytical variables affecting the integrity of human biospecimens in biobanking.</a> Clinical Chemistry. 61 (7), 914-934 (2015).</li>
<li>Arellano, H. L., Castillo, C. O., Metrebián, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+agreement+of+the+Gleason+score+in+needle+biopsy+and+radical+prostatectomy+and+its+clinical+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+M%C3%A9d+Chile%22%5BJournal%5D)">Diagnostic agreement of the Gleason score in needle biopsy and radical prostatectomy and its clinical consequences.</a> Rev Méd Chile. 132 (8), 971-978 (2004).</li>
<li>Torres Caparó, D. A. Concordancia en los valores de gleason en biopsia prostática transrectal y en prostatectomia radical en pacientes con cáncer de próstata del Hospital Cirujano Mayor Santiago Távara entre enero 2010 - junio del 2018. , Universidad Ricardo Palma. https://repositorio.urp.edu.pe/handle/20.500.14138/1886 (2019).</li>
<li>Chavolla-Canal, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concordancia+del+puntaje+de+Gleason+en+biopsia+transrectal+de+pr%C3%B3stata+vs+prostatectom%C3%ADa+radical%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Mexicana+de+Urolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">Concordancia del puntaje de Gleason en biopsia transrectal de próstata vs prostatectomía radical.</a> Revista Mexicana de Urología. 81 (2), 1-10 (2021).</li>
<li>Fan, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+cold+ischemic+time+and+freeze-thaw+cycles+on+RNA%2C+DNA+and+protein+quality+in+colorectal+cancer+tissues+biobanking%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Impact of cold ischemic time and freeze-thaw cycles on RNA, DNA and protein quality in colorectal cancer tissues biobanking.</a> Journal of Cancer. 10 (20), 4978-4988 (2019).</li>
<li>Vaswani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+liquid+chromatography%2Ftandem+mass+spectrometry+lipidomics+analysis+of+macaque+heart+tissue+flash-frozen+or+embedded+in+optimal+cutting+temperature+polymer+%28OCT%29%3A+Practical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+communications+in+Mass+Spectrometry%3A+RCM%22%5BJournal%5D)">Comparative liquid chromatography/tandem mass spectrometry lipidomics analysis of macaque heart tissue flash-frozen or embedded in optimal cutting temperature polymer (OCT): Practical considerations.</a> Rapid communications in Mass Spectrometry: RCM. 35 (18), e9155(2021).</li>
<li>Zhang, W., Sakashita, S., Taylor, P., Tsao, M. S., Moran, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+proteome+analysis+of+fresh+frozen+and+optimal+cutting+temperature+%28OCT%29+embedded+primary+non-small+cell+lung+carcinoma+by+LC-MS%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+%28San+Diego%2C+Calif%29%22%5BJournal%5D)">Comprehensive proteome analysis of fresh frozen and optimal cutting temperature (OCT) embedded primary non-small cell lung carcinoma by LC-MS/MS.</a> Methods (San Diego, Calif). 81, 50-55 (2015).</li>
<li>Boyd, A. E., Allegood, J., Lima, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+human+tissues+embedded+in+optimal+cutting+temperature+compound+for+mass+spectrometry+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of human tissues embedded in optimal cutting temperature compound for mass spectrometry analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. 170, e62552(2021).</li>
</ol>

Los autores declaran no tener conflicto de intereses.

En cualquier estudio de investigación, la obtención de muestras de calidad es un requisito esencial para reducir los sesgos sistemáticos y obtener resultados fiables22. Por lo tanto, el control de variables preanalíticas como la temperatura a la que se procesan y almacenan las muestras, el tiempo transcurrido desde la recolección de la muestra hasta el almacenamiento, el uso de materiales esterilizados o los efectos que la adición de conservantes u otros aditivos puede tener en las muestras deben ...

El cáncer de próstata (CP) es el2º cáncer más frecuente en hombres y la5ª causa de muerte en todo el mundo1. El tratamiento y el pronóstico del paciente dependen de la estadificación y el grado (puntuación de Gleason) del tumor, como lo demuestran las tasas de supervivencia a 5 años más altas de los tumores localizados y de grado bajo (grado 6 de Gleason) (99%) en comparación con los grados de Gleason altos y los tumores metastásicos (31%)2.
La recidiva local del CP y el fracaso del tratamiento se han relacionado con la alta heterogeneidad genética intratumoral característica de este tumor tipo3. Además, se considera que el CP es una enfermedad multifocal con varios focos tumorales que exhiben diferentes características morfológicas, histológicas y moleculares4, que pueden originarse de forma independiente o derivar de un ancestro común de las células tumorales5. Estudios previos han demostrado que la evolución del tumor difiere entre los pacientes en función de factores genéticos específicos que pueden promover la metástasis o confinar el linaje celular a la próstata5. Por lo tanto, la caracterización molecular de los diferentes focos tumorales es crucial no solo para proporcionar un diagnóstico y pronóstico más precisos, sino también para adaptar un tratamiento eficaz y personalizado para el paciente.
En este contexto, la investigación biomédica y los enfoques multiómicos integradores ofrecen oportunidades sin precedentes para clasificar los cánceres en diferentes subtipos, identificar biomarcadores diagnósticos y pronósticos, y descubrir marcadores relacionados con la respuesta al tratamiento. Además, estos abordajes contribuyen a una mejor comprensión de la biología de esta enfermedad 6,7. Las muestras biológicas, ya sean tejidos o biofluidos, pueden analizarse utilizando diversas plataformas multiómicas (genómica, transcriptómica, proteómica, metabolómica, etcétera) para descubrir las características biológicas que subyacen a la fisiopatología del cáncer, abordando así las limitaciones actuales relacionadas con la heterogeneidad genética y fenotípica6. Sin embargo, es importante tener en cuenta que la calidad de los datos derivados de los estudios ómicos depende de la calidad de las muestras recogidas de los tumores, de su caracterización precisa y de su posterior procesamiento y almacenamiento8.
En este contexto, la obtención de tejido fresco de CP para la investigación presenta un desafío metodológico debido a la dificultad de la toma de muestras tumorales exitosas9. Los métodos previos incluían la toma de muestras aleatorias después de una prostatectomía radical, con malos resultados10. Sin embargo, los enfoques más recientes incorporan protocolos dirigidos basados tanto en imágenes de resonancia magnética (RM) como en datos de biopsia, lo que resulta en una mayor eficacia en la recolección de muestras tumorales11.
Por otro lado, la caracterización histopatológica de las muestras antes de su almacenamiento sin alteraciones significativas de los tejidos también plantea un reto interesante. En consecuencia, en muchos casos, la determinación histopatológica de las muestras se realiza después de su análisis (p. ej., análisis metabolómico de RMN HR 1H)12. Esta práctica conlleva gastos innecesarios, consumo de tiempo y la pérdida de un número importante de muestras que finalmente se excluyen del análisis (por ejemplo, muestras que, tras el análisis histopatológico, resultan no ser muestras tumorales). En otros casos, la caracterización histopatológica de las muestras se realiza antes de su análisis. De hecho, algunos estudios previos han intentado estandarizar métodos para proporcionar muestras de investigación representativas de alta calidad a partir de especímenes de prostatectomía radical para genómica y metabolómica13,14. Sin embargo, la eficiencia del muestreo es significativamente mayor cuando se realiza a partir de secciones ya confirmadas histológicamente (88%) que rompen el tejido, en comparación con cuando se realiza a partir de secciones no confirmadas (45%)1.
Aquí, se presenta una nueva metodología para superar estas limitaciones, con el objetivo de obtener muestras de PC frescas y bien caracterizadas antes de su almacenamiento en el Biobanco. Este método se ha desarrollado a través de esfuerzos colaborativos entre diferentes servicios clínicos (Urología, Anatomía Patológica y el Biobanco del Hospital La Fe). Es importante destacar que los Biobancos desempeñan un papel esencial en la recolección, procesamiento, conservación y almacenamiento de muestras biológicas, garantizando la alta calidad de las muestras y los datos, así como el cumplimiento de los requisitos éticos y legales 8,15,16.

<table><tbody><tr><td>Pinza Cadiere</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021 Número de</td><td>referencia: 471049. 18 usos.</td></tr><tr><td>Portaobjetos convencionales</td><td>Knittel Glass</td><td>2021</td><td>Ground/ Frosted end</td></tr><tr><td>Cryostat Microtomo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>---</td><td>Criostato CryoStar NX50</td></tr><tr><td>Cryotubes</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>Ref.: 122280.</td><td>CRYO S. PP, con tapón de rosca, estéril.</td></tr><tr><td>Sistema quirúrgico Da Vinci</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>XI modelo Instrumentos</td></tr> de <tr><td>disección</td><td>Bayer</td><td>---</td><td>Dos pinzas y una cuchilla quirúrgica&nbsp;</td></tr><tr><td>DPX Eukitt&nbsp;</td><td>Medizin- und Labortechnik GmbH</td><td>6.00.01.0001.06.01.01</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Agilent</td><td>157252</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas bipolares fenestradas</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021 Número de</td><td>pieza: 471205. 14 vidas.</td></tr><tr><td>Fuerza bipolar</td><td>Intuitivo</td><td>PN1052082-US 10/2021 Número de</td><td>pieza: 471405. 12 usos.</td></tr><tr><td>Congeladores</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>MODELO 907. -80 &ordm; C</td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Agilent</td><td>157251</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de inmunohistoquímica</td><td>Agilent-Dako</td><td>K802021-2</td><td></td></tr><tr><td>Destornillador de aguja grande</td><td>Intuitivo</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>Número de pieza: 471006. 15 usos.</td></tr><tr><td>Pinza bipolar Maryland</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>Número de pieza: 471172. 14 usos.</td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus</td><td>---</td><td>Olympus cx40</td></tr><tr><td>Hojas de micrótomo</td><td>PFM Medical</td><td>a35</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras curvas monopolares</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>Número de pieza: 470179. 10 usos.</td></tr><tr><td>Compuesto OCT</td><td>NEG-50</td><td>LOT.117340</td><td></td></tr><tr><td>PlusSpeed S Dispositivo de biopsia de un solo uso con punta biselada</td><td>Peter Pflugbeil GmbH&nbsp;</td><td>PSS-1825-S</td><td></td></tr><tr><td>Pinza ProGasp</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>Número de pieza: 471093. 18 usos.</td></tr><tr><td>Portamuestras Disc</td><td>Davidson Cryo Chuck. BradleyProductos</td><td></td><td>30 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>Tinta de seda</td><td>Pelikan</td><td>2021</td><td>Tinta 4001 negro brillante (301168)</td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Quimipur</td><td>Ref. 169</td><td></td></tr></tbody></table>

mejora de la fiabilidad de los biobancos de tumores de próstata con una técnica de muestreo y caracterización histológica mejoradas

Enhancing Prostate Tumor Biobanking Reliability with Improved Sampling Technique and Histological Characterization

La adquisición de muestras de tejido tumoral frescas y bien caracterizadas es fundamental para realizar estudios "ómicos" de alta calidad. Sin embargo, puede ser particularmente desafiante en el contexto del cáncer de próstata (CP) debido a la naturaleza única de este órgano y la alta heterogeneidad asociada con este tumor. Por otro lado, caracterizar histopatológicamente las muestras antes de su almacenamiento sin causar alteraciones significativas en los tejidos también es un desafío intrigante. En este contexto, presentamos un nuevo método de adquisición, mapeo, caracterización y microdisección de tejido prostático resecado basado en criterios anatomopatológicos.
A diferencia de los protocolos publicados anteriormente, este método reduce el tiempo necesario para el análisis histopatológico de la muestra prostática sin comprometer su estructura, que es crucial para evaluar los márgenes quirúrgicos. Además, permite la delineación y micro-macro disección de muestras frescas de tejido prostático, con un enfoque en áreas tumorales histológicas definidas por criterios patológicos como la puntuación de Gleason, lesiones precursoras (neoplasia intraepitelial prostática de alto grado - PIN) y lesiones inflamatorias (prostatitis). Estas muestras se almacenan en un Biobanco para su posterior análisis de investigación.

Los resultados revelan que esta técnica ha permitido obtener material tumoral en el 61% de los casos estudiados (25 de 41 casos) (Tabla 1).
Tabla 1: Datos histopatológicos de las muestras estudiadas. Resumen de los datos histopatológicos de las muestras utilizadas en el estudio. El cilindro de diagnóstico se refiere a la muestra de biopsia de próstata obtenida con fines diagnósticos, mientras que el cilindro procesado corresponde al cilindro obtenido de la mue...

Este protocolo describe un método para facilitar la recolección de muestras de prostatectomía radical. El objetivo es mapear, caracterizar y micro-macro diseccionar muestras de tejido de los especímenes en base a criterios anatomopatológicos antes de almacenarlas en un Biobanco.

Mejora de la fiabilidad de los biobancos de tumores de próstata con una técnica de muestreo y caracterización histológica mejoradas

Acquiring fresh and well-characterized tumor tissue samples is critical for conducting high-quality &#34;omics&#34; studies. However, it can be ...

Nuestra investigación se centra en mejorar la metodología para obtener muestras de tejido de cáncer de próstata de alta calidad. Aborda desafíos como la heterogeneidad genética intratumoral, la multifocalidad y la caracterización molecular precisa de los focos tumorales en la investigación del cáncer de próstata. Los biobancos son una práctica impulsada por la tecnología que recolecta, procesa y almacena sistemáticamente muestras biológicas.La integración de estas tecnologías permite la generación de un amplio conjunto de datos a partir de muestras de cáncer de próstata bien caracterizadas, lo que fomenta la colaboración, mejora la investigación, la fiabilidad y ayuda en el desarrollo de medicina personalizada y estrategias para los pacientes con cáncer de próstata. La patología se enfrenta a varios cambios experimentales, como la heterogeneidad intratumoral, la estandarización histopatológica, la integración de datos moleculares, los procesos intensivos de laboratorio y el análisis cuantitativo del clima para el análisis automatizado de imágenes electrónicas. Abordar estos problemas requiere avances tecnológicos continuos, iniciativas de estandarización, colaboraciones interdisciplinarias y mejores métodos experimentales y computacionales.El protocolo maneja la toma de muestras tumorales de manera eficiente y precisa. Integra datos de imágenes y biopsias para una localización precisa. Ofrece información histopatológica en tiempo real, reduce los costos y el tiempo, mejora la calidad de la muestra y minimiza todo el tiempo de isquemia.Esto aborda los desafíos críticos en la investigación histopatológica del cáncer de próstata. Nuestro protocolo puede transformar la investigación del cáncer de próstata al mejorar la comprensión del tumor y los datos histopatológicos, mejorar los biobancos, fomentar la colaboración y permitir la medicina personalizada. El biobanco longitudinal revela cambios temporales, aclarando la progresión de la enfermedad y las respuestas al tratamiento, interactuando con múltiples datos, descubre nervios moleculares y nuevos biomarcadores para el cáncer de próstata.

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Este video muestra una técnica basada en datos de resonancia magnética para apuntar a regiones específicas que contienen tumores en el tejido prostático para su muestreo. Las muestras de biopsia recolectadas pueden almacenarse con fines de biobanco o usarse para análisis posteriores.

Muestreo de tejido de cáncer de próstata para biobancos: una técnica dirigida guiada por resonancia magnética para eliminar punzones de biopsia de tejido tumoral fresco

Retrovirus endógenos humanos (HERV), que ocupan 8% del genoma humano, conservan la capacidad de codificación de los escasos pero cien mil repeticiones terminales largas (LTRs). A Affymetrix microarray costumbre fue diseñado para identificar la expresión locus HERV individual y se utilizó en los tejidos de cáncer de próstata como una prueba de concepto para futuros estudios clínicos.

La identificación basada en microarrays de expresión individual HERV Loci: Aplicación al descubrimiento de biomarcadores en el cáncer de próstata

Los tumores cutáneos se descartan a menudo después de la cirugía micrográfica de Mohs. Se describe aquí un protocolo que permite al personal de soporte clínico procesar y almacenar eficazmente muestras de tumores cutáneos ( por ejemplo, carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular y melanoma) para aplicaciones de laboratorio aguas abajo sin interferir con las operaciones clínicas.

Establecimiento de un Biorepository basado en la Clínica

Este método implica la utilización de datos de diagnóstico clínico para pacientes con cáncer de próstata con el fin de guiar los procedimientos de muestreo, cuando el tejido biobancario después de la prostatectomía radical. Esto supera los problemas con los métodos publicados anteriormente en torno a la eficiencia y la disponibilidad de tejido fresco para una gama más amplia de aplicaciones posteriores.

Uso de imágenes de resonancia magnética y datos de biopsia para guiar los procedimientos de muestreo para la biobanca del cáncer de próstata

En el siguiente trabajo, describimos los pasos consecutivos necesarios para el establecimiento de un gran biobanco de cáncer colorrectal y pancreático.

Creación y mantenimiento de un biobanco vivo - Cómo lo hacemos

Los biobancos son recursos cruciales para la investigación biomédica y el Biobanco de Medicina Traslacional y Digital del Instituto Europeo de Oncología es un modelo en este campo. Aquí, proporcionamos una descripción detallada de los procedimientos operativos estándar de los biobancos para la gestión de diferentes tipos de muestras biológicas humanas.

Biobanco para Medicina Traslacional: Procedimientos Operativos Estándar para el Manejo Óptimo de Muestras

Este artículo presenta un protocolo detallado para recolectar muestras de cáncer de mama, diseñado para optimizar su utilidad para biobancos, medicina personalizada y otras aplicaciones de investigación. El flujo de trabajo para la recolección de muestras, incluidos los procedimientos de biopsia de mama y mastectomía, se describe en detalle, centrándose en minimizar el daño tisular y maximizar la calidad de la muestra.

Optimización de los procedimientos de recolección de muestras de biopsia de mama y mastectomía para biobancos, medicina personalizada y aplicaciones de investigación

Este estudio presenta una técnica mejorada de biopsia transperineal de próstata que utiliza un método de doble orificio en forma de cono y guía de sonda de doble plano. Estas modificaciones reducen el traumatismo, mejoran la recuperación del paciente y mejoran la precisión de la biopsia, lo que convierte al procedimiento en un enfoque confiable y mínimamente invasivo para el diagnóstico del cáncer de próstata.

Biopsia de próstata transperineal mediante un método de doble orificio en forma de cono con guía de sonda de doble plano

Aquí, presentamos un protocolo estandarizado para la detección del cáncer de próstata utilizando histología Raman estimulada (SRH) en muestras de biopsia debido a las ventajas sobre la histopatología tradicional, centrándonos en la preparación de la muestra, la imagen y la inteligencia artificial para mejorar la relación cáncer-tejido. Además, admite biobancos para modelos transcriptómicos, organoides o xenoinjertos, y la identificación de márgenes quirúrgicos intraoperatorios.

Detección y aislamiento de cáncer en biopsias de próstata mediante histología Raman estimulada e inteligencia artificial

La heterogeneidad del cáncer de próstata y la resistencia al tratamiento siguen siendo desafíos. Describimos un protocolo para generar organoides derivados de pacientes (PDO) que preservan las características clave del tumor parental. Este modelo estandarizado respalda la detección de medicamentos y los avances en medicina de precisión.

Establecimiento y mantenimiento de organoides de cáncer de próstata derivados del paciente: un protocolo experimental detallado

Aprende a mejorar la recolección y caracterización de muestras de cáncer de próstata mediante técnicas de muestreo y análisis histológico avanzadas. Este método optimiza la calidad de los biobancos para investigación oncológica.

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Mejora de la fiabilidad de los biobancos de tumores de próstata con una técnica de muestreo y caracterización histológica mejoradas

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