Name: Medición de la función mitocondrial de los linfocitos T CD8 vírgenes y efectores (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Aprenda a medir la función mitocondrial en linfocitos T CD8 vírgenes y efectores mediante el ensayo Mito Stress Test. Este método permite analizar la bioenergética celular y la señalización del receptor de células T en tiempo real.

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<table><tbody><tr><td>Antimicina A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD3/CD28 Dynabeads</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>Biotinilado anti-CD3</td><td>Biolegend</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ Kit</td> <td>de aislamiento de células TMiltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de células (100 &micro; m)</td><td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminotetraacético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>medio de gradiente de densidad&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluorometoxi)fenil) carbonohidrazonoil dicianuro)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>Glutamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>LS Columnas</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Columnas de selección positiva</td></tr><tr><td>Columna de separación de células magnéticas</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>Microplaca</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Oligomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>Recobinante IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotenona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Medios de caballito de mar</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>Cartucho sensor</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Estreptavidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>Estéril placa de 6 pocillos</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>Estéril placa de 24 pocillos</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

medición de la función mitocondrial de los linfocitos t cd8 vírgenes y efectores

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

Las capacidades metabólicas glucolíticas y oxidativas se pueden medir utilizando un ensayo funcional mitocondrial que evalúa las capacidades dirigiéndose a los componentes de la cadena de transporte de electrones en puntos de tiempo particulares (Figura 2A). Se pueden cargar diferentes esquemas de inyección en los puertos del cartucho del sensor para modificar el ensayo tradicional y evaluar la estimulación aguda del TCR (Figura 2B, C). El númer...

Medición de la función mitocondrial de los linfocitos T CD8 vírgenes y efectores

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

measuring-mitochondrial-function-of-nave-and-effector-cd8-t-cells

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Mediadas por células linfocitotoxicidad (LMC) los ensayos se pueden utilizar para evaluar las respuestas autorreactivas y los mecanismos de estudio de la muerte celular in vitro. Sin embargo, utilizando células vivas, las técnicas de microscopía confocal microscópicos con tintes fluorescentes, el tipo y la cinética de muerte celular, así como las rutas utilizadas se pueden estudiar con mayor detalle.

Métodos para evaluar la Beta mediada por la muerte celular por linfocitos T citotóxicos

Este video muestra la evaluación del funcionamiento mitocondrial de las células endoteliales vasculares cerebrales (CVE) utilizando un ensayo de flujo extracelular. Las células CVE se colocan en una placa de cultivo de células de flujo extracelular. Los sensores de flujo extracelular se hidratan antes de cargarlos y calibrarlos en el bioanalizador. A continuación, se carga la placa que contiene las células para su análisis.

Evaluación de la función mitocondrial en células endoteliales vasculares cerebrales

Este protocolo describe un ensayo de citotoxicidad sensible basado en células. Al enumerar la disminución de la frecuencia de linfocitos T CD4+ diana vivos en presencia de un número cada vez mayor de linfocitos T CD8+ efectores, este ensayo permite la evaluación directa de la actividad citolítica de los linfocitos T CD8+ específicos del antígeno.

Ensayo de citometría de flujo basado en células para medir la actividad citotóxica

Se describe aquí es un método para detectar y cuantificar proteínas de la membrana externa mitocondrial por inmunomarcaje de las mitocondrias aisladas de tejido de roedores y análisis por citometría de flujo. Este método puede ampliarse para evaluar los aspectos funcionales de subpoblaciones mitocondriales.

La inmunodetección de la membrana externa proteínas por Citometría de Flujo de mitocondrias aisladas

Este artículo ilustra un método eficaz para cuantificar las mitocondrias o lisosomas en las células vivas. La combinación de tintes específicos lisosomas o las mitocondrias con fluorescente conjugados anticuerpos contra marcadores de superficie permite la cuantificación de estos orgánulos en poblaciones de mezclado de la célula, como células primarias extraídas muestras de tejido, mediante el uso de Citometría de flujo multicolor.

Cuantificación de basados en citometría de flujo multicolor de las mitocondrias y los lisosomas en las células T

Describimos aquí un ensayo de matanza in vivo basado en citometría de flujo que permite el examen de inmunodominancia en las respuestas de linfocitos T citotóxicos (CTL) a un antígeno tumoral modelo. Proporcionamos ejemplos de cómo este ensayo elegante se puede emplear para estudios mecaniísticos y para pruebas de eficacia de fármacos.

Confección de ensayos de citotoxicidad in vivo para estudiar inmunodominancia en respuestas de células T CD8+ específicas de tumores

Aquí describimos un método confiable para medir la masa mitocondrial y el potencial de membrana en células madre hematopoyéticas cultivadas ex vivo y células T.

Medición de la masa mitocondrial y el potencial de la membrana en células madre hematopoyéticas y células T por citometría de flujo

La adaptación metabólica es fundamental para las células T, ya que dicta la diferenciación, la persistencia y la citotoxicidad. Aquí, se presenta un protocolo optimizado para monitorear la respiración mitocondrial en células T primarias humanas diferenciadas por citoquinas ex vivo .

Monitoreo en tiempo real de la respiración mitocondrial en células T primarias humanas diferenciadas por citoquinas

Se describe un procedimiento para estudiar la dinámica del metabolismo del ADN mitocondrial (ADNmt) en las células utilizando un formato de placa de múltiples pocillos e imágenes de inmunofluorescencia automatizadas para detectar y cuantificar la síntesis y distribución del ADNmt. Esto se puede utilizar aún más para investigar los efectos de varios inhibidores, tensiones celulares y silenciamiento génico en el metabolismo del ADNmt.

Cuantificación basada en imágenes de alto rendimiento de la síntesis y distribución del ADN mitocondrial

Esta técnica describe un flujo de trabajo efectivo para visualizar y medir cuantitativamente el potencial de la membrana mitocondrial y los niveles de superóxido dentro de las células HeLa utilizando imágenes en vivo basadas en fluorescencia.

Cuantificación basada en fluorescencia del potencial de membrana mitocondrial y los niveles de superóxido utilizando imágenes en vivo en células HeLa

Los métodos para estudiar la bioenergética mitocondrial bajo concentraciones de sustrato fisiológicamente relevantes en las células inmunitarias son limitados. Proporcionamos un protocolo detallado que utiliza fluororrespirometría de alta resolución para evaluar los cambios en la respuesta del potencial de la membrana mitocondrial a la demanda de energía en células T humanas, monocitos y células mononucleares periféricas.

Fluorrespirometría de alta resolución para evaluar los cambios dinámicos en el potencial de la membrana mitocondrial en células inmunitarias humanas

Aprenda a medir la función mitocondrial en linfocitos T CD8 vírgenes y efectores mediante el ensayo Mito Stress Test. Este método permite analizar la bioenergética celular y la señalización del receptor de células T en tiempo real.

Medición de la función mitocondrial de los linfocitos T CD8 vírgenes y efectores

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