Name: Aislamiento, expansión in vitro y caracterización de células madre mesenquimales a partir de tejido adiposo epididimario de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-12T13:05:00.000+00:00
Duration: 4 min 53 s
Description: Aprenda el aislamiento y cultivo de células madre mesenquimales de tejido adiposo epididimario de ratón Swiss. Este protocolo permite caracterizar ADSCs y evaluar su potencial terapéutico antiinflamatorio en enfermedades infecciosas.

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Investigación financiada por una beca del Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnologico (480807/2011-6) y de la Fundação de Amparo à Pesquisa de Minas Gerais (APQ-01237-11). Este estudio fue financiado en parte por la UESC PROPP (073.6764.2019.0021079-85). MGAG y URS gracias a la beca otorgada por la Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) y la Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), respectivamente.

Cultivo primario de células madre derivadas del tejido adiposo del epidídimo de ratón

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<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell-derived+exosome-educated+macrophages+alleviate+systemic+lupus+erythematosus+by+promoting+efferocytosis+and+recruitment+of+IL-17%2B+regulatory+T+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell-derived exosome-educated macrophages alleviate systemic lupus erythematosus by promoting efferocytosis and recruitment of IL-17+ regulatory T cell.</a> Stem Cell Res Ther. 13 (1), 484(2022).</li>
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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Las MSCs pueden extraerse de diferentes tejidos. A pesar de que la médula ósea representa una fuente común de MSCs tanto en murinos como en humanos25,26, hemos optado por trabajar con tejido adiposo en este estudio debido a su riqueza en MSCs, su distribución en el organismo y su facilidad de acceso. Como alternativa, las células madre derivadas del tejido adiposo pueden utilizarse para generar células inmortalizadas similares a las MSC27.
Algunos puntos de la extracción merecen especial atención para el éxito de los protocolos aquí compartidos. En primer lugar, destacamos el cuidado para recoger el tejido que debe realizarse en condiciones asépticas. Por lo tanto, asegúrese de que los ratones se desinfecten adecuadamente con alcohol al 70% antes de comenzar la cirugía. Otro punto importante es no utilizar el mismo juego de pinzas y tijeras para recoger el tejido adiposo del epidídimo, evitando así cualquier fuente de contaminación. 
Una segunda preocupación es el procesamiento de los tejidos. Los fragmentos en el tubo cónico deben agitarse adecuada y vigorosamente con 10 min de incubación a 37 °C. Es muy importante cambiar el medio al día siguiente y luego cada 2-3 días. Se recomienda observar el cultivo diariamente, verificando el color del medio, la forma de la célula y cualquier interferencia en el entorno del cultivo. 
Una tercera preocupación se refiere al mejor tiempo/paso para la caracterización de MSC. Aquí, recomendamos hacerlo en el tercer paso de las celdas, pero esto no es obligatorio. Depende del objetivo del estudio. En el tercer pasaje, tenemos alrededor del 80% de las células caracterizadas como MSC, lo que es suficiente para los objetivos de este estudio, por ejemplo. La caracterización fenotípica se realiza mediante el análisis de la expresión de marcadores hematopoyéticos (CD34 y CD45, por ejemplo) y marcadores mesenquimales (CD29, CD73, CD90 y CD105, por ejemplo). Además, la International Society for Cell and Gene Therapy (ISCT)21 destaca que las ADSCs deben tener una morfología similar a la de los fibroblastos y adherirse al plástico de la plataforma de cultivo. La morfología se puede observar bajo un microscopio durante el cultivo. La caracterización funcional se realiza analizando el potencial de las ADSC para diferenciarse en células osteoblásticas, adipoblastas y condrobástas. En la caracterización fenotípica, el porcentaje de marcadores mesenquimales y hematopoyéticos puede variar según la especie animal y la fuente celular, no cumpliendo plenamente con los números recomendados por el ISCT. Por ejemplo, el ISCT recomienda para las MSC humanas ≥95% de CD105, CD73, CD90 y ≤2% de CD45, CD34, CD14 o CD11b, CD79a o CD19, Antígeno leucocitario humano - Isotipo DR (HLA-DR)21. Además, es importante hacer la caracterización funcional y confirmar la multipotencia de las células que se diferencian en linajes de osteoblastos, condrocitos y adipocitos. Se recomiendan al menos dos de estos linajes para demostrar la multipotencia. 
Además de estos puntos destacados, algunos ensayos sugeridos aquí pueden sustituirse, por ejemplo, el rojo de alizarina S en lugar de la tinción de Von Kossa, el shiff de ácido peritorio en lugar de azul alcián y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en lugar de citometría de flujo. 
Entre los tres tipos de tejido adiposo descritos en humanos (blanco, marrón y beige), el tejido adiposo blanco tiene la mayor fuente deMSCs 28. Este tejido se puede obtener de las regiones subcutáneas, abdominales e inguinales, como la grasa sobre el epidídimo que se describe aquí. La fragmentación física y la digestión enzimática por colagenasa utilizadas en el protocolo aquí compartido derivan la fracción vascular estromal (FSV) compuesta por muchos tipos de células, a excepción de los adipocitos, que se agotan durante el procesamiento. 
En conclusión, las principales ventajas de utilizar el tejido adiposo como fuente de MSCs incluyen su abundancia y facilidad de métodos para el aislamiento celular, asociado al potencial terapéutico de las MSCs como propiedades antiinflamatorias y regenerativas.

Las células madre mesenquimales (MSC) son células adultas multipotenciales que se diferencian en células como osteoblasto, condroblasto y adipocito 1,2. Estas células residen en varios órganos, por lo que pueden extraerse de tejidos adultos como la médula ósea, el músculo, la grasa, el folículo piloso, la raíz del diente, la placenta, la dermis, el pericondrio, el cordón umbilical, el pulmón, el hígado y el bazo 3,4.
Se han descrito los efectos de las MSCs sobre la fisiología y el sistema inmune 5,6. Estas células han sido prometedoras para el tratamiento de varias enfermedades, tanto en medicina humana como veterinaria. Las MSCs pueden controlar la inflamación y promover la angiogénesis y la homeostasis tisular a través de diferentes mecanismos, como el contacto célula-célula, los factores solubles y las pequeñas vesículas extracelulares 7,8,9,10. Además, las MSCs son células inmunoprivilegiadas capaces de sobrevivir en receptores de trasplantes alogénicos inmunológicamente incompatibles, ya que estas células muestran una baja expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I y se utilizan en la terapia celular para el trasplante alogénico11,12. La baja inmunogenicidad combinada con el potencial regenerativo hace que las MSC sean candidatas ideales para la terapia celular, como la enfermedad de injerto contra huésped (EICH)13, el lupus eritematoso sistémico (LES)14 y la esclerosis múltiple15, entreotras16,17.
A pesar de que las MSC residen en varios tejidos adultos, el tejido adiposo ofrece ventajas sobre otras fuentes, como la accesibilidad para la recolección, con una intervención quirúrgica mínima; gran número de celdas disponibles con alta tasa de expansión; y fácil expansión in vitro mediante un protocolo fácil de realizar sin necesidad de equipos específicos y materiales de bajo costo 18,19,20. Una vez extraídas, las células madre derivadas del tejido adiposo (ADSC) deben ser caracterizadas según lo establecido por la Sociedad Internacional de Terapia Celular (ISCT)21. Así, las MSC deben mostrar una morfología similar a la de los fibroblastos, adherencia al cultivo plástico, expresando un alto porcentaje (≥95%) de marcadores mesenquimales como endoglina (CD105), ecto-5'-nucleotidasa (CD73) y Thy-1 (CD90), y bajo porcentaje (≤2%) de marcadores hematopoyéticos como el antígeno común leucocitario (CD45), la fosfoglicoproteína transmembrana (CD34), la glicoproteína de membrana anclada a glicolípidos (CD14), la integrina alfa M (CD11b), la cadena alfa de la proteína asociada al complejo de antígenos de células B (CD79α) o Antígeno de superficie de linfocitos B B4 (CD19) y antígeno leucocitario humano de clase II (HLA-II). Además, se requiere una caracterización funcional y las células deben ser capaces de diferenciarse en células osteoblásticas, condroblastas o adipoblastas21.
En este trabajo se muestra cómo obtener las MSCs a partir de tejido adiposo del epidídimo mediante disociación mecánica y digestión enzimática para estudios in vitro y la caracterización morfológica preconizada por ISCT.

<table><tbody><tr><td>140 &deg; C Esterilización por alta temperatura CO2 Incubadora</td><td>RADOBIO SCIENTIFIC CO. LTD, China</td><td>C180</td><td></td></tr><tr><td>3-Isobutil-1-metilxantina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>I7018</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>PHR1748</td><td></td></tr><tr><td>Alcian Blue 8GX</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>A9186</td><td>BioReactivo, adecuado para la detección de glicoproteínas. 1% en ácido acético, pH 2.5</td></tr><tr><td>Alcohol 70%</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>65350-M</td><td>70% en agua</td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>PHR1662</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpos anti-ratón anti-CD29 FITC (Clon Ha2/5)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, EE. UU</td><td>. 555005</td><td>Funciones en la célula: Adhesión y activación, embriogénesis, Leucocitos, DC, plaquetas, mastocitos, fibroblastos y células endoteliales</td></tr><tr><td>Anticuerpos anti-ratón anti-CD34 PE (Clon RAM34)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>551387</td><td>Funciones en la célula: Factor de adhesión celular. Células madre hematopoyéticas</td></tr><tr><td>Anticuerpos anti-ratón anti-CD45 APC (Clon 30-F11)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, EE. UU</td><td>. 559864</td><td>Funciones en la célula: Ayuda en la activación de leucocitos</td></tr><tr><td>Anticuerpos anti-ratón anti-CD71 FITC (Clon C2)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, EE. UU</td><td></td><td>. 553266 Funciones en la célula: Controla la absorción de hierro durante la proliferación celular. Células proliferantes, reticulocitos y precursores Anticuerpos</td></tr><tr><td>anti-ratón anti-CD90 PerCP (Clon OX-7)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>557266</td><td>Funciones en la célula: Señalización, adhesión. Linfocito T, NK, monocito, HSC, neurona, fibroblasto</td></tr><tr><td>Ácido ascórbico</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, Estados Unidos</td><td>PHR1008</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas automáticas</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EE. UU.</td><td>4700850N</td><td>Finnpipette F1 Good Laboratory Pipetting (GLP) Kits</td></tr> de <tr><td>vaso de precipitados</td><td>No aplicable</td><td></td><td>1 unidad</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE.UU</td>. <td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular (6 pocillos)</td><td>Merck, Darmstadt, Alemania</td><td>Z707759</td><td>07 unidades estériles. Placas de cultivo de tejidos TPP</td></tr><tr><td>Placas de cultivo celular (96 pocillos. Redondo o fondo en V)</td><td>Merck, Darmstadt, Alemania</td><td>CLS353077</td><td>01 unidad estéril. Pocillos, 96, superficie tratada con cultivo de tejidos (TC), pozos transparentes de fondo redondo,</td></tr><tr><td>medio condrogénico</td> estéril <td>Tallo Pro Condrogénesis Diferenciación&ndash; Life Technologies</td><td>A1007101</td><td>TGF-&beta; 2, TGF-y beta; 3, dexametasona, insulina, transferrina, ITS, sodio-l - ascorbato, piruvato de sodio, ascorbato-2-fosfato</td></tr><tr><td>Colagenasa tipo II</td><td>Life Technologies, California, EE. UU.</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>corcho o tablero de espuma de poliestireno recubierto de aluminio</td><td>No aplicable</td><td></td><td>1 unidad</td></tr> de <tr><td>algodón</td><td>No aplicable</td><td></td><td>50 g</td></tr><tr><td>Dexametasona</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>Tijera de disección</td><td>No aplicable</td><td></td><td>03 unidades</td></tr><tr><td>estéril DPX Mountant para histología</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' Águila modificada' s medio (DMEM)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>D5523</td><td>Con 1000 mg/L de glucosa y L-glutamina, sin bicarbonato de sodio, en polvo, apto para cultivo celular</td></tr><tr><td>Eosina B</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>861006</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehído</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>47608</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>G1397</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>H3136</td><td></td></tr><tr><td>Aguja hipodérmica (0.3mm x 13mm)</td><td>No aplicable</td><td></td><td>5 unidades</td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>I0200000</td><td></td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>I3536</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>563935</td><td>70% en</td></tr><tr><td>solución de clorhidrato de ketamina-D4</td> H2O <td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>K-006</td><td>1,0 mg/mL en metanol (como base libre), material de referencia certificado, Cerilliant&reg;</td></tr><tr><td>Cámara de Neubauer</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE.UU</td><td></td><td>. BR718620 Cámara de conteo de marca BLAUBRAND Neubauer modelo. Con clips,</td></tr><tr><td>puntas de pipeta Nichiryo de doble regla (0.1&ndash; 10 &mu; L)</td> <td>Merck, Darmstadt, Alemania</td><td>Z645540</td><td>Rango de volumen 0.1&ndash; 10 &mu; L, alargado, paquete a granel. Puntas de</td></tr><tr><td>pipeta Nichiryo estériles (1&ndash; 10 mL)</td><td>Merck, Darmstadt, Alemania</td><td>Z717401</td><td>Rango de volumen 1&ndash; 10 mL, universal, paquete a granel. Puntas de</td></tr><tr><td>pipeta Nichiryo estériles (200 &mu; L)</td><td>Merck, Darmstadt, Alemania</td><td>Z645516</td><td>Volumen máximo 200 &mu; L, graduado, ministack. Aceite estéril-solución</td></tr><tr><td>de O rojo</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>O1391</td><td>0.5% en parafina de isopropanol</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>107.151</td><td>46&ndash; 48, en forma de bloque</td></tr><tr><td>Penicilina/Estreptomicina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>P4333</td><td>Solución estabilizada, con 10.000 unidades de penicilina y 10 mg de estreptomicina/mL, 0,1 &mu; m filtrado, BioReactivo, apto para cultivo celular</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato 1x (PBS).</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>P3813</td><td>Polvo, pH 7.4, para preparar soluciones de 1 L. Tubos cónicos de polipropileno balanceados y estériles</td></tr><tr><td>(15 mL)</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos de polipropileno estériles (50 mL)</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td>2 unidades</td></tr><tr><td>bisturí estéril (opcional)</td><td>No aplicable</td><td></td><td>1 unidad</td></tr><tr><td>Nitrato de plata</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>85228</td><td></td></tr><tr><td>Tiosulfato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>72049</td><td></td></tr><tr><td>Pinza quirúrgica (15 cm)</td><td>No aplicable</td><td></td><td>3 unidades</td></tr> de <tr><td>ratones machos suizos estériles (6&ndash; 8 semanas)</td><td>Bioterio, Universidad Estatal de Santa Cruz</td><td>021/22</td><td></td></tr><tr><td>jeringa (1 mL)</td><td>No aplicable</td><td></td><td>1 unidad</td></tr><tr><td>Trypan Blue Dye</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>T8154</td><td>0.4%, líquido, filtrado estéril, apto para cultivo celular</td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA (ácido etilendiaminotetraacético)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>Xilacina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU.</td><td>PHR3263</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glicerofosfato hidrato de sal disódica</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, EE. UU</td>. <td>G9422</td><td>BioUltra, adecuado para cultivo celular, adecuado para cultivo de células vegetales, &ge; 99% (valoración)</td></tr></tbody></table>

aislamiento, expansión in vitro y caracterización de células madre mesenquimales a partir de tejido adiposo epididimario de ratón

Isolation, In Vitro Expansion, and Characterization of Mesenchymal Stem Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissue

Las células madre mesenquimales (MSC) han sido ampliamente estudiadas como un nuevo enfoque terapéutico, principalmente para detener la inflamación exacerbada debido a su potencial para modular la respuesta inmune. Las MSC son células inmunoprivilegiadas capaces de sobrevivir en receptores de trasplantes alogénicos inmunológicamente incompatibles basados en la baja expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I y en el uso de terapia basada en células para el trasplante alogénico. Estas células se pueden aislar de varios tejidos, siendo los más utilizados la médula ósea y los tejidos adiposos. Proporcionamos un protocolo sencillo para aislar, cultivar y caracterizar MSC a partir de tejido adiposo epididimario de ratones. El tejido adiposo del epidídimo se extirpa quirúrgicamente, se fragmenta físicamente y se digiere con una solución de colagenasa tipo II al 0,15%. A continuación, se cultivan y expanden in vitro células madre derivadas de tejido adiposo primario (ADSC), y se realiza la caracterización fenotípica mediante citometría de flujo. También proporcionamos los pasos para diferenciar las ADSC en células osteogénicas, adipogénicas y condrogénicas, seguidas de la caracterización funcional de cada linaje celular. El protocolo proporcionado aquí se puede utilizar para experimentos in vivo y ex vivo y, como alternativa, las células madre derivadas del tejido adiposo se pueden utilizar para generar células inmortalizadas similares a las MSC.

Las células extraídas del tejido adiposo de acuerdo con el protocolo aquí presentado mostraron una morfología que coincidía con los criterios mínimos para las MSC propuestos por el ISCT. En la Figura 1 se muestra una descripción general del protocolo. Fenotípicamente, las ADSC mostraron adherencia a la morfología plástica y similar a la de los fibroblastos en los primeros días de cultivo celular (Figura 2A). Además, crecieron de forma homogénea y formaron colonias. Además, las ADSCs mostraron baja expresión de CD34 (2,12%) y CD45 (1,81%), ambos marcadores hematopoyéticos, y alta expresión de CD71 (42,6%), CD29 (74,2%) y CD90 (55,1%), todos marcadores de células mesenquimales (Figura 2B).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65722/65722fig02.jpg"> Figura 2: Caracterización fenotípica de células derivadas de tejido adiposo. (A) La morfología de las ADSC cambia de redonda a similar a un fibroblasto en los días 2, 4 y 8 de cultivo; barra de escala = 22,22 μm. (B) Histogramas de marcadores expresados (CD71, CD29 y CD90) o no (CD34 y CD45) por ASC. Esta figura ha sido reproducida con permiso de Miranda et al.24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65722/65722fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Funcionalmente, las ADSC mostraron multipotencia para diferenciarse en osteoblasto, adipoblasto y condroblasto cuando se cultivaron en medios acondicionados para cada linaje durante 14 o 21 días (Figura 3). La tinción de Von Kossa reveló nódulos mineralizados en la matriz extracelular, característicos del proceso de osteogénesis (Figura 3). La tinción con Oil-red O evidenció vacuolas lipídicas en el citoplasma de las ADSC, y la tinción con azul alcián confirmó la presencia de glicosaminoglicanos en la matriz extracelular (Figura 3). En conjunto, las características fenotípicas y funcionales han confirmado la población de células extraídas del tejido adiposo del epidídimo como MSC.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65722/65722fig03.jpg"> Figura 3: Caracterización funcional de células derivadas del tejido adiposo. Potencial multilinaje osteogénico, adipogénico y condrogénico de ADSC después de 14 y 21 días de cultivo. Barra de escala = 50 μm (panel superior), 100 μm (paneles central e inferior). Esta figura ha sido reproducida con permiso de Miranda et al.24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65722/65722fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

El tejido adiposo es una excelente fuente de células madre mesenquimales. Aquí, traemos el paso a paso de la extracción, el cultivo y la caracterización de células madre derivadas del tejido adiposo (ADSC) del tejido adiposo epididimario de ratones suizos.

Aislamiento, expansión in vitro y caracterización de células madre mesenquimales a partir de tejido adiposo epididimario de ratón

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been extensively studied as a new therapeutic approach, mainly to stop exacerbated inflammation due to their potential ...

Mi investigación se centra en las células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo como un nuevo enfoque terapéutico asociado o no a otras terapias para mejorar la inflamación de varias enfermedades. Demostramos que el uso de células madre mesenquimales adiposas junto con Praziquantel ha controlado significativamente la reacción granulomatosa en la infección por Schistosoma mansoni, destacando los beneficios de este enfoque de tratamiento combinado. Nuestro protocolo aborda la brecha de investigación en la recolección meticulosa de tejido adiposo del epidídimo bajo condiciones asépticas, que el procesamiento físico implica una agitación vigorosa, e identifica el momento óptimo para utilizar células madre derivadas del tejido adiposo.Nuestro protocolo ofrece ventajas significativas, en particular la abundante disponibilidad y la fuerza potencial para el aislamiento de células madre mesenquimales. Además, las células madre mesenquimales poseen potentes propiedades terapéuticas que incluyen capacidades antiinflamatorias y de regeneración de tejidos.

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Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video demuestra una técnica para aislar y cultivar células madre adiposas (ADSC) derivadas de la cresta neural marcadas con fluorescencia a partir de tejido adiposo del arco periaórtico murino. Tras el aislamiento, las NCADSC se detectan, se clasifican mediante la clasificación celular activada por fluorescencia y, posteriormente, se cultivan en una placa, lo que promueve la proliferación celular.

Aislamiento de células madre derivadas del tejido adiposo periaórtico murino

Se presenta un protocolo para aislar fragmentos microvasculares derivadas de tejido adiposo que representan unidades de vascularización prometedores. Se pueden aislar rápidamente, no requieren en el procesamiento vitro y, por tanto, puede ser utilizado para prevascularization de un solo paso en diferentes campos de la ingeniería de tejidos.

Aislamiento de murino tejido adiposo derivado de microvascular Fragmentos como Unidades Vascularización para ingeniería de tejidos

Este protocolo proporciona un método libre de enzimas para aislar las células madre mesenquimales de muestras de abdominoplastia y lipoaspiración utilizando un método explantado. La ausencia de enzimas duras o pasos de centrifugación proporciona células madre clínicamente relevantes que pueden utilizarse para estudios in vitro o transferirse de vuelta a la clínica.

Un método libre de enzimas para el aislamiento y la expansión de las células madre mesenquimales derivadas de adiposo humano

Este protocolo describe el enfoque técnico para aislar subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos murinos de tejido adiposo blanco intraabdominal (WAT) mediante clasificación celular activada por fluorescencia o separación inmunomagnética de perlas.

Aislamiento de subpoblaciones de células estromales adipogénicas y fibroinflamatorias de depósitos adiposos intraabdominales murinos

Presentamos un método simple para aislar células progenitoras adiposas altamente viables de las almohadillas de grasa epidídmica del ratón usando clasificación celular activada por fluorescencia.

Preparación de células progenitoras adiposas de tejidos adiposos epidídicos del ratón

Las células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo (Ad-MSC) pueden ser una fuente potencial de MSC que se diferencian en células productoras de insulina (IPC). En este protocolo, proporcionamos pasos detallados para el aislamiento y la caracterización de las MSC Ad-MSC epidídimas de ratas, seguidas de un protocolo simple y corto para la generación de IPC a partir de las mismas MSC Ad-MSC de ratas.

Aislamiento de células madre mesenquimales del tejido adiposo de rata para la diferenciación en células productoras de insulina

Este protocolo describe una metodología para aislar e identificar células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo (MSC) de ratas Sprague Dawley.

Aislamiento e identificación de células madre mesenquimales derivadas del tejido adiposo de ratas Sprague Dawley

Endoteliales que forman colonias células progenitoras (ECFCs) son una herramienta prometedora para estudiar la homeostasis vascular y la reparación.

El aislamiento y la expansión a gran escala de células humanas adultas Colonia progenitoras endoteliales formación

Este protocolo describe el aislamiento y la posterior expansión de células mesenquimales del estroma y las células endoteliales que forman colonias sin el uso de suero animal para generar pares con fines de trasplante autólogo experimental.

Aislamiento y suero animal expansión libre de cordón umbilical humano derivado de células mesenquimales del estroma (MSC) y endoteliales formadoras de colonias Células Progenitoras (ECFCs)

En este artículo se demuestra el aislamiento de las células del pulmón murino residentes madre mesenquimales (MSC pulmón), su expansión, la caracterización y análisis de las propiedades inmunomoduladoras.

Aislamiento y Caracterización de Hoechst Baja CD45 Negativo Mouse células madre mesenquimales de pulmón

Aprenda el aislamiento y cultivo de células madre mesenquimales de tejido adiposo epididimario de ratón Swiss. Este protocolo permite caracterizar ADSCs y evaluar su potencial terapéutico antiinflamatorio en enfermedades infecciosas.

Aislamiento, expansión in vitro y caracterización de células madre mesenquimales a partir de tejido adiposo epididimario de ratón (Video) | JoVE Journal

Aislamiento, expansión in vitro y caracterización de células madre mesenquimales a partir de tejido adiposo epididimario de ratón

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