Enfoques complementarios para interrogar el flujo de mitofagia en las células β pancreáticas

Este protocolo describe dos métodos para el análisis cuantitativo de la mitofagia en las células β pancreáticas: en primer lugar, una combinación de colorantes específicos de mitocondrias permeables a las células y, en segundo lugar, un indicador de mitofagia codificado genéticamente. Estas dos técnicas son complementarias y pueden implementarse en función de necesidades específicas, lo que permite flexibilidad y precisión para abordar cuantitativamente el control de calidad mitocondrial.

Nuestro protocolo describe dos métodos complementarios para estudiar el flujo de mitofagia de células beta a la resolución de una sola célula mediante citometría de flujo. El protocolo mt-Keima utiliza un indicador genético de mitofagia, mientras que el protocolo MtPhagy combina tres colorantes fluorescentes, lo que facilita la extrapolación a células difíciles de transfectar en muestras humanas. Las evaluaciones de la mitofagia mediante enfoques bioquímicos tradicionales y enfoques de imagen requieren mucho tiempo y son un desafío.

Por lo tanto, es importante desarrollar métodos nuevos, robustos y efectivos para estudiar el flujo de mitofagia en las células beta. Tanto el método mt-Keima como el método MtPhagy son evaluaciones cuantitativas que son eficientes para estudiar el flujo de mitofagia en las células beta pancreáticas. Por lo tanto, el laboratorio de Soleimanpour se centra en los diferentes mecanismos que impulsan la insuficiencia de las células beta pancreáticas y la diabetes.

Y nos enfocamos específicamente en los diferentes aspectos del ciclo de vida mitocondrial, incluida la mitofagia, para comprender cómo los defectos en la función mitocondrial impulsan el desarrollo de la diabetes.