Name: Un enfoque integral para analizar los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Aprende un método novedoso para analizar componentes celulares de coágulos sanguíneos cerebrales mediante disolución de fibrina con enzimas y tinción celular. Esta técnica libera células intactas para diagnóstico mejorado de trombosis cerebral.

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Esta investigación fue financiada por la Oficina de Ciencia y Tecnología de la ciudad de Xiamen (3502Z20227197) y la Oficina de Ciencia y Tecnología de la provincia de Fujian (No. 2019J01070, No.2021Y0027).

La investigación se realizó de acuerdo con las directrices institucionales del Comité de Ética Médica de la Universidad de Huaqiao. Los coágulos sanguíneos cerebrales se extirparon quirúrgicamente y se recogieron en el Primer Hospital de Quanzhou, afiliado a la Universidad Médica de Fujian, con el consentimiento informado de los pacientes.
1. Pretratamiento de coágulos de sangre
<ol><li>Coloque los coágulos en un plato limpio, agregue 5 ml de solución salina fisiológica con una pinza, agite el plato suavemente y retire la solución salina con una pipeta. NOTA: Repita el enjuague tres veces.</li>
	<li>Corta los coágulos en trozos más pequeños (menos de 5 mm x 5 mm x 5 mm) con una tijera. Añadir 5 ml de solución salina fisiológica, agitar el plato suavemente y retirar la solución salina con una pipeta. NOTA: Repita el enjuague tres veces. Asegúrese de que no se aspiren trozos de coágulos durante el enjuague.</li>
	<li>Transfiera los coágulos a otra placa en U limpia. NOTA: El protocolo puede pausarse aquí (almacenar la placa a 2-8 °C) y reiniciarse más tarde.</li>
</ol>2. Trombólisis
<ol><li>Prepare la solución de trabajo de sFE ajustando la concentración de sFE a 2000 U/mL con solución salina fisiológica. NOTA: El sFE se preparó de acuerdo con los protocolos bien establecidos de Tang Lab15.</li>
	<li>Añadir 300 μL de solución de trabajo de sFE en los coágulos pretratados.</li>
	<li>Realice la primera ronda de degradación.<ol><li>Incubar la mezcla de sFE y coágulos a 37 °C durante 0,5 h. NOTA: El blot tratado con suero fisiológico se estableció como control negativo. No gire la muestra sobre el agitador.</li>
		<li>Mezcle la muestra suavemente. Transfiera la parte líquida a otro tubo limpio con una pipeta limpia. NOTA: Los coágulos restantes se utilizaron para otra ronda de degradación.</li>
		<li>Centrifugar la parte líquida a 200 × g durante 5 min a 4 °C.</li>
		<li>Transfiera el sobrenadante a otro tubo limpio con una pipeta para obtener la solución de sFE recuperada.</li>
		<li>Mezclar suavemente la precipitación celular con 50 μL de solución salina fisiológica. NOTA: La mezcla de células se almacenó a 2-8 °C para su uso posterior.</li>
	</ol></li>
	<li>Realice la degradación posterior.<ol><li>Degradar los coágulos restantes (paso 2.3.2) con la solución de sFE recuperada (paso 2.3.4) a 37 °C durante 0,5 h. NOTA: Los pasos de descanso fueron los mismos que en la primera ronda de degradación. El proceso de degradación se terminaba hasta que se degradaban todos los coágulos.</li>
	</ol></li>
	<li>Realice la recolección de células.<ol><li>Prepare la muestra de células sanguíneas recogiendo la mezcla celular de cada ronda de degradación.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Tinción de Wright
<ol><li>Realizar frotis celular.<ol><li>Ajuste las celdas a una densidad de 1 x 106 células/ml.</li>
		<li>Agregue 5 μL de las células al portaobjetos de vidrio recubierto de poli-L lisina, luego úntelas con el cubreobjetos.</li>
		<li>Evapora el líquido a temperatura ambiente.</li>
	</ol></li>
	<li>Realice la tinción.<ol><li>Agregue 200 μL de colorante de Wright (consulte la Tabla de materiales) al frotis celular suavemente y agregue 600 μL de colorante B de Wright para mezclar uniformemente.  Tiñir durante 10 minutos a temperatura ambiente.</li>
		<li>Enjuaga el tinte suavemente con agua limpia. NOTA: El frotis de células teñidas se puede almacenar a temperatura ambiente para su uso posterior.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar imágenes microscópicas.<ol><li>Examine las células teñidas con un microscopio óptico (consulte la Tabla de materiales).</li>
	</ol></li>
</ol>4. Examen de sangre de rutina
<ol><li>Ajuste las celdas a una densidad de 1 x 106 células/ml.</li>
	<li>Analice los componentes celulares como plaquetas, eritrocitos, glóbulos blancos, linfocitos, neutrófilos, monocitos, eosinófilos, basófilos y granulocitos inmaduros utilizando un analizador de autohematología de acuerdo con las instrucciones del fabricante (ver Tabla de materiales).</li>
</ol>

Un método basado en enzimas fibrinolíticas para estudiar los componentes de las células trombosas cerebrales

<ol><li>Park, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Edoxaban+versus+dual+antiplatelet+therapy+for+leaflet+thrombosis+and+cerebral+thromboembolism+after+TAVR%3A+The+ADAPT-TAVR+Randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial.</a> Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).</li>
<li>Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+sinus+thrombosis+incidence+is+higher+than+previously+thought%3A+a+retrospective+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous sinus thrombosis incidence is higher than previously thought: a retrospective population-based study.</a> Stroke. 47 (9), 2180-2182 (2016).</li>
<li>Sacco, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+updated+definition+of+stroke+for+the+21st+century%3A+a+statement+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An updated definition of stroke for the 21st century: a statement for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44 (7), 2064-2089 (2013).</li>
<li>Thalin, C., Hisada, Y., Lundstrom, S., Mackman, N., Wallen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps%3A+villains+and+targets+in+arterial%2C+venous%2C+and+cancer-associated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps: villains and targets in arterial, venous, and cancer-associated thrombosis.</a> Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 39 (9), 1724-1738 (2019).</li>
<li>Mocsai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li>
<li>Dhanesha, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKM2+promotes+neutrophil+activation+and+cerebral+thromboinflammation%3A+therapeutic+implications+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">PKM2 promotes neutrophil activation and cerebral thromboinflammation: therapeutic implications for ischemic stroke.</a> Blood. 139 (8), 1234-1245 (2022).</li>
<li>Ducroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombus+neutrophil+extracellular+traps+content+impair+tpa-induced+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Thrombus neutrophil extracellular traps content impair tpa-induced thrombolysis in acute ischemic stroke.</a> Stroke. 49 (3), 754-757 (2018).</li>
<li>Solomon, C., Ranucci, M., Hochleitner, G., Schochl, H., Schlimp, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+methodology+for+calculating+platelet+contribution+to+clot+strength+%28platelet+component%29+in+thromboelastometry+and+thrombelastography%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Assessing the methodology for calculating platelet contribution to clot strength (platelet component) in thromboelastometry and thrombelastography.</a> Anesthesia and Analgesia. 121 (4), 868-878 (2015).</li>
<li>Daraei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+fiber+diameter+and+porosity+measurements+of+plasma+clots+in+scanning+electron+microscopy+images%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automated fiber diameter and porosity measurements of plasma clots in scanning electron microscopy images.</a> Biomolecules. 11 (10), 1536(2021).</li>
<li>Abbasi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+thrombus+composition+in+thrombectomy+stroke+patients+with+longer+time+to+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Diverse thrombus composition in thrombectomy stroke patients with longer time to recanalization.</a> Thrombosis Research. 209, 99-104 (2022).</li>
<li>C W Francis, a, Marder, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+clot+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Concepts of clot lysis.</a> Annual Review of Medicine. 37 (1), 187-204 (1986).</li>
<li>Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).</li>
<li>Fotso Fotso, A., Drancourt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Diagnosis+of+tick-borne+african+relapsing+fevers%3A+latest+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Laboratory Diagnosis of tick-borne african relapsing fevers: latest developments.</a> Front Public Health. 3, 254(2015).</li>
<li>Liou, G. Y., Byrd, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+bioliquid+markers+for+pancreatic+cancer%3A+What+we+have+vs.+what+we+need%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic bioliquid markers for pancreatic cancer: What we have vs. what we need.</a> Cancers (Basel). 15 (9), 2446(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> Journal of Visualized Experiments. 196, e65631(2023).</li>
<li>Ge, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+antithrombotic+protease+from+marine+worm+Sipunculus+Nudus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Novel antithrombotic protease from marine worm Sipunculus Nudus.</a> International Journal Of Molecular Sciences. 19 (10), 3023(2018).</li>
<li>Talukder, M. A., Menyuk, C. R., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+between+whole+cells+and+cell+debris+using+surface+plasmon+coupled+emission%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Distinguishing between whole cells and cell debris using surface plasmon coupled emission.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1977-1991 (2018).</li>
<li>Shapiro, D. J., Hicks, L. A., Pavia, A. T., Hersh, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+prescribing+for+adults+in+ambulatory++care+in+the+USA%2C+2007-09%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antibiotic prescribing for adults in ambulatory care in the USA, 2007-09.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (1), 234-240 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.

El sFE es un agente fibrinolítico que puede degradar la fibrina de forma directa y eficaz12,16. Aquí, el sFE se empleó para degradar la fibrina reticulada de los coágulos sanguíneos cerebrales, liberar las células encerradas dentro de los coágulos y analizar los componentes celulares de los coágulos cualitativa y cuantitativamente. Los datos de la microscopía y el examen de sangre de rutina indicaron que las células encerradas se liberaron de los coágulos de sang...

La enfermedad cerebrovascular es una de las tres principales enfermedades que pueden amenazar la salud humana, entre las cuales la enfermedad cerebrovascular isquémica representa más del 80%. La trombosis cerebral y la trombosis venosa cerebral son las enfermedades cerebrovasculares isquémicas más preocupantes en la actualidad, causadas principalmente por coágulos sanguíneos cerebrales 1,2. Si el tratamiento no se realiza adecuadamente, tendrá altas tasas de discapacidad y mortalidad y una alta tasa de recurrencia después del alta3.
Recientemente, un número creciente de estudios ha demostrado que los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales están estrechamente correlacionados con el diagnóstico, tratamiento y pronóstico de la trombosis cerebral 4,5,6. Por lo tanto, la disponibilidad de datos sobre la composición de los trombos, especialmente los componentes celulares, es importante para el diagnóstico clínico y el tratamiento. Desafortunadamente, los métodos disponibles actualmente no pueden analizar exhaustivamente el componente del coágulo de sangre cuantitativa y cualitativamente. Por ejemplo, la tinción in situ basada en Martius Scarlett Blue solo puede estudiar los glóbulos rojos/blancos de ciertas rebanadas del coágulo7. La tinción in situ basada en la inmunohistoquímica (IHQ) solo puede estudiar componentes sanguíneos limitados de ciertos cortes del coágulo utilizando sus anticuerpos8. Los métodos basados en imágenes microscópicas solo se ocupan de la estructura específica del coágulo9. Además, todos estos métodos son laboriosos y requieren mucho tiempo10. Hasta la fecha, no se han descrito los procedimientos para estudiar cuantitativa y cualitativamente los componentes de las células trombos cerebrales. Es ampliamente reconocido que la fibrina reticulada envuelve firmemente las células sanguíneas en los coágulos11. En consecuencia, la degradación específica de la fibrina reticulada y la liberación de las células intactas es fundamental para el análisis preciso de los componentes celulares.
Trabajos previos aislaron una enzima fibrinolítica de Sipunculus nudus (sFE), que puede degradar la fibrina de manera específica y rápida12. En este trabajo, se propuso un método para analizar los componentes celulares de los trombos cerebrales basado en la actividad única de sFE. Este protocolo utilizó sFE para degradar primero la fibrina de los coágulos y luego analizó los componentes celulares mediante tinción de Wright y análisis de sangre de rutina13,14. De acuerdo con este método, los componentes celulares de los trombos cerebrales pueden ser estudiados cuantitativa y cualitativamente. Este protocolo simple y efectivo podría aplicarse para el análisis de componentes celulares de otros coágulos sanguíneos.

<table><tbody><tr><td>Placa de reacción de aglutinación</td><td>ROTEST</td><td>RTB-4003</td><td></td></tr><tr><td>Analizador de hematología automático</td><td>SYSMEX</td><td>XNB2</td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador automático de vapor de presión vertical&nbsp;</td><td>SANYO</td><td>MLS-3750</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga (1,5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Banco limpio</td><td>AIRTECH</td><td>BLB-1600</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de temperatura constante</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Plato de cultivo (100 mm)</td><td>Horno</td> de <td></td> calentamiento y secado de la serie NEST 704001 <td></td></tr><tr><td>DHG&nbsp;</td><td>SENXIN</td><td>DGG-9140AD</td><td></td></tr><tr><td>Balanza analítica electrónica</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de filtro (0.22 y micro; m)</td> <td>Millex GP SLGP033NK</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro Centrífuga Refrigerada &nbsp;</td><td>Portaobjetos</td> de microscopio Cence <td>H1650-W</td><td></td></tr><tr><td></td><td>CITOGLAS</td><td>01-30253-50</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Referencia</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>solución salina normal</td><td>Microscopio óptico CISEN</td><td>H37022337</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td>ECLIPSE E100</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>solución salina tamponada con fosfato</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>Punta de pipeta (1 mL )</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Punta de pipeta (200 &micro; L)</td><td>Pipeta Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(1 mL)</td>Pipeta de <td>ZY18723</td><td></td> <td>Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>(200 y micro; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Bisturí</td><td>MARTOR</td><td>23111</td><td></td></tr><tr><td>Oscilador de vórtice de tamaño pequeño</td><td>Kylin-Bell</td><td>VORTEX KB3</td><td></td></tr><tr><td>Pinza</td><td>hística</td><td>HKQS-180</td><td></td></tr><tr><td>Wright Solución de tinción</td><td>Beyotime</td><td>C0135-500ml</td><td></td></tr></tbody></table>

un enfoque integral para analizar los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales

A Comprehensive Approach to Analyze the Cell Components of Cerebral Blood Clots

La trombosis cerebral, un coágulo de sangre en una arteria o vena cerebral, es el tipo más común de infarto cerebral. El estudio de los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales es importante para el diagnóstico, el tratamiento y el pronóstico. Sin embargo, los enfoques actuales para estudiar los componentes celulares de los coágulos se basan principalmente en la tinción in situ , que no es adecuada para el estudio exhaustivo de los componentes celulares porque las células están firmemente envueltas en los coágulos. Estudios anteriores han aislado con éxito una enzima fibrinolítica (sFE) de Sipunculus nudus, que puede degradar la fibrina reticulada directamente, liberando los componentes celulares. Este estudio estableció un método integral basado en el sFE para estudiar los componentes celulares del trombo cerebral. Este protocolo incluye la disolución de coágulos, la liberación de células, la tinción de células y el examen de sangre de rutina. De acuerdo con este método, los componentes celulares podrían estudiarse cuantitativa y cualitativamente. Se muestran los resultados representativos de los experimentos realizados con este método.

En la etapa inicial del proceso de degradación, se encontró que los coágulos de sangre tenían una estructura compacta roja y la solución de trabajo era incolora. Después de la incubación durante 30 minutos, la solución de trabajo se volvió de color rojo claro, lo que indicaba que las células sanguíneas cruzadas se liberaron en la solución de trabajo. La mayoría de los coágulos se disolvieron al alargar el tiempo de incubación a 5 h, y la solución de trabajo se volvió de color rojo claro. Por el contrario, no hubo cambios...

Este estudio describe un método rápido y eficaz para el análisis de componentes celulares de coágulos sanguíneos cerebrales a través de la disolución de coágulos, la tinción celular y el examen de sangre de rutina.

Un enfoque integral para analizar los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...

Nuestra investigación se centra principalmente en la trombosis cerebral. Muchos estudios han demostrado que los componentes de las células del coágulo sanguíneo cerebral se correlacionan con el diagnóstico, el tratamiento y el pronóstico de la trombosis cerebral. En este estudio, establecimos un método novedoso para el análisis de los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales.Este desafío en el análisis de los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales es la liberación de todo el cuerpo de los coágulos sanguíneos. Esto se debe a que los coágulos se filtraron fibrosamente y las células sanguíneas en los coágulos. Los enfoques dirigidos para iniciar los componentes celulares de los coágulos se realizan mejor en C2 de pie, lo que no es adecuado para el inicio completo de los componentes celulares.Por el contrario, nuestro método permite esclarecer tanto cuantitativa como cualitativamente los componentes celulares de la pendiente cerebral. Nuestro método utiliza una enzima fibrinolítica para retrasar la fibraformación de los coágulos sanguíneos, liberando las células intactas. Los datos obtenidos del análisis de los componentes celulares facilitarán e

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Fuente: Kim, D., et. al. Combinación de imágenes fluorescentes de infrarrojo cercano y tomografía microcomputarizada para la visualización directa de tromboembolios cerebrales. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la visualización de trombos cerebrales en ratones utilizando imágenes de microtomografía computarizada (micro-CT). A un modelo de ratón con trombo cerebral se le inyectan nanopartículas de oro dirigidas a la fibrina que actúan como agente de contraste. El ratón se coloca en la cama...

Visualización de un trombo cerebral en un ratón mediante imágenes de microtomografía computarizada

En este manuscrito se presentan técnicas experimentales, incluyendo la preparación de sangre, la microscopía confocal y el análisis de la tasa de lisis, para examinar las diferencias morfológicas entre las estructuras normales y anormales de los coágulos debidas a estados enfermos.

Técnicas Experimentales y de imagen para examinar la estructura coágulo de fibrina en normales y enfermos Unidos

Cerebro células mieloides caracterización después del accidente cerebrovascular se puede realizar por estereología utilizando el método del fraccionador óptico, o por un análisis de citometría de flujo de cerebro leucocitos suspensiones. Ambas son técnicas útiles para realizar una distinción fenotípica precisa de los principales subconjuntos de células mieloides que se encuentran en el cerebro isquémico.

Estereológico y Citometría de Flujo Caracterización de leucocitos subpoblaciones en Modelos de transitorios o isquemia cerebral permanente

Este protocolo describe la aplicación de la tomografía combinado fluorescente en el infrarrojo cercano (NIRF) de formación de imágenes y micro-computarizada (microCT) para la visualización de tromboembolia cerebral. Esta técnica permite la cuantificación de la carga de trombo y la evolución. La técnica de imagen NIRF imagina y marcado con fluorescencia de trombos en el cerebro escindido, mientras que la técnica microCT visualiza trombo dentro de animales vivos utilizando nanopartículas de oro-.

Imagen Fluorescente combinado del infrarrojo cercano y la tomografía computarizada-Micro para visualizar de manera directa tromboembolia cerebral

El objetivo de este artículo es presentar un método que permite una reconstrucción 3 dimensional del árbol cerebrovascular en ratones después micro tomografía computada y determinación de volúmenes de segmentos de todo buque que pueden utilizarse para cuantificar el vasoespasmo cerebral en modelos murinos de hemorragia subaracnoidea.

Un método volumétrico para la cuantificación de vasoespasmo Cerebral en un modelo murino de hemorragia subaracnoidea

Presentamos un modelo de enfermedad vascular in vitro para investigar interacciones sanguíneas enteras con endotelio derivado del paciente. Este sistema permite el estudio de las propiedades trombogénicas de las células endoteliales primarias en diversas circunstancias. El método es especialmente adecuado para evaluar la trombogenicidad in situ y la terapia de anticoagulación durante diferentes fases de la coagulación.

In Vitro Microfluidic Disease Model to Study Whole Blood-Endothelial Interactions and Blood Clot Dynamics in Real-Time

Este protocolo presenta métodos para caracterizar la respuesta neuroinflamatoria y hemodinámica a la lesión cerebral traumática leve e integrar estos datos como parte de un análisis de sistemas multivariante utilizando regresión parcial de mínimos cuadrados.

Análisis de sistemas de la respuesta neuroinflamatoria y hemodinámica a la lesión cerebral traumática

La fibrina es responsable de la formación de coágulos durante la hemostasia y la trombosis. Los ensayos de turbidez y tromboelastograhy (TEG) se pueden utilizar como herramientas sinérgicas que proporcionan una evaluación complementaria de un coágulo. Estas dos técnicas juntas pueden dar más información sobre cómo las condiciones de coagulación afectan la formación de coágulos fibrina.

Aprovechar la turbidez y la tromboelastografía para la caracterización complementaria del coágulo

Los modelos tradicionales de ictus fototrombótico (SPT) inducen principalmente agregados plaquetarios densos de alta resistencia al tratamiento lítico con activadores tisulares del plasminógeno (tPA). Aquí se introduce un modelo de PTS murino modificado mediante la coinyección de trombina y colorante fotosensible para la fotoactivación. El modelo de SPT potenciado con trombina produce coágulos mixtos de plaquetas:fibrina y es muy sensible a la trombólisis tPA.

Un modelo de accidente cerebrovascular fototrombótico enriquecido con fibrina y sensible al tPA

Aquí, describimos el método para establecer un modelo de cultivo celular triple de la barrera hematoencefálica basado en células endoteliales microvasculares primarias del cerebro humano, astrocitos y pericitos. Este modelo multicelular es adecuado para estudios de disfunción de unidades neurovasculares durante el ictus isquémico in vitro o para el cribado de candidatos a fármacos.

Un modelo triple de cultivo celular primario de la barrera hematoencefálica humana para estudiar el accidente cerebrovascular isquémico in vitro

Este trabajo describe un ensayo microfluídico que utiliza el esfuerzo cortante para desencadenar la formación de trombos en sangre y caracteriza el trombo mediante múltiples dimensiones de lectura. El ensayo puede medir la tendencia protrombótica de las muestras de sangre y, por tanto, es útil en el diagnóstico de enfermedades, el descubrimiento de fármacos, así como en estudios mecanicistas básicos relacionados con la trombosis.

Ensayo de Perfilado de Trombo: Una plataforma basada en microfluídica para caracterizar de forma exhaustiva la trombogénesis biomecánica

Aprende un método novedoso para analizar componentes celulares de coágulos sanguíneos cerebrales mediante disolución de fibrina con enzimas y tinción celular. Esta técnica libera células intactas para diagnóstico mejorado de trombosis cerebral.

Un enfoque integral para analizar los componentes celulares de los coágulos sanguíneos cerebrales

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