Name: Una herramienta para crear automáticamente espacios libres de células estables y reproducibles para mejorar la fiabilidad del ensayo de cicatrización de heridas celulares (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: Aprende a utilizar un rascador celular innovador para ensayos de cicatrización que mejora la reproducibilidad y preserva la integridad celular. Este método validado con ensayo EdU aumenta la supervivencia y proliferación celular.

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<meta charset="utf8"></head><body>Innovación de un raspador de células mejorado para el herido de células mediante el análisis de requisitos del usuario

<ol><li>Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Compr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cell migration.</a> Compr Physiol. 2 (4), 2369-2392 (2012).</li>
<li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-enhanced+cell+migration%2Finvasion+process%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oncol+Hematol%22%5BJournal%5D)">Radiation-enhanced cell migration/invasion process: a review.</a> Crit Rev Oncol Hematol. 92 (2), 133-142 (2014).</li>
<li>Verbeek, B. S., Adriaansen-Slot, S. S., Vroom, T. M., Beckers, T., Rijksen, G. J. F. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+EGFR+and+c-erbB2+causes+enhanced+cell+migration+in+human+breast+cancer+cells+and+NIH3T3+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Overexpression of EGFR and c-erbB2 causes enhanced cell migration in human breast cancer cells and NIH3T3 fibroblasts.</a> FEBS Lett. 425 (1), 145-150 (1998).</li>
<li>Vaideeswar, P., Aswani, Y., Damani, S., Singaravel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+microvascular+metastases+in+cervical+carcinoma%3A+A+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22J+Postgrad+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary microvascular metastases in cervical carcinoma: A case series.</a> J Postgrad Med. 66 (3), 155-158 (2020).</li>
<li>Liang, Y., Zhang, H., Song, X., Yang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+heterogeneity+of+breast+cancer%3A+Molecular+mechanism+and+potential+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Metastatic heterogeneity of breast cancer: Molecular mechanism and potential therapeutic targets.</a> Semin Cancer Biol. 60, 14-27 (2020).</li>
<li>Sasaki, R., Osaki, M., Okada, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-based+diagnosis+and+treatment+of+metastatic+human+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-based diagnosis and treatment of metastatic human osteosarcoma.</a> Cancers (Basel). 11 (4), 553(2019).</li>
<li>Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+tumor+microenvironments%3A+defining+the+migratory+itinerary+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells.</a> Gene Ther. 15 (10), 730-738 (2008).</li>
<li>Zhang, M., Li, H., Ma, H., Qin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+microfluidic+strategy+for+cell+migration+assay+in+an+in+vitro+wound-healing+model%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">A simple microfluidic strategy for cell migration assay in an in vitro wound-healing model.</a> Wound Repair Regen. 21 (6), 897-903 (2013).</li>
<li>Yue, P. Y., Leung, E. P., Mak, N., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration%2Fwound+healing+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simplified method for quantifying cell migration/wound healing in 96-well plates.</a> J Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li>
<li>Roch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+evaluation+of+polystyrene+and+poly+%28ether+imide%29+cell+culture+inserts+with+different+roughness%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Hemorheol+Microcirc%22%5BJournal%5D)">Immunological evaluation of polystyrene and poly (ether imide) cell culture inserts with different roughness.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 52 (2-4), 375-389 (2012).</li>
<li>Jonkman, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+introduction+to+the+wound+healing+assay+using+live-cell+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Adh+Migr%22%5BJournal%5D)">An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy.</a> Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).</li>
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<li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reuse+of+cell+culture+inserts+for+in+vitro+human+primary+airway+epithelial+cell+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell%22%5BJournal%5D)">Reuse of cell culture inserts for in vitro human primary airway epithelial cell studies.</a> Am J Respir Cell. 64 (6), 760-764 (2021).</li>
<li>Veludo-de-Oliveira, T. M., Ikeda, A. A., Campomar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discussing+laddering+application+by+the+means-end+chain+theory%5BTitle%5D)+AND+%22Qualit+Rep%22%5BJournal%5D)">Discussing laddering application by the means-end chain theory.</a> Qualit Rep. 11 (4), 626-642 (2006).</li>
<li>Yang, T., Yang, F., Men, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendation+content+matters%21+Exploring+the+impact+of+the+recommendation+content+on+consumer+decisions+from+the+means-end+chain+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Info+Manage%22%5BJournal%5D)">Recommendation content matters! Exploring the impact of the recommendation content on consumer decisions from the means-end chain perspective.</a> Int J Info Manage. 68, 102589(2023).</li>
<li>Sadeghlou, S., Emami, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Residential+preferences+and+satisfaction%3A+a+qualitative+study+using+means-end+chain+theory%5BTitle%5D)+AND+%22J+Housing+Built+Env%22%5BJournal%5D)">Residential preferences and satisfaction: a qualitative study using means-end chain theory.</a> J Housing Built Env. 38, 1711-1734 (2023).</li>
<li>Pieters, R., Baumgartner, H., Allen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+means-end+chain+approach+to+consumer+goal+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Res+Market%22%5BJournal%5D)">A means-end chain approach to consumer goal structures.</a> Int J Res Market. 12 (3), 227-244 (1995).</li>
<li>Valette-Florence, P., Rapacchi, B. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvements+in+means-end+chain+analysis%3A+using+graph+theory+and+correspondence+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Advert+Res%22%5BJournal%5D)">Improvements in means-end chain analysis: using graph theory and correspondence analysis.</a> J Advert Res. 31, 30-45 (1991).</li>
<li>Nunkoo, R., Ramkissoon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+the+means-end+chain+theory+and+the+laddering+technique+to+the+study+of+host+attitudes+to+tourism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sustain+Tourism%22%5BJournal%5D)">Applying the means-end chain theory and the laddering technique to the study of host attitudes to tourism.</a> J Sustain Tourism. 17 (3), 337-355 (2009).</li>
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<li>Katoh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Test-retest+reliability+of+isometric+ankle+plantar+flexion+strength+measurement+performed+by+a+hand-held+dynamometer+considering+fixation%3A+examination+of+healthy+young+participants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Ther+Sci%22%5BJournal%5D)">Test-retest reliability of isometric ankle plantar flexion strength measurement performed by a hand-held dynamometer considering fixation: examination of healthy young participants.</a> J Phys Ther Sci. 34 (6), 463-466 (2022).</li>
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<li>Cross, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCross%2C+N+%22Engineering+design+methods%3A+strategies+for+product+design%22">Engineering design methods: strategies for product design</a>. , John Wiley & Sons. (2021).</li>
<li>Otto, K., Wood, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOtto%2C+K+%22Product+design%3A+techniques+in+reverse+engineering+and+new+product+development%22">Product design: techniques in reverse engineering and new product development</a>. , Pearson. (2001).</li>
<li>Tariq, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gefitinib+inhibits+M2-like+polarization+of+tumor-associated+macrophages+in+Lewis+lung+cancer+by+targeting+the+STAT6+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Gefitinib inhibits M2-like polarization of tumor-associated macrophages in Lewis lung cancer by targeting the STAT6 signaling pathway.</a> Acta Pharmacol Sin. 38 (11), 1501-1511 (2017).</li>
<li>Rahimi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9-mediated+knockout+of+Lcn2+effectively+enhanced+CDDP-induced+apoptosis+and+reduced+cell+migration+capacity+of+PC3+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9-mediated knockout of Lcn2 effectively enhanced CDDP-induced apoptosis and reduced cell migration capacity of PC3 cells.</a> Life Sci. 231, 116586(2019).</li>
<li>Cormier, N., Yeo, A., Fiorentino, E., Paxson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+wound+scratch+assay+to+detect+changes+in+murine+mesenchymal+stromal+cell+migration+after+damage+by+soluble+cigarette+smoke+extract%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract.</a> J Vis Exp. (106), e53414(2015).</li>
<li>Pinto, B. I., Cruz, N. D., Lujan, O. R., Propper, C. R., Kellar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+scratch+assay+to+demonstrate+effects+of+arsenic+on+skin+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration.</a> J Vis Exp. (144), e58838(2019).</li>
<li>Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Wound healing assay.</a> Methods Mol Biol. 294, 23-29 (2005).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>CCK-8 Kit</td><td>Beyotime Company, China</td><td>C0037</td><td></td></tr><tr><td>sistema de microscopio digital</td><td>Olympus</td><td>IX81</td><td></td></tr><tr><td>suero fetal bovino</td><td>Gibco, EE. UU</td>. <td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>HOS&nbsp;</td><td>Procell Ciencias de la Vida & Tecnología Co., Ltd</td><td>CL-0360</td><td></td></tr><tr><td>Image-Pro Plus</td><td>Media Cybernetics</td><td>versión 6.0</td><td></td></tr><tr><td>KeyShot</td><td>Luxion</td><td>versión 11.0</td><td>software de renderizado 3D</td></tr> lector de <tr><td>microplacas</td><td>BioTek, alemán</td><td>ELX808</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium</td><td>Gibco, EE. UU.</td><td>11095080</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de coincidencia Pantone</td><td></td><td></td><td>Combinación de colores comerciales</td></tr><tr><td>penicilina-estreptomicina</td><td>Beyotime Company, China</td><td>ST488</td><td></td></tr><tr><td>Photoshop</td><td>Adobe</td><td></td><td>software de fotografía y diseño</td></tr><tr><td>Rhinoceros 3D</td><td>Robert McNeel & Asociados</td><td>versión 7.0</td><td>software de diseño 3D</td></tr><tr><td>TC20 Contador de células automatizado</td><td>Bio-Rad</td><td>TC20</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Cytiva&nbsp; HyClone, Estados Unidos</td><td>SH30042.01</td><td></td></tr></tbody></table>

una herramienta para crear automáticamente espacios libres de células estables y reproducibles para mejorar la fiabilidad del ensayo de cicatrización de heridas celulares

A Tool to Automatically Create Stable and Reproducible Cell-free Gaps for Improving the Reliability of Cell Wound Healing Assay

Una herramienta para crear automáticamente espacios libres de células estables y reproducibles para mejorar la fiabilidad del ensayo de cicatrización de heridas celulares

The reliability of cellular migration measurement in wound healing assays is frequently undermined by the prevalent methodological instability, i.e., ...

a-tool-to-automatically-create-stable-reproducible-cell-free-gaps-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video describe un ensayo de cicatrización de heridas de cocultivo sin contacto para evaluar la capacidad migratoria de mioblastos murinos. Esto ayuda a comprender los componentes de envío y recepción de señales de las interacciones de señalización Wnt paracrinas no canónicas in vitro.

Ensayo de heridas para evaluar la capacidad migratoria de mioblastos murinos en cocultivo

De uso general, se describen métodos muy accesibles para el examen de la migración celular y la invasión in vitro. El primer método es el ensayo de cierre de la herida de células que mide la motilidad celular. El segundo método es la migración y la invasión de ensayo Transwell que evalúa la quimiotaxis y la capacidad invasiva de las células.

En la migración celular y la invasión ensayos in vitro

Esta presentación demuestra un método mediante el cual la electroporación de células adherentes y cultivadas se utiliza para el estudio de la comunicación intercelular y de unión, mientras las células crecen en un portaobjetos recubierto con óxido de indio-estaño conductor y transparente.

Un ensayo funcional para Gap Junctional examen; La electroporación de células adherentes de indio-óxido de estaño

A continuación, se presenta un protocolo para realizar un ensayo de migración celular semi-alto rendimiento en una placa de cultivo celular de 96 pocillos. Este protocolo es un método rápido, simple y económico para crear heridas arañazos consistentes en una monocapa de células.

Un dispositivo para realizar la migración de células / Curación de Heridas en una placa de 96 pocillos

Este manuscrito describe cómo incisión-como lesiones sobre monocapas de células epiteliales cultivadas convenientemente modelo herida curativo en vitro, permitiendo la proyección de imagen de confocal o microscopia de la exploración del laser, y que puede proporcionar alta calidad datos cuantitativos y cualitativos para el estudio de comportamiento de la célula y los mecanismos implicados en la migración.

Métodos basados en microscopía para la evaluación de la migración de células epiteliales durante la cicatrización de la herida In Vitro

Aquí, presentamos un protocolo para evaluar el efecto de péptidos sobre la migración de células epiteliales bronquiales. Este método permite la obtención de datos cuantitativos sobre la velocidad de cierre herida de migración celular rápida y altamente reproducible.

Una novela In Vitro de la herida curativa ensayo para evaluar la migración de la célula

Aquí describimos un procedimiento para probar la migración la célula en vitro con un microscopio de cámara óptica automatizada. El ensayo de rayado ha sido ampliamente utilizado donde el cierre de la raya es seguido por un período determinado. El microscopio óptico permite la detección confiable y barata de migración de la célula.

Optimizado el ensayo de rayado para In Vitro pruebas de migración de la célula con una cámara óptica automatizada

El actual protocolo describe un método integrado de investigación migración de la célula de cáncer y la invasión en una única plataforma en tiempo real, proporcionando una opción fácilmente reproducible y eficiente para estudiar la morfología y movilidad de la célula.

Un flujo de trabajo Simple migración/invasión usando a un sensor automatizado de células vivas

Aquí, presentamos un protocolo para un ensayo de arañazos in vitro utilizando fibroblastos primarios y para un ensayo de cicatrización de heridas de piel in vivo en ratones. Ambos ensayos son métodos sencillos para evaluar la cicatrización in vitro e in vivo de heridas.

Ensayo de migración de arañazos y cámara dorsal Skinfold para análisis In Vitro e In Vivo de sanación de heridas

Este estudio presenta dos técnicas experimentales cruciales: la construcción de un modelo de herida murina para evaluar el cierre de la herida y la preparación de suspensiones unicelulares de piel murina para preservar la viabilidad celular.

Modelos de heridas en ratones y preparación de suspensiones de células únicas

Aprende a utilizar un rascador celular innovador para ensayos de cicatrización que mejora la reproducibilidad y preserva la integridad celular. Este método validado con ensayo EdU aumenta la supervivencia y proliferación celular.

Una herramienta para crear automáticamente espacios libres de células estables y reproducibles para mejorar la fiabilidad del ensayo de cicatrización de heridas celulares (Video) | JoVE Journal

Una herramienta para crear automáticamente espacios libres de células estables y reproducibles para mejorar la fiabilidad del ensayo de cicatrización de heridas celulares

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