Name: Generación de iTenocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas a través de la sobreexpresión combinada de escleraxis y la tensión uniaxial 2D (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T13:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 48 s
Description: Aprende a generar iTenocitos a partir de células madre pluripotentes inducidas mediante la sobreexpresión de Scleraxis y estiramiento uniaxial en bioreactor 2D. Este método mejora la diferenciación tenogénica para aplicaciones en ingeniería de tejidos tendinosos.

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Este estudio fue parcialmente apoyado por el NIH/NIAMS K01AR071512 y CIRM DISC0-14350 a Dmitriy Sheyn. Los dos plásmidos de empaquetamiento de lentivirus fueron un regalo del laboratorio Simon Knott (Departamento de Ciencias Biomédicas, Centro Médico Cedars-Sinai).

Aprovechamiento de los iTenocitos derivados de iPSC para una terapia eficaz basada en células

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<li>Shukunami, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scleraxis+is+a+transcriptional+activator+that+regulates+the+expression+of+Tenomodulin%2C+a+marker+of+mature+tenocytes+and+ligamentocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Scleraxis is a transcriptional activator that regulates the expression of Tenomodulin, a marker of mature tenocytes and ligamentocytes.</a> Scientific Reports. 8 (1), 3155(2018).</li>
<li>Huang, A. H., Lu, H. H., Schweitzer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+tendon+cell+fate+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of tendon cell fate during development.</a> Journal of Orthopaedic Research. 33 (6), 800-812 (2015).</li>
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<li>Yang, G., Rothrauff, B. B., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tendon+and+ligament+regeneration+and+repair%3A+clinical+relevance+and+developmental+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+Part+C%3A+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Tendon and ligament regeneration and repair: clinical relevance and developmental paradigm.</a> Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 99 (3), 203-222 (2013).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+loading+models+for+tendon+mechanobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">In vitro loading models for tendon mechanobiology.</a> Journal of Orthopaedic Research. 36 (2), 566-575 (2018).</li>
<li>Wu, S. Y., Kim, W., Kremen, T. J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cellular+strain+models+of+tendon+biology+and+tenogenic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">In vitro cellular strain models of tendon biology and tenogenic differentiation.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 826748(2022).</li>
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<li>Tatullo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+influence+of+tissue+culture+plates+and+extracellular+matrix+on+mesenchymal+stem+cell+behavior%3A+A+topical+review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Immunopathology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Mechanical influence of tissue culture plates and extracellular matrix on mesenchymal stem cell behavior: A topical review.</a> International Journal of Immunopathology and Pharmacology. 29 (1), 3-8 (2016).</li>
<li>Ding, S., Kingshott, P., Thissen, H., Pera, M., Wang, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+human+mesenchymal+and+pluripotent+stem+cell+behavior+using+biophysical+and+biochemical+cues%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Modulation of human mesenchymal and pluripotent stem cell behavior using biophysical and biochemical cues: A review.</a> Biotechnology and Bioengineering. 114 (2), 260-280 (2017).</li>
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<li>Pryce, B. A., Brent, A. E., Murchison, N. D., Tabin, C. J., Schweitzer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+tendon+reporters%2C+ScxGFP+and+ScxAP%2C+using+regulatory+elements+of+the+scleraxis+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic tendon reporters, ScxGFP and ScxAP, using regulatory elements of the scleraxis gene.</a> Developmental Dynamics. 236 (6), 1677-1682 (2007).</li>
<li>Stewart, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-delivered+stable+gene+silencing+by+RNAi+in+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells.</a> RNA. 9 (4), 493-501 (2003).</li>
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<li>Bourin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+from+the+adipose+tissue-derived+stromal+vascular+fraction+and+culture+expanded+adipose+tissue-derived+stromal%2Fstem+cells%3A+a+joint+statement+of+the+International+Federation+for+Adipose+Therapeutics+and+Science+%28IFATS%29+and+the+International+Society+for+Cellular+Therapy+%28ISCT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and culture expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells: a joint statement of the International Federation for Adipose Therapeutics and Science (IFATS) and the International Society for Cellular Therapy (ISCT).</a> Cytotherapy. 15 (6), 641-648 (2013).</li>
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<li>Bloor, A. J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+safety+and+efficacy+of+iPSC-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+acute+steroid-resistant+graft+versus+host+disease%3A+a+phase+I%2C+multicenter%2C+open-label%2C+dose-escalation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Production, safety and efficacy of iPSC-derived mesenchymal stromal cells in acute steroid-resistant graft versus host disease: a phase I, multicenter, open-label, dose-escalation study.</a> Nature Medicine. 26 (11), 1720-1725 (2020).</li>
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<li>Lian, Q., Zhang, Y., Liang, X., Gao, F., Tse, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human-induced+pluripotent+stem+cells+to+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human-induced pluripotent stem cells to mesenchymal stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1416, 289-298 (2016).</li>
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<li>Tilghman, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+rigidity+regulates+cancer+cell+growth+and+cellular+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Matrix rigidity regulates cancer cell growth and cellular phenotype.</a> PLoS One. 5 (9), e12905(2010).</li>
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<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+and+scleraxis+synergistically+promote+the+commitment+of+human+ES+cells+derived+MSCs+to+tenocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Force and scleraxis synergistically promote the commitment of human ES cells derived MSCs to tenocytes.</a> Scientific Reports. 2, 977(2012).</li>
<li>Kataoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+neo-genesis+of+tendon%2Fligament-like+tissue+by+combination+of+mohawk+and+a+three-dimensional+cyclic+mechanical+stretch+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">In vitro neo-genesis of tendon/ligament-like tissue by combination of mohawk and a three-dimensional cyclic mechanical stretch culture system.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 307(2020).</li>
</ol>

Todos los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.

En este protocolo, los iTenocitos se generan a través de tres pasos principales: (1) inducción de iPSCs a iMSCs, (2) sobreexpresión de SCX utilizando un vector lentiviral y (3) maduración de células a través de tensión uniaxial 2D.
El protocolo presentado para diferenciar las iPSCs en iMSCs ha sido descrito previamente por nuestro grupo2. Desde esa publicación, se han desarrollado numerosos protocolos, incluido un protocolo establecido para el uso de iMSC en ensayos clí...

Para hacer frente a los problemas contemporáneos en la reparación de tendones y ligamentos, se requiere una célula candidata pertinente adecuada para las terapias basadas en células. Una vía de investigación en ingeniería de tejidos para la reparación de tendones implica la exploración de células estromales mesenquimales derivadas de la médula ósea (BM-MSC) y células estromales derivadas del tejido adiposo (ASC) como posibles estrategias. Estas células tienen capacidad multipotente, gran abundancia y potencial regenerativo in vivo. Además, han demostrado una mayor capacidad de curación y mejores resultados funcionales en modelos animales1. No obstante, estas células exhiben capacidades restringidas de autorrenovación, diversidad fenotípica y, en particular, una capacidad limitada para la formación de tendones. La tecnología de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) ofrece una solución a estas limitaciones debido a su notable capacidad de autorrenovación y a su inigualable adaptabilidad al desarrollo. Nuestro equipo de investigación y otros han logrado una diferenciación exitosa de las iPSC en entidades similares a las células estromales mesenquimales (iMSCs)2,3. Como tal, las iMSC tienen el potencial de ser una fuente alogénica para aplicaciones de terapia celular tendinosa.
La escleraxis (SCX) es un factor de transcripción esencial para el desarrollo de los tendones y se considera el marcador detectable más temprano para los tenocitos diferenciados. Además, SCX activa marcadores de diferenciación tendinosa aguas abajo, incluyendo el colágeno de cadena tipo 1a1 1 (COL1a1), mohawk (MKX) y tenomodulina (TNMD), entre otros 4,5,6. Otros genes expresados durante la maduración del tendón incluyen el miembro 3 de la familia de proteínas promotoras de la polimerización de la tubulina (TPPP3) y el receptor alfa del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRa)7. Si bien estos genes son esenciales para el desarrollo y la maduración de los tendones, desafortunadamente no son exclusivos del tejido tendinoso y se expresan en otros tejidos musculoesqueléticos como el hueso o el cartílago 5,7.
Además de la expresión de marcadores durante el desarrollo del tendón, la mecanoestimulación es un elemento esencial para el desarrollo y la cicatrización del tendón embrionario 4,5,6. Los tendones son mecanosensibles y sus patrones de crecimiento cambian en respuesta a su entorno. A nivel molecular, las señales biomecánicas afectan el desarrollo, la maduración, el mantenimiento y las respuestas de curación de los tenocitos8. Se han utilizado varios sistemas de biorreactores para modelar cargas fisiológicas y señales biomecánicas. Algunos de estos sistemas modelo incluyen la carga tisular ex vivo, los sistemas de carga celular 2D que aplican tensión biaxial o uniaxial y los sistemas 3D que utilizan andamios e hidrogeles 9,10. Los sistemas 2D son ventajosos cuando se estudian los efectos de la estimulación mecánica en genes específicos del tendón o en la morfología de las células en el contexto del destino celular, mientras que los sistemas 3D pueden replicar con mayor precisión las interacciones célula-ECM 9,10.
En los sistemas de carga 2D, la tensión entre las células y el sustrato de cultivo es homogénea, lo que significa que la carga aplicada en el citoesqueleto de las células puede controlarse por completo. En comparación con la carga biaxial, la carga uniaxial es fisiológicamente más relevante, ya que los tenocitos están predominantemente sujetos a la carga uniaxial de los haces de colágeno in vivo9. Se encuentra que durante las actividades diarias, los tendones están sometidos a una carga de tracción uniaxial de hasta un 6% de deformación11. Específicamente, estudios previos han encontrado que la carga dentro de los rangos fisiológicos del 4%-5% ha demostrado promover la diferenciación tenogénica al preservar la expresión de marcadores relacionados con tendones como SCX y TNMD, así como el aumento de la producción de colágeno 9,10. Las cepas de más del 10% pueden ser traumáticamente relevantes, pero no fisiológicamente relevantes12,13.
Aquí se presenta un protocolo que tiene en cuenta el efecto sinérgico de la estimulación mecánica y biológica que puede ser esencial para la generación de tenocitos. En primer lugar, describimos un método reproducible para inducir iPSCs en iMSCs a través de la exposición a corto plazo de cuerpos embrioides a factores de crecimiento, confirmado por marcadores de superficie de MSC mediante citometría de flujo. A continuación, detallamos un método de transducción lentiviral para diseñar iMSCs para que tengan una sobreexpresión estable de SCX (iMSCSCX+). Para una mayor maduración celular, los iMSCSCX+ se siembran en placas de silicona recubiertas de fibronectina y se someten a un protocolo de tensión uniaxial optimizado utilizando el biorreactor CellScale MCFX. El potencial tenógeno se confirmó al observar la regulación positiva de los marcadores tendinosos tempranos y tardíos, así como la deposición de colágeno14. Este método de generación de iTenocitos es una prueba de concepto que puede ofrecer una fuente alogénica ilimitada lista para usar para aplicaciones de terapia celular tendinosa.

<table><tbody><tr><td>2-mercaptoetanol&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>StemCell Technologies</td><td>7920</td><td>reactivo de disociación celular</td></tr><tr><td>Solución antibiótica-antimicótica</td><td>Thermofisher</td><td>15240096</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD105</td><td>Ancell</td><td>326-050</td><td></td></tr><tr><td>APC ratón anti-humano CD44</td><td>BD Biosciences</td><td>559942</td><td></td></tr><tr><td>Ratón APC IgG2 K control de isotipo</td><td>BD Biosciences</td><td>555745</td><td></td></tr><tr><td>BenchMark suero fetal bovino</td><td>GeminiBio</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>Biglycan</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00959143_m1</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Millipore Sigma</td><td>A3733</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno tipo I alfa 1 cadena humano Taqman primer</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00164004_m1</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno tipo III alfa 1 cadena humano Taqman imprimación</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00943809_m1</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido</td><td>Millipore Sigma</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, bajo en glucosa, piruvato, sin glutamina, sin rojo fenol</td><td>Thermofisher</td><td>11054020</td><td></td></tr><tr><td>Medio esencial mínimo de Eagle (EMEM)</td><td>ATCC</td><td>30-2003</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectina plasma bovino</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>FITC ratón anti-humano CD90</td><td>BD Biosciences</td><td>555595</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina de piel porcina</td><td>Sigma</td><td>Aldrich G1890</td><td></td></tr><tr><td>Cabra anti ratón IgG1-PE</td><td>Bio-Rad</td><td>STAR117</td><td></td></tr><tr><td>HEK 293T/17</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td></td></tr><tr><td>IMDM, sin rojo fenol</td><td>Thermofisher</td><td>21056023</td><td></td></tr><tr><td>iPSC: 83i-cntr-33n1</td><td>Cedars-Sinai iPSC Core Facility</td><td>N/A</td><td>https://biomanufacturing.cedars-sinai.org/product/cs83ictr-33nxx/</td></tr> <tr><td>Anticuerpo de control de isotipo, ratón IgG2a-FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-113-271</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut suero de reemplazo</td><td>Thermofisher</td><td>10828010</td><td></td></tr><tr><td>ácido L-ascórbico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A4544</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamina</td><td>Thermofisher</td><td>2503081</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>matriz de membrana basal</td></tr><tr><td>MechanoCulture FX</td><td>CellScale</td><td>N/A</td><td>aparato de estiramiento</td></tr><tr><td>MEM solución de aminoácidos no esenciales Thermofisher</td><td></td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Mohawk humano Taqman primer Thermofisher</td><td>Hs00543190_m1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>mTeSR Plus</td><td>StemCell Technologies</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Thermofisher</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas A humano Taqman</td><td>primer Thermofisher Hs00998018_m1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poli(2-hidroxietilometacrilato)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>192066</td><td></td></tr><tr><td>Reactivos de infección/transfección de Polybrene</td><td>Millipore Sigma</td><td>TR-1003</td><td></td></tr><tr><td>Recombinante humano&nbsp; TGF-beta 1 proteína humana cebador Taqman</td><td>RnD Systems</td><td>240-B</td><td></td></tr><tr><td>Scleraxis humano cebador Taqman</td><td>Thermofisher</td><td>Hs03054634_g1</td><td></td></tr><tr><td>SCXA (SCX) (NM_00108050514) humano marcado clon ORF</td><td>OriGene</td><td>RC224305L4</td><td></td></tr><tr><td>Placas de silicona</td><td>CellScale</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Azida sódica</td><td>Millipore Sigma</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Tenascina C cebador humano Taqman</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00370384_m1</td><td></td></tr><tr><td>Tenomodulina humano cebador Taqman</td><td>Thermofisher</td><td>Hs00223332_m1</td><td></td></tr><tr><td>Trombospondina 4 cebador humano Taqman</td><td>Thermofisher Hs00170261_m1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reactivo de transfección, BioT</td><td>Bioland Scientific LLC</td><td>B01-01</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Thermofisher</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Polimerización de tubulina miembro de la familia de proteínas promotoras 3</td><td>Thermofisher</td><td>Hs03043892_m1</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 diclorhidrato</td><td>Biogems</td><td>1293823</td><td></td></tr></tbody></table>

generación de itenocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas a través de la sobreexpresión combinada de escleraxis y la tensión uniaxial 2d

Generation of Induced Pluripotent Stem Cell-Derived iTenocytes via Combined Scleraxis Overexpression and 2D Uniaxial Tension

Los desafíos actuales en la reparación de tendones y ligamentos requieren la identificación de un candidato adecuado y eficaz para la terapia basada en células para promover la regeneración de los tendones. Las células estromales mesenquimales (MSC) se han explorado como una posible estrategia de ingeniería de tejidos para la reparación de tendones. Si bien son multipotentes y tienen potencial regenerativo in vivo, están limitados en su capacidad de autorrenovación y exhiben heterogeneidad fenotípica. Las células madre pluripotentes inducidas (iPSC) pueden eludir estas limitaciones debido a su alta capacidad de autorrenovación y a su plasticidad de desarrollo sin precedentes. En el desarrollo de los tenocitos, la escleraxis (Scx) es un regulador molecular directo crucial de la diferenciación de los tendones. Además, se ha demostrado que la mecanorregulación es un elemento central que guía el desarrollo y la curación de los tendones embrionarios. Como tal, hemos desarrollado un protocolo para encapsular el efecto sinérgico de la estimulación biológica y mecánica que puede ser esencial para la generación de tenocitos. Las iPSC fueron inducidas a convertirse en células estromales mesenquimales (iMSC) y se caracterizaron con marcadores clásicos de células estromales mesenquimales mediante citometría de flujo. A continuación, utilizando un vector lentiviral, las iMSCs se transducieron a una sobreexpresión estable de SCX (iMSCSCX+). Estas célulasiMSC SCX+ pueden madurar aún más en iTenocitos mediante carga de tracción uniaxial utilizando un biorreactor 2D. Las células resultantes se caracterizaron por la observación de la regulación positiva de los marcadores tendinosos tempranos y tardíos, así como la deposición de colágeno. Este método de generación de iTenocitos se puede utilizar para ayudar a los investigadores a desarrollar una fuente celular alogénica potencialmente ilimitada para aplicaciones de terapia celular tendinosa.

Diferenciación de las iPSCs humanas a las iMSCs Como se ha descrito anteriormente, el protocolo actual para diferenciar las iPSCs en iMSCs implica la formación de cuerpos embrioides2. Este proceso tarda aproximadamente diez días en inducir iMSCs a partir de iPSCs (Figura 1A). Sin embargo, se recomienda encarecidamente pasar los iMSC recién generados al menos dos veces. Esto no solo ayuda a eliminar la necesidad de placas recubiertas de gelatina, si...

Este artículo describe un procedimiento para producir iTenocitos mediante la generación de células estromales mesenquimales derivadas de iPSC con sobreexpresión combinada de Scleraxis utilizando un vector lentiviral y estiramiento uniaxial a través de un biorreactor 2D.

Generación de iTenocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas a través de la sobreexpresión combinada de escleraxis y la tensión uniaxial 2D

Today&#39;s challenges in tendon and ligament repair necessitate the identification of a suitable and effective candidate for cell-based therapy to ...

La lesión de los tendones es uno de los problemas musculoesqueléticos más frecuentes en los EE. UU., y afecta a aproximadamente 33 millones de personas al año. Nuestra investigación se centra en el desarrollo de un enfoque de ingeniería celular y tisular para reparar tendones que puede mejorar drásticamente los resultados de los pacientes. Las tecnologías actuales utilizadas para avanzar en la investigación de tendones incluyen el uso de células madre de diferentes fuentes, como células madre pluripotentes inducidas, en combinación con el uso de biorreactores, biomateriales de ingeniería genética y otras técnicas de ingeniería de tejidos para imitar las señales ambientales necesarias para el tendón.Nuestra comprensión de cómo se desarrollan los tendones desde sus orígenes es limitada. Hay varios genes bien conocidos que se expresan muy bien durante la maduración del tendón. Sin embargo, desafortunadamente no son exclusivos del tejido tendinoso.Esto dificulta que los investigadores evalúen de manera estándar la diferenciación exitosa de los tendones. Un protocolo aprovecha el notable potencial de diferenciación de la IPC y lo que sabemos hasta ahora sobre el desarrollo de los tendon

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Este video muestra el procedimiento para generar células madre pluripotentes inducidas mediante lentivirus inducible que expresan Oct4, Sox2, c-Myc y Klf4.

La generación de células iPS a partir de MEFs través de la expresión forzada de Sox-2, Oct-4, c-Myc y Klf4

El Inducible Stemgent Dox ratón TF Set Lentivirus puede reprogramar fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) de células madre pluripotentes inducidas (iPS) a las células. Aquí se demuestra el protocolo para la expresión de DOX-inducible de los factores de la transcripción del ratón reprogramación Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc para generar iPS colonias que expresan marcadores comunes MES pluripotencia.

Generación de células madre pluripotentes inducidas por reprogramación de fibroblastos embrionarios de ratón con un factor de transcripción Cuatro, doxiciclina inducible sistema de transducción de lentivirales

Demostramos el protocolo para la generación de células madre pluripotentes inducidas a partir de células somáticas humanas con lentivirus mediada por la entrega de los factores humanos Oct4, Sox2, Nanog, y Lin28. Pluripotencia fue confirmada por la morfología y la presencia de células madre embrionarias (ES) de células específicas de los marcadores.

Generación de células madre pluripotentes inducidas por reprogramación de fibroblastos humanos con los Lentivirus Stemgent Humanos TF Set

Generación de células madre pluripotentes inducidas (IPSC) Líneas produce líneas con diferente potencial de desarrollo aún cuando pasan las pruebas estándar de pluripotencia. Aquí se describe un protocolo para producir ratones totalmente derivadas de iPS, que define las líneas de IPSC como poseedor completo...

Generación de ratones derivados de células madre pluripotentes inducidas

Las células madre pluripotentes, cualquiera de las células madre pluripotentes embrionarias o inducidas (iPS), constituyen una valiosa fuente de células diferenciadas humanas, incluyendo cardiomiocitos. Aquí, nos centraremos en la inducción cardiaca de las células iPS, que muestra cómo usarlos para obtener cardiomiocitos humanos funcionales a través de un protocolo de los organismos con sede en embrioide.

La generación de cardiomiocitos humanos: Protocolo de diferenciación de células madre pluripotentes inducidas humanas Feeder libres

Aquí, se describe un protocolo basado en la reprogramación epigenética de células madre embrionarias humanas (hESCs) hacia la generación de una población homogénea de células progenitoras del músculo esquelético que bajo condiciones de cultivo permisivas formar grupos tridimensionales de miofibras contráctiles (myospheres), que recapitulan las características biológicas de la humana los músculos esqueléticos.

Generación de Myospheres De hESCs por epigenética Reprogramación

A continuación, presentamos nuestro método establecido para reprogramar las células somáticas humanas en transgenes libre iPSCs humanas con virus Sendai, que muestra resultados consistentes y una mayor eficiencia.

Eficiente generación, por actividad humana células madre pluripotentes de células somáticas humanas con virus Sendai-

Este protocolo describe cómo generar células madre pluripotentes inducidas (iPSCs) a partir de células T periféricas humanas en condiciones libres de alimentadores utilizando una combinación de vectores de virus Matrigel y Sendai que contienen factores de reprogramación.

Generación de pluripotentes inducidas células madre a partir de células T periféricas Humanos Uso de Sendai virus en Condiciones-Feeder gratuita

Presentamos aquí un protocolo para la diferenciación de células madre humanas pluripotentes inducidas en cada derivado del somite (miotoma sclerotome, dermatoma y syndetome) en condiciones químicamente definidas, que tiene aplicaciones en modelos futuros de la enfermedad y terapias basadas en células en cirugía ortopédica.

En la generación de Vitro del Somite derivados humanos inducida por células madre pluripotentes

La generación de tejido alineado de miocardio es un requisito clave para la adaptación de los recientes avances en la biología de células madre para fines de utilidad clínica. Aquí se describe un enfoque para la impresión por microcontacto el control preciso de la forma y la función celular. Usando poblaciones altamente purificadas de células madre embrionarias derivadas progenitores cardíacos, a continuación, generar anisotrópico tejido miocárdico funcional.

Generación de tejido funcional del miocardio Alineados través de la impresión por microcontacto

Aprende a generar iTenocitos a partir de células madre pluripotentes inducidas mediante la sobreexpresión de Scleraxis y estiramiento uniaxial en bioreactor 2D. Este método mejora la diferenciación tenogénica para aplicaciones en ingeniería de tejidos tendinosos.

Generación de iTenocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas a través de la sobreexpresión combinada de escleraxis y la tensión uniaxial 2D (Video) | JoVE Journal

Generación de iTenocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas a través de la sobreexpresión combinada de escleraxis y la tensión uniaxial 2D

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