Optimización del modelo de ratón de periodontitis inducida por ligaduras para investigación preclínica

Nuestro laboratorio investiga la enfermedad periodontal, examinando cómo la inflamación causa daños en las encías y los hueses en diferentes grupos de personas. Nuestro objetivo es prevenir la gingivitis y la periodontitis dirigiéndonos a nuevos jugadores y nuevas vías de enfermedad. El modelo simplificado de ratón para periodontitis inducida por ligaduras utiliza un hilo único de doble nudo entre los dientes, utilizando herramientas impresas en 3D, la cama dental del ratón y el soporte para ligaduras, que resulta ser menos complejo que los modelos tradicionales.

Este enfoque utiliza la técnica de inhalación de anestesia, que resulta en una recuperación más rápida en los ratones, en menos de 10 minutos, en comparación con los modelos más tradicionales que usan anestesia inyectable, donde el tiempo de recuperación puede ser de alrededor de 30 minutos. Para preparar el conjunto de la cama dental del ratón, coloca todas las piezas de la cama dental y el pegamento sobre la plataforma de trabajo. Luego, asegura las piezas estabilizadoras de cabeza en su posición usando el pegamento.

Utilizando una hoja número tres en un mango de bisturí 15C, bisela los bordes afilados en la parte exterior del soporte del ligadura se bloquea en un ángulo de 45 grados para reducir la molestia durante el bloqueo o desbloqueo. Cuadra cualquier esquina interna redondeada en la cerradura del soporte de la ligadura. Quita el flash de los bordes superior e inferior de la impresión 3D, y bisela estos bordes a 45 grados.

Retira una lonja de cada punta del soporte de la ligadura en un ángulo de 45 grados para evitar lesiones traumáticas en los tejidos blandos. Asegúrate de que cada punta del soporte de la ligadura tenga una muesca en forma de V. Si esta muesca en forma de V es visible, coloca suavemente una hoja de bisturí 15C en la base de la muesca.

Ahora, inclina cuidadosamente la hoja hacia la superficie exterior de la punta y refina la base de la muesca en forma de V en el borde exterior. Si la muesca en forma de V no es visible, coloca una hoja de bisturí 15C en el centro de la punta del soporte de la ligadura y, en un movimiento deliberado, haz un corte superficial para crear una muesca en forma de V. Al enhebrar la ligadura en las ranuras, asegúrate de que dos nudos estén centrados y nivelados cuando se observan desde la parte frontal del soporte de la ligadura.

Con un explorador dental, confirma que la ligadura rebota en su lugar sin deslizarse cuando se aplica una fuerza suave entre los nudos. Para la colocación de la ligadura, coloca al ratón anestesiado en la cama dental del ratón con la espalda apoyada en la cama y la nariz cerca del cono nasal. Con gomas elásticas, estabiliza la cabeza del ratón y abre su boca.

Para colocar una ligadura en el lado derecho, sujeta el soporte de la ligadura con la mano derecha y el explorador con la izquierda. Coloca suavemente la punta del explorador debajo del contacto interproximal de los primer y segundo molares en el lado palatino. Usando la punta de exploración, primero toca los dientes y luego deslízate hacia abajo y apoya-te contra la encía para evitar traumatizar el tejido blando.

Apoya el mango explorador en una angulación horizontal una vez que esté correctamente posicionado. Asegúrate de usar correctamente la punta del explorador para la colocación de las ligaduras. Engancha al explorador en la zona de contacto proximal y estabiliza la cabeza contra fuerzas reaccionarias.

Retrae la mejilla usando el soporte de la ligadura y coloca la ligadura sobre el contacto interproximal entre el primer y el segundo molar. A continuación, gira el mango del soporte de la ligadura hasta 45 grados y, con una combinación de suave balanceo y deslizamiento, empuja la ligadura a través del contacto. Con pinzas finas de aguja, sujeta el hilo sobrante unido al nudo por el lado derecho.

Pasa el hilo por los dientes hacia la izquierda y desliza las tijeras por el hilo hasta que esté aproximadamente a 1,5 milímetros del nudo antes de cortarlo. Para análisis micro CT, abre el software y haz clic en Archivo, luego en Importar imagen. En el menú emergente, haz clic en Explorar.

Ve a la carpeta que contiene archivos DICOM para un escaneo y selecciona el primer archivo. Haz clic en Examinar para encontrar y seleccionar cualquier otro archivo dentro de la carpeta para la misma muestra escaneada. Luego, haz clic en OK. Cuando las imágenes empiecen a cargarse, haz clic en Visualizar e Isosuperficie.

Cambia el umbral de imagen a 5.000 y el factor de calidad de superficie al 55%. Marca las casillas marcadas como Habilitar suavizado de imagen y Recortar la superficie con el ROI actual, y haz clic en Actualizar. Para ajustar las propiedades del nivel, haz clic derecho en Ventana/Nivel en la parte inferior y haz clic en Editar ventana/Propiedades del nivel.

Establece el valor de densidad ósea en 2.000 y mantenlo constante en todas las mediciones. Para manipular planos, usa atajos de teclado IJK hide and show para los tres planos diferentes. Haz clic derecho y mueve el cursor para hacer zoom y hacer zoom.

Pulsa Shift y haz clic izquierdo para panear. Luego, haz clic en Cortar para mover y rotar los planos. A continuación, haz clic en el centro del avión para moverlo hacia adelante o hacia atrás.

Alternativamente, coloca el cursor en el centro del plano deseado y usa las flechas arriba y abajo para mover el plano una sección a la vez. Haz clic en el borde del plano para girar alrededor de una línea paralela a este borde en el centro del plano. Haz clic en la esquina de un plano para girar alrededor del avión.

A continuación, orienta la franja Z, visible en azul en la parte superior de la pantalla, de modo que las superficies de los tres dientes sean visibles al mismo tiempo o lo más cerca posible. Luego, desplegarse por el mismo plano de corte Z hasta que las raíces de los primer y segundo molares sean visibles, asegurando que la anatomía y los canales circundantes estén bien definidos. Alinea el eje x con las raíces bucales del primer y segundo molar a través de la parte central de cada conducto.

Alternativamente, alinear a través de la raíz bucal del primer molar y la raíz distobucal del segundo molar. A continuación, utiliza la orientación de la porción X como referencia para la alineación de la porción en Y. Alinea la sección Y verticalmente paralela a través de la raíz del primer molar en el panel de la sección X.

Gira el plano para orientar la raíz verticalmente y observa que las líneas azules cruzan el centro de la raíz. En el panel de corte en Y, para medir la distancia desde la unión cemento-esmalte, o CEJ, hasta la cresta del hueso alveolar, o ABC, coloque el cursor en el punto más profundo de la ranura en la CEJ y pulse 1. Luego, coloca el cursor en el punto más cercano del ABC y pulsa 2.

Una flecha azul indica el primer punto, y el segundo punto se indica con una flecha verde. Si las flechas que indican los puntos de medición no aparecen inmediatamente, pasa el cursor sobre las áreas deseadas y pulsa las teclas numéricas del teclado. Si el CEJ es difícil de determinar, utiliza las flechas arriba y abajo para desplazarte por las franjas adyacentes y confirmar su ubicación.

Cuando es difícil determinar el punto más cercano del ABC, mide varios puntos para asegurar una medición consistente. A pesar de nuestro éxito con nuestro artículo sobre protocolos, los nuevos investigadores han encontrado dificultades en el montaje y utilización de las herramientas impresas en 3D, la cama dental del ratón y el soporte de ligaduras. Para abordar esto, hemos creado un vídeo paso a paso que guía a los investigadores durante el montaje y la utilización de estas herramientas impresas en 3D para que puedan utilizarse en un entorno de laboratorio.

Nuestro equipo de investigación ha utilizado estudios clínicos y el modelo simplificado de periodontitis inducida por ligaduras para descubrir cómo un grupo de proteínas llamado inflamosoma puede utilizarse para detener el desarrollo de inflamación y periodontitis.