Name: Los efectos antihipertensivos y los mecanismos de la decocción de Huotan Jiedu Tongluo en ratas con hipertensión tipo H (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Aprenda los efectos antihipertensivos de la decocción Huotan Jiedu Tongluo en ratas con hipertensión tipo H. Este método inhibe la apoptosis inducida por estrés del retículo endoplásmico.

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Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de la provincia de Jilin (no. YDZJ202301ZYTS189).

Efectos antihipertensivos de Huotan Jiedu Tongluo en ratas hipertensas tipo H

<ol><li>Noone, C., Dwyer, C. P., Murphy, J., Newell, J., Molloy, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+effectiveness+of+physical+activity+interventions+and+antihypertensive+pharmacological+interventions+in+reducing+blood+pressure+in+people+with+hypertension%3A+Protocol+for+a+systematic+review+and+network+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Comparative effectiveness of physical activity interventions and antihypertensive pharmacological interventions in reducing blood pressure in people with hypertension: Protocol for a systematic review and network meta-analysis.</a> Syst Rev. 7 (1), 128(2018).</li>
<li>Huang, K., Zhang, Z., Huang, S., Jia, Y., Zhang, M., Yun, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+retinal+vessel+abnormalities+and+h-type+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurol%22%5BJournal%5D)">The association between retinal vessel abnormalities and h-type hypertension.</a> BMC Neurol. 21 (1), 6(2021).</li>
<li>Tan, Y., Nie, F., Wu, G., Guo, F., Wang, Y., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+h-type+hypertension+on+intraplaque+neovascularization+assessed+by+contrast-enhanced+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22J+Atheroscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">Impact of h-type hypertension on intraplaque neovascularization assessed by contrast-enhanced ultrasound.</a> J Atheroscler Thromb. 29 (4), 492-501 (2022).</li>
<li>Towfighi, A., Markovic, D., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pronounced+association+of+elevated+serum+homocysteine+with+stroke+in+subgroups+of+individuals%3A+A+nationwide+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pronounced association of elevated serum homocysteine with stroke in subgroups of individuals: A nationwide study.</a> J Neurol Sci. 298 (1-2), 153-157 (2010).</li>
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<li>Tian, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huotan+Jiedu+Tongluo+decoction+inhibits+balloon-injury-induced+carotid+artery+intimal+hyperplasia+in+the+rat+through+the+perk-eif2%CE%B1-atf4+pathway+and+autophagy+mediation%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Huotan Jiedu Tongluo decoction inhibits balloon-injury-induced carotid artery intimal hyperplasia in the rat through the perk-eif2α-atf4 pathway and autophagy mediation.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5536237(2021).</li>
<li>Simko, F., Pechanova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+melatonin+and+chronotherapy+among+the+new+trends+in+hypertension+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pineal+Res%22%5BJournal%5D)">Potential roles of melatonin and chronotherapy among the new trends in hypertension treatment.</a> J Pineal Res. 47 (2), 127-133 (2009).</li>
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<li>Rodrigo, R., Passalacqua, W., Araya, J., Orellana, M., Rivera, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homocysteine+and+essential+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Homocysteine and essential hypertension.</a> J Clin Pharmacol. 43 (12), 1299-1306 (2003).</li>
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<li>dos Santos, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+folic+acid+deficiency+is+a+major+determinant+of+hyperhomocysteinemia+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Brain+Dis%22%5BJournal%5D)">Evidence that folic acid deficiency is a major determinant of hyperhomocysteinemia in Parkinson's disease.</a> Metab Brain Dis. 24 (2), 257-269 (2009).</li>
<li>Zhao, W., Gao, F., Lv, L., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+of+hypertension+and+homocysteine+increases+the+risk+of+mortality+among+middle-aged+and+older+population+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">The interaction of hypertension and homocysteine increases the risk of mortality among middle-aged and older population in the United States.</a> J Hypertens. 40 (2), 254-263 (2022).</li>
<li>Woo, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperhomocyst%28e%29inemia+is+a+risk+factor+for+arterial+endothelial+dysfunction+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Hyperhomocyst(e)inemia is a risk factor for arterial endothelial dysfunction in humans.</a> Circulation. 96 (8), 2542-2544 (1997).</li>
<li>Lu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intervention+of+enalapril+maleate+and+folic+acid+tablet+on+the+expressions+of+the+grp78+and+chop+and+vascular+remodeling+in+the+vascular+smooth+muscle+cells+of+h-hypertensive+rats+with+homocysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmaco%22%5BJournal%5D)">The intervention of enalapril maleate and folic acid tablet on the expressions of the grp78 and chop and vascular remodeling in the vascular smooth muscle cells of h-hypertensive rats with homocysteine.</a> Eur Rev Med Pharmaco. 22 (7), 2160-2168 (2018).</li>
<li>López-García, P., Moreira, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+forces+for+the+origin+of+the+eukaryotic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Selective forces for the origin of the eukaryotic nucleus.</a> BioEssays. 28 (5), 525-533 (2006).</li>
<li>Minamino, T., Komuro, I., Kitakaze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+as+a+therapeutic+target+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress as a therapeutic target in cardiovascular disease.</a> Circ Res. 107 (9), 1071-1082 (2010).</li>
<li>Chen, X., Cubillos-Ruiz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+signals+in+the+tumour+and+its+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress signals in the tumour and its microenvironment.</a> Nat Rev Cancer. 21 (2), 71-88 (2021).</li>
<li>Ji, C., Kaplowitz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperhomocysteinemia%2C+endoplasmic+reticulum+stress%2C+and+alcoholic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroentero%22%5BJournal%5D)">Hyperhomocysteinemia, endoplasmic reticulum stress, and alcoholic liver injury.</a> World J Gastroentero. 10 (12), 1699-1708 (2004).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homocysteine+induces+programmed+cell+death+in+human+vascular+endothelial+cells+through+activation+of+the+unfolded+protein+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Homocysteine induces programmed cell death in human vascular endothelial cells through activation of the unfolded protein response.</a> J Biol Chem. 276 (38), 35867-35874 (2001).</li>
<li>Cunard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress%2C+a+driver+or+an+innocent+bystander+in+endothelial+dysfunction+associated+with+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Cur+Hypertens+Rep%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress, a driver or an innocent bystander in endothelial dysfunction associated with hypertension.</a> Cur Hypertens Rep. 19 (8), 64(2017).</li>
<li>Casas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GRP78+at+the+centre+of+the+stage+in+cancer+and+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GRP78 at the centre of the stage in cancer and neuroprotection.</a> Front Neurosci. 11, 177(2017).</li>
<li>Urano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+of+stress+in+the+ER+to+activation+of+JNK+protein+kinases+by+transmembrane+protein+kinase+ire1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Coupling of stress in the ER to activation of JNK protein kinases by transmembrane protein kinase ire1.</a> Science. 287 (5453), 664-666 (2000).</li>
<li>Borghi, A., Verstrepen, L., Beyaert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRAF2+multitasking+in+tnf+receptor-induced+signaling+to+nf-%CE%BAb%2C+map+kinases+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">TRAF2 multitasking in tnf receptor-induced signaling to nf-κb, map kinases and cell death.</a> Biochem Pharmacol. 116, 1-10 (2016).</li>
<li>Wen, X. -R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butylphthalide+suppresses+neuronal+cells+apoptosis+and+inhibits+JNK-caspase3+signaling+pathway+after+brain+ischemia+%2Freperfusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Butylphthalide suppresses neuronal cells apoptosis and inhibits JNK-caspase3 signaling pathway after brain ischemia /reperfusion in rats.</a> Cell Mol Neurobiol. 36 (7), 1087-1095 (2016).</li>
<li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine-threonine+protein+kinase+activation+may+be+an+effective+target+for+reducing+neuronal+apoptosis+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Serine-threonine protein kinase activation may be an effective target for reducing neuronal apoptosis after spinal cord injury.</a> Neural Regen Res. 10 (11), 1830-1835 (2015).</li>
<li>Xu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+and+propofol+combination+therapy+inhibits+endoplasmic+reticulum+stress+and+remarkably+attenuates+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+and+ogd+injury+in+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Estrogen and propofol combination therapy inhibits endoplasmic reticulum stress and remarkably attenuates cerebral ischemia-reperfusion injury and ogd injury in hippocampus.</a> Biomed Pharmacother. 108, 1596-1606 (2018).</li>
</ol>

Declaramos que la investigación se llevó a cabo en ausencia de cualquier relación comercial o financiera que pudiera interpretarse como un posible conflicto de intereses.

La hipertensión es uno de los trastornos cardiovasculares más comunes que afecta a un tercio de la población adulta y aumenta el riesgo de accidente cerebrovascular, enfermedad coronaria e insuficiencia cardíaca y renal8. La hipertensión tipo H es un tipo especial de hipertensión que se refiere a la co-ocurrencia de hipertensión primaria y aumento de los niveles de homocisteína y ha atraído una amplia atención a lo largo de los años9. En los últimos años, el uso de EM oral combinado con fármacos antihipertensivos ha demostrado una mayor eficacia en términos de control de la presión arterial y disminución de los niveles de Hcy en sangre, pero todavía hay muchas contraindicaciones, efectos secundarios, resistencia a los medicamentos y otras deficiencias como dolor de cabeza, mareos, fatiga, tos e hipotensión. La medicina tradicional china ofrece ventajas en el tratamiento de la hipertensión tipo H a través de su enfoque personalizado, abordando las causas subyacentes y proporcionando efectos complementarios con menos efectos secundarios, lo que permite un manejo eficaz a largo plazo de la afección. En este estudio, encontramos que la fórmula de la medicina tradicional china HTJDTLD tenía efectos obviamente antihipertensivos sobre la hipertensión tipo H inducida por metionina. Más importante aún, HTJDTLD mejoró significativamente la eficacia antihipertensiva de EM, que es el primer tratamiento aprobado para la hipertensión asociada con Hcy. Sin embargo, la administración de EM a veces produce algunas reacciones adversas. 
El nivel de Hcy, un aminoácido que contiene azufre y que se forma durante el metabolismo de la metionina, está elevado en las enfermedades cardiovasculares y neurodegenerativas, como la hipertensión10, la enfermedad de Alzheimer, la demencia11 y la enfermedad de Parkinson12. Un estudio previo también indicó que la interacción entre la hipertensión y la homocisteína afecta el riesgo de mortalidad entre las personas de mediana edad y mayores13. Woo et al.14 reportaron que el aumento de los niveles de Hcy causa disfunción endotelial y se asocia con rigidez arterial, que es el resultado de la destrucción de las fibras de elastina y el aumento de la producción de colágeno. En este estudio, encontramos que el nivel de Hcy en plasma aumentó significativamente en el grupo de tratamiento con metionina, lo que también se combinó con presión arterial elevada y cambios patológicos arteriales significativos. Sin embargo, el tratamiento con HTJDTLD disminuyó significativamente la presión arterial, alivió el daño patológico arterial y redujo los niveles de Hcy. EM, una nueva preparación compuesta que contiene enalapril y ácido fólico, sirvió como el primer tratamiento aprobado para la hipertensión asociada con la elevación de Hcy15. Vale la pena señalar que HTJDTLD mejoró los efectos antihipertensivos como lo indica la disminución de los niveles de Hcy y el alivio de los cambios patológicos.
El retículo endoplásmico (RE) es el orgánulo central para la síntesis, plegamiento y modificación de proteínas secretadas y transmembrana16. La alteración de la función normal del RE puede conducir al estrés del RE, que se ha asociado con muchas enfermedades y, más recientemente, con la hipertensión17,18. Además, informes anteriores han indicado que Hcy puede activar el estrés del RE al interrumpir la formación de enlaces disulfuro y reducir la viabilidad endotelial y la vasorrelajación19. El estrés del RE inducido por HCY también puede causar apoptosis endotelial20,21. Sin embargo, no se ha estudiado si la HTJDTLD ejerce efectos antihipertensivos al regular el estrés del RE. Por lo tanto, exploramos los efectos antihipertensivos de HTJDTLD a través de la vía de apoptosis inducida por estrés del RE. GPR78, también conocido como Bip, es un acompañante importante y se activa después del estrésRE 22. También se ha demostrado que el factor 2 asociado al receptor del factor de necrosis tumoral (TRAF2) está asociado con respuestas celulares a señales intrínsecas, como el estrés del RE23. TRAF2 inicia cascadas de transducción de señales, lo que conduce a la activación de la quinasa N-terminal (JNK) c-Jun de manera dependiente de la célula y del contexto24. La caspasa-3, un ejecutor crucial de la apoptosis, desempeña un papel fundamental en el proceso apoptótico y puede activarse a través de varias vías en varios tipos de células de mamíferos25. La caspasa-3, un ejecutor crucial de la apoptosis, desempeña un papel fundamental en el proceso apoptótico y puede activarse a través de varias vías en varios tipos de células de mamíferos26. La caspasa-3 está involucrada en la apoptosis mediada por estrés del RE y sirve como el último miembro común de diferentes cascadas apoptóticas27. En este estudio, detectamos la expresión génica y proteica de GPR78, TRAF2, JNK y caspasa 3 mediante qRT-PCR y western blot. Los resultados mostraron que el tratamiento con metionina aumentó significativamente la expresión génica y proteica de GPR78, TRAF2, JNK y caspasa 3, y HTJDTLD inhibió significativamente la expresión de estos genes y proteínas. Sin embargo, todavía existen algunas limitaciones para usar solo estos dos métodos. Puede ser ideal evaluar el mecanismo de acción de HTJDTLD mediante el uso del inhibidor de la vía de señal relacionada con ERS y la detección de la apoptosis celular mediante citometría de flujo. Continuaremos mejorando nuestro protocolo experimental en futuros estudios.
Nuestros resultados indicaron que HTJDTLD tuvo efectos antihipertensivos en ratas con hipertensión tipo H inducida por metionina. El mecanismo subyacente puede implicar la inhibición de la apoptosis inducida por la activación del estrés del RE. Dados sus efectos antihipertensivos y su potencial mecanismo en ratas con hipertensión inducida por metionina, HTJDTLD es muy prometedor para futuras aplicaciones terapéuticas en el tratamiento de la hipertensión.

La hipertensión, un importante factor de riesgo de ataque cardíaco, accidente cerebrovascular e insuficiencia renal, se ha convertido en un importante desafío de salud pública que afecta a 1.000 millones de personas en todo el mundo. La homocisteína (Hcy), un aminoácido que contiene el grupo tiol, es un intermediario metabólico vital del metabolismo de la metionina. La hipertensión con niveles plasmáticos elevados de Hcy se define como hipertensión tipo H, que podría ser un factor de riesgo significativo para la aparición y recurrencia de enfermedades cardiocerebrovasculares como el accidente cerebrovascular 2,3. Estudios recientes han reportado que la co-residencia de la hipertensión tipo H podría agravar los efectos secundarios de las enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares4. Cabe destacar que el 75% de los pacientes con hipertensión tipo H en China tienen hipertensión primaria, lo que afecta seriamente la calidad de vida5. En la actualidad, el tratamiento de la hipertensión tipo H incluye principalmente la medicina occidental. Sin embargo, puede causar ciertos efectos adversos y un cumplimiento deficiente y ya no puede satisfacer las necesidades para el manejo integral de la hipertensión tipo H.
La medicina tradicional china (MTC) es un recurso único con una historia de más de 2.000 años en China. Debido a la necesidad insatisfecha de control de la hipertensión en la medicina occidental, los médicos han comenzado a considerar el papel potencial de la medicina tradicional china en la prevención y el tratamiento de la hipertensión tipoH 6. La decocción de Huotan Jiedu Tongluo (HTJDTLD) es una fórmula de medicina tradicional china formulada por el profesor Yue Deng, basada en su amplia experiencia clínica7. A lo largo de más de 20 años de aplicación clínica, HTJDTLD ha demostrado una notable eficacia en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares1. Sin embargo, no se ha informado si la HTJDTLD tiene efectos terapéuticos en la hipertensión tipo H. Por lo tanto, nos propusimos explorar los efectos antihipertensivos y los mecanismos específicos de HTJDTLD en ratas con hipertensión tipo H e identificar posibles fármacos terapéuticos para el tratamiento de la hipertensión tipo H.

<table><tbody><tr><td>1ª hebra de síntesis de ADNc SuperMix para qPCR</td><td>Yeasen, China</td><td>11149ES</td><td>kit de síntesis de ADNc &nbsp;</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-beta-actina</td><td>Bioss, China</td><td>bs-0061R</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-caspasa-3</td><td>Bioss, China</td><td>bs-0081R</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-GPR78</td><td>Abcam, Estados Unidos</td><td>ab108513</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-JNK</td><td>Abcam, Estados Unidos</td><td>ab76572</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-p-JNK</td><td>Bioss, China</td><td>bsm-52462R</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-conejo IgG</td><td>Bioss, China</td><td>bs-0295G-HRP</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-TRAF2</td><td>Bioss, China</td><td>bs-22372R</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad CFX96 Sistema táctil&nbsp;</td>Sistema de detección de PCR en tiempo real <td>Bio-Rad</td><td>CFX96</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>ECL Western Blot Sustratos Merck</td><td>, MA, EE. UU</td>. <td>WBULP-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Tabletas de ácido fólico de maleato de enalapril</td><td>Compañía farmacéutica Yangzijiang, China</td><td>20040991</td><td></td></tr><tr><td>FastStart SYBR Green Master</td><td>Sigma</td><td>FSSGMMRO</td><td></td></tr><tr><td>Fructus Trichosanthis</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td> <td>de catálogo</td></tr><tr><td>Hirudo</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td><td></td>de catálogo</tr><tr><td>esfigmomanómetro inteligente no invasivo&nbsp;</td><td>Beijing Softron Biotechnology company</td><td>BP-2010A</td><td></td></tr><tr><td>Lonicerae Japonicae Flos</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td><td></td>de catálogo</tr><tr><td>Methionine</td><td>Sigma, USA</td><td>M9500</td><td></td></tr><tr><td>Radix Angelicae Sinensis</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número de catálogo</td><td></td></tr><tr><td>Radix et Rhizoma Glycyrrhizae</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td><td></td>de catálogo</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Nardostachyos</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td><td></td>de catálogo</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Rhodiolae Crenulatae</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td><td></td>de catálogo</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td><td></td>de catálogo</tr><tr><td>Radix Scrophulariae</td><td>El primer hospital afiliado de la Universidad de Medicina Tradicional China de Changchun, China</td><td>Sin número</td><td></td> de catálogo</tr><tr><td>Rata Hcy ELISA Kits</td><td>Shanghai Meimian Industrial Company, China</td><td>MM-0293R2</td><td></td></tr><tr><td>RIPA buffer</td><td>Shanghai Beyotime Biotechnology company</td><td>P0013B</td><td></td></tr></tbody></table>

los efectos antihipertensivos y los mecanismos de la decocción de huotan jiedu tongluo en ratas con hipertensión tipo h

The Antihypertensive Effects and Mechanisms of Huotan Jiedu Tongluo Decoction in Rats with H-Type Hypertension

La hipertensión de tipo H, que es una forma específica de hipertensión caracterizada por niveles elevados de homocisteína plasmática (Hcy), se ha convertido en un importante desafío de salud pública en todo el mundo. Este estudio investigó los efectos hipotensores y los mecanismos subyacentes de la decocción de Huotan Jiedu Tongluo (HTJDTLD), una fórmula de medicina tradicional china altamente efectiva comúnmente utilizada para tratar la estenosis vascular. La metionina se utilizó para inducir hipertensión tipo H en ratas, y la HTJDTLD se administró por vía intragástrica. A continuación, se midieron las presiones sistólicas y diastólicas de la arteria caudal de las ratas mediante manometría caudal no invasiva en ratas. La evaluación histológica de la aorta se realizó mediante tinción con hematoxilina-eosina (HE). Se utilizó el ensayo de inmunoadsorción enzimática (ELISA) para medir los niveles de Hcy, y la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa cuantitativa (qRT-PCR) y el western blot para determinar los niveles de ARNm y proteínas de la proteína reguladora de glucosa 78 (GRP78), el factor 2 asociado al receptor del factor de necrosis tumoral (TNF) (TRAF2), las quinasas c-Jun N-terminal (JNK) y la caspasa-3. Los resultados mostraron que HTJDTLD disminuyó significativamente la presión arterial, alivió las lesiones histopatológicas y disminuyó los niveles de Hcy después del tratamiento con metionina. Además, HTJDTLD inhibió significativamente la expresión génica y proteica de GRP78, JNK, TRAF2 y caspasa 3, que están implicadas principalmente en la vía de apoptosis inducida por el estrés del retículo endoplásmico (RE). En general, los resultados indicaron que HTJDTLD tuvo efectos antihipertensivos efectivos en ratas con hipertensión tipo H y revelaron los mecanismos antihipertensivos asociados con la inhibición de la activación de la vía de apoptosis inducida por el estrés del RE.

Como se muestra en la Tabla 4 y la Tabla 5, la presión arterial sistólica (PAS) y la presión arterial diastólica (PAD) fueron significativamente mayores en el grupo MET que en el grupo CON de 1 a 4 semanas. Después del tratamiento con HTJDTLD, la PAS y la PAD de las ratas fueron significativamente más bajas que las del grupo MET. En particular, la utilización combinada de HTJDTLD y EM tuvo un efecto antihipertensivo más fuerte que el tratamiento con HTJDTLD solo.
De acuerdo con la tinción HE y la tinción tricrómica de Masson, el endometrio de la pared del vaso aórtico estaba incompleto y no era liso, y el medio estaba significativamente engrosado. Hubo proliferación e hipertrofia de células musculares lisas, aumentó el número de capas de disposición y las fibras estaban desordenadas en el grupo MET en comparación con las del grupo CON. Sin embargo, el endometrio vascular se recuperó de manera más completa y suave, el engrosamiento de los medios se redujo significativamente y el daño íntimo en los grupos MET + HTJDTLD + EM, MET + EM y MET + HTJDTLD se alivió significativamente (Figura 1 y Figura 2). Además, la concentración de Hcy en el grupo de metionina fue 2 veces mayor que en el grupo de control. Sin embargo, las concentraciones de Hcy en los grupos MET + HTJDTLD + EM, MET + EM y MET + HTJDTLD fueron significativamente más bajas que las del grupo MET. En particular, la reducción más significativa se encontró en el grupo MET + HTJDTLD + EM, que fue aproximadamente 1 veces menor que la del grupo MET (Figura 3). Los resultados de la expresión de ARNm y proteínas mostraron que la expresión de GPR78, TRAF2, JNK, p-JNK y caspasa-3 obviamente se reguló al alza después del tratamiento con metionina. Sin embargo, HTJDTLD, EM y la combinación de HTJDTLD y EM inhibieron significativamente la regulación positiva de GPR78, TRAF2, JNK y caspasa-3. En particular, la aplicación combinada de HTJDTLD y EM tuvo el efecto más significativo (Figura 4 y Figura 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig01.jpg"> Figura 1: Tinción de HE. Cambios histológicos en los tejidos de la aorta torácica del grupo (A) CON, (B) grupo MET, (C) grupo MET + HTJDTLD + EM, (D) grupo MET + EM y (E) grupo MET + HTJDTLD. Los núcleos se tiñen de azul, mientras que el citoplasma y la matriz extracelular tienen diversos grados de tinción rosada (100x). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig02.jpg"> Figura 2: Tinción de Masson. (A) grupo CON, (B) grupo MET, (C) grupo MET + HTJDTLD + grupo EM, (D) grupo MET + EM y (E) grupo MET + HTJDTLD. Se realizó una tinción de Masson de los vasos aórticos de cada grupo para evaluar el efecto de HTJDTLD sobre el depósito y la fibrosis (100x). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig03v2.jpg"> Figura 3: El nivel de Hcy. La concentración sérica de Hcy de cada grupo se detectó mediante ELISA. Los datos se presentaron como media ± DE (n = 6, DE son los siguientes: CON: 236,5 nmol/L, MET: 185 nmol/L, MET + HTJDTLD + EM: 126,8 nmol/L, MET + EM: 124 nmol/L, MET + HTJDTLD: 325 nmol/L). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig04.jpg"> Figura 4: Expresión de ARNm de GRP78, TRAF2, JNK y caspasa-3. Tras el tratamiento con MET, MET + EM + HTJDTLD y MET + EM, se detectó la expresión de genes relacionados con ERS mediante qRT-PCR. Los datos se presentaron como media ± DE (n = 6, DE la siguiente manera: GRP78 [CON: 0,12, MET: 0,13, MET + HTJDTLD + EM: 0,11, MET + EM: 0,17, MET + HTJDTLD: 0,12]; TRAF2 [CONTRA: 0.09, MET: 0.09, MET + HTJDTLD + EM: 0.07, MET + EM: 0.11, MET + HTJDTLD: 0.13]; JNK [CON: 0.99, MET: 0.01, MET + HTJDTLD + EM: 0.03, MET + EM: 0.06, MET + HTJDTLD: 0.07; caspasa-8 [CON: 0.06, MET: 0.10, MET + HTJDTLD + EM: 0.01, MET + EM: 0.13, MET + HTJDTLD: 0.03). * representa una diferencia significativa en comparación con el grupo CON, # representa una diferencia significativa en comparación con el grupo MET, Δ representa una diferencia significativa en comparación con el grupo MET + HTJDTLD, y ∇ representa una diferencia significativa en comparación con el grupo MET + EM. p &lt; 0,01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig05.jpg"> Figura 5: Expresión proteica de GRP78, TRAF2, JNK, p-JNK y Caspasa-3. (A) Las muestras de proteínas se analizaron mediante western blot con anticuerpos GRP78, TRAF2, JNK, p-JNK y Caspasa-3. Se utilizó GAPDH como control. (B) La cuantificación de las proteínas GRP78, RAF2, JNK, p-JNK y Caspasa-3 se determinó mediante densitometría y se ha normalizado a GAPDH. Los datos se presentaron como media ± DE (n = 6). * representa una diferencia significativa en comparación con el grupo CON, p &lt; 0,01. # representa una diferencia significativa en comparación con el grupo MET, Δ representa una diferencia significativa en comparación con el grupo MET + HTJDTLD y ∇ representa una diferencia significativa en comparación con el grupo MET + EM. p &lt; 0,01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Reacción de transcripción inversa</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Componente</td>
			<td>Volumen (mL)</td>
		</tr><tr><td>ARN total</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td>digestor de ADNg Mix</td>
			<td>3</td>
		</tr><tr><td>SuperMix plus</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>Agua libre de RNasa</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td colspan="2">El programa de reacción fue el siguiente: 25 °C, 5 min; 55 °C, 15 min; 85 °C, 5 min.</td>
		</tr><tr><td>RT-PCR</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Componente</td>
			<td>Volumen (mL)</td>
		</tr><tr><td>Plantilla</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td>Imprimación directa (10 μM)</td>
			<td>0.4</td>
		</tr><tr><td>Imprimación inversa (10 μM)</td>
			<td>0.4</td>
		</tr><tr><td>Mezcla de qPCR verde</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td>Agua libre de nucleasas</td>
			<td>7.2</td>
		</tr><tr><td colspan="2">El programa de reacción fue el siguiente: pre-desnaturalización 95 °C, 5 min; desnaturalización 95 °C, 10 s; recocido/extensión 60 °C, 45 s, para un total de 40 ciclos.</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 1: Volúmenes de reacción de transcripción inversa.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Nombre del cebador</td>
			<td>Secuencia (5' a 3')</td>
		</tr><tr><td>GPR78-F</td>
			<td>CGTCGTATGTGGCCTTCACT</td>
		</tr><tr><td>GPR78-R</td>
			<td>ATTCCAAGTGCGTCCGATGA</td>
		</tr><tr><td>TRAF2-F</td>
			<td>GAAGGGAGCATTCCTAGACC</td>
		</tr><tr><td>TRAF2-R</td>
			<td>GAAGGGAGCATTCCTAGACC</td>
		</tr><tr><td>JNK-F</td>
			<td>GTCAGAATCCGAACGAGA</td>
		</tr><tr><td>JNK-R</td>
			<td>GTCTACGCAGGCAATCG</td>
		</tr><tr><td>Caspasa-3-F</td>
			<td>GCGGTATTGAGACAGACAGTGGAAC</td>
		</tr><tr><td>Caspasa-3-R</td>
			<td>GCGGTAGAGTAAGCATACAGGAAGTC</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 2: Lista de cebadores.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Gel de separación al 10%, sistema de 5 mL:</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Componente</td>
			<td>Volumen (mL)</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>1.9</td>
		</tr><tr><td>30% de acrilamida</td>
			<td>1.7</td>
		</tr><tr><td>1,5 mol/L de Tris-HCL (pH 8,8)</td>
			<td>1.3</td>
		</tr><tr><td>10% SDS</td>
			<td>0.05</td>
		</tr><tr><td>Persulfato de amonio al 10%</td>
			<td>0.05</td>
		</tr><tr><td>TEMED</td>
			<td>0.002</td>
		</tr><tr><td>Gel concentrado al 5%, sistema de 3 mL:</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Componente</td>
			<td>Volumen (mL)</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>2.1</td>
		</tr><tr><td>30% de acrilamida</td>
			<td>0.5</td>
		</tr><tr><td>1,0 mol/L Tris-HCL (pH 6,8)</td>
			<td>0.38</td>
		</tr><tr><td>10% SDS</td>
			<td>0.03</td>
		</tr><tr><td>Persulfato de amonio al 10%</td>
			<td>0.03</td>
		</tr><tr><td>TEMED</td>
			<td>0.003</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 3: Composición del gel de separación y concentrado.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Grupo</td>
			<td>1 semana</td>
			<td>2 semana</td>
			<td>3 semanas</td>
			<td>4 semana</td>
		</tr><tr><td>CONTRA</td>
			<td>163.4 ± 6</td>
			<td>150,1 ± 7,0</td>
			<td>134,2 ± 9,9</td>
			<td>158,8 ± 10,2</td>
		</tr><tr><td>CONOCIDO</td>
			<td>192.1 ± 9.5##</td>
			<td>166.7 ± 12.8#</td>
			<td>177.3 ± 19.7##</td>
			<td>187 ± 23.6##</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD+EM</td>
			<td>165.4 ± 9.2##</td>
			<td>148,9 ± 11,1*</td>
			<td>134,5 ± 12,3**</td>
			<td>159,2 ± 19,6**</td>
		</tr><tr><td>MET+EM</td>
			<td>173 ± 9.1##</td>
			<td>149,9 ± 18,7*</td>
			<td>145 ± 12,5**</td>
			<td>162,4 ± 19,1**</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD</td>
			<td>176.7 ± 8.4##</td>
			<td>154,9 ± 22,8</td>
			<td>168,3 ± 10,2</td>
			<td>172,2 ± 17,4</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 4: Cambios en la presión sistólica. #p &lt; 0,05 y ##p &lt; 0,01 vs. grupo control, *p &lt;0,05 y **p &lt; 0,01 vs. grupo MET.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Grupo</td>
			<td>1 semana</td>
			<td>2 semana</td>
			<td>3 semanas</td>
			<td>4 semana</td>
		</tr><tr><td>CONTRA</td>
			<td>138,4 ± 13,8</td>
			<td>121,2 ± 12,5</td>
			<td>107 ± 19,7</td>
			<td>131,1 ± 16,3</td>
		</tr><tr><td>CONOCIDO</td>
			<td>147.9 ± 7.7#</td>
			<td>131 ± 11,9</td>
			<td>143.7 ± 19.6##</td>
			<td>146 ± 21.4##</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD+EM</td>
			<td>139.4 ± 10</td>
			<td>123,1 ± 18,5</td>
			<td>117,1 ± 9,6**</td>
			<td>129,2 ± 18,6**</td>
		</tr><tr><td>MET+EM</td>
			<td>140,9 ± 13,4</td>
			<td>119,6 ± 7,8</td>
			<td>123,6 ± 10,8**</td>
			<td>128 ± 25,2**</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD</td>
			<td>140,4 ± 11,3</td>
			<td>129,5 ± 11,1</td>
			<td>138,3 ± 15,1</td>
			<td>132.8 ± 16</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 5: Cambios en la presión diastólica.#p &lt; 0,05 y ##p &lt; 0,01 vs. grupo control, **p &lt; 0,01 vs. grupo MET.

En este trabajo se presenta un protocolo para inducir hipertensión tipo H y se evalúan los efectos antihipertensivos de la decocción de Huotan Jiedu Tongluo (HTJDTLD) administrada por vía intragástrica. En ratas con hipertensión tipo H, HTJDTLD tuvo efectos antihipertensivos efectivos, posiblemente asociados con la inhibición de la activación de la vía de apoptosis inducida por el estrés del retículo endoplásmico (RE).

Los efectos antihipertensivos y los mecanismos de la decocción de Huotan Jiedu Tongluo en ratas con hipertensión tipo H

H-type hypertension, which is a specific form of hypertension characterized by elevated plasma homocysteine (Hcy) levels, has become a major public health ...

La hipertensión tipo H se ha convertido en un importante desafío de salud pública para la humanidad. Se basa principalmente en el tratamiento de la medicina occidental, que puede tener efectos tristes. Nuestra investigación explora los efectos y mecanismos antihipertensivos de la decocción de Huotan Jiedu Tongluo, una fórmula de medicina tradicional china, en ratas con hipertensión tipo H.Nuestro estudio indicó que la decocción de Huotan Jiedu Tongluo tuvo efectos antihipertensivos en ratas con hipertensión tipo H. El mecanismo subyacente puede implicar la inhibición de la apoptosis inducida por la activación del estrés del RE, que proporciona una opción de tratamiento eficaz para los pacientes. Explotaremos los biomarcadores potenciales para el diagnóstico y el pronóstico tempranos y desarrollaremos nuevos fármacos terapéuticos para la hipertensión de tipo H en el futuro.

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