Hibridación Reacción en cadena ARN Fluorescencia de montaje completo Hibridación in situ de genes quimiosensoriales en apéndices olfativos de mosquitos
November 17th, 2023
El artículo describe los métodos y reactivos necesarios para realizar la hibridación in situ de fluorescencia in situ de ARN de reacción en cadena de hibridación (HCR RNA WM-FISH) para revelar información sobre la resolución espacial y celular de los genes receptores quimiosensoriales en la antena del mosquito y el palpo maxilar.
Nuestro grupo está interesado en el sistema quimio-sensorial de los mosquitos. Esperamos que al enfocarnos en el sentido del gusto y el olfato de un mosquito, podamos evitar que nos encuentre y nos pique. Reacción en cadena de hibridación La hibridación fluorescente in situ es un desarrollo reciente.
Esta tecnología es altamente sensible, robusta y capaz de multiplexar varias dianas génicas de modo que podamos visualizar la expresión y localización de estos genes simultáneamente dentro de su entorno nativo. La transcriptómica especial es un método de vanguardia utilizado en el campo de la biología espacial. Esta tecnología es capaz de multiplexar varios miles de genes, y se puede visualizar la expresión de estos genes simultáneamente.
Nuestro protocolo nos permite visualizar directamente qué neuronas de la antena expresan alguno de los aproximadamente 50 posibles receptores ionotrópicos. Esto nos proporciona una hoja de ruta fundamental para guiar nuestra comprensión de cómo los receptores de este factor clásico podrían mediar comportamientos. Las neuronas olfativas dentro de los órganos olfativos de un insecto, como la antena, suelen estar enterradas dentro de una capa quitinosa protectora.
Esto hace que visualizar la expresión de los receptores olfativos en esas neuronas sea muy difícil. Nuestro protocolo utiliza una combinación de tratamientos con quitinasa y protocolos de fluorescencia y transparencia de última generación para superar estos desafíos.
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Visión general
Este artículo presenta un protocolo detallado para la hibridación en cadena de la reacción de ARN de hibridación in situ de fluorescencia completa (HCR ARN WM-FISH), destinado a dilucidar la expresión espacial y celular de los genes de los receptores quimiosensoriales en las antenas y palpos maxilares de los mosquitos. Mediante la utilización de técnicas fluorescentes avanzadas, el estudio arroja luz sobre los sistemas quimiosensoriales y sus posibles implicaciones para el comportamiento del mosquito y su interacción con el medio ambiente.
Componentes clave del estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biotecnología
- Entomología
Antecedentes
- El sistema quimiosensorial de los mosquitos es crucial para el comportamiento.
- Las técnicas de reacción de hibridación en cadena permiten la visualización múltiple de la expresión génica.
- La visualización de receptores olfatorios es un desafío debido a las limitaciones anatómicas.
- Los tratamientos con quitinasa ayudan a superar las barreras para la visualización de tejidos.
Propósito del estudio
- Desarrollar un método para visualizar simultáneamente múltiples genes de receptores quimiosensoriales.
- Proporcionar información sobre la localización y los patrones de expresión de estos receptores.
- Facilitar una mejor comprensión de los comportamientos sensoriales en los mosquitos.
Métodos utilizados
- El protocolo emplea técnicas de hibridación en cadena de reacción de ARN de hibridación in situ de fluorescencia completa.
- Utiliza el mosquito Anopheles como modelo biológico.
- No se mencionaron flujos de trabajo multiómicos específicos.
- Los pasos clave incluyen fijación de tejido, deshidratación e hibridación, con tiempos de incubación precisos a diferentes temperaturas.
- La obtención de imágenes sigue al montaje de las preparaciones para la visualización.
Resultados principales
- Se dilucidaron los patrones de expresión de varios receptores ionotrópicos en las antenas del mosquito.
- Se observaron diferencias notables en la abundancia de receptores, siendo IR64a significativamente más expresado.
- La colocalización de varias familias de receptores indicó interacciones complejas dentro de los tejidos quimiosensoriales.
- Los hallazgos contribuyen a la comprensión de cómo estos receptores median los comportamientos sensoriales.
Conclusiones
- Este estudio permite una comprensión más profunda de los sistemas quimiosensoriales de los mosquitos a través de técnicas de visualización avanzadas.
- Los métodos desarrollados pueden facilitar investigaciones adicionales sobre el papel de los receptores sensoriales en el comportamiento de los mosquitos.
- Los conocimientos adquiridos pueden informar estrategias para controlar las interacciones de los mosquitos con los humanos.
