Name: Producción de Matriz Extracelular Cardíaca a partir de Fibroblastos Humanos Adultos para el Recubrimiento de Placas de Cultivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-22T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Aprenda a producir matriz extracelular cardíaca a partir de fibroblastos humanos adultos mediante decelularización. Este método permite estudiar interacciones célula-matriz para ingeniería tisular cardiaca.

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<meta charset="utf8"></head><body>Generación de matriz extracelular que imita el miocardio para el cultivo celular

<ol><li>Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix%3A+A+dynamic+microenvironment+for+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche.</a> Biochim Biophys Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+extracellular+matrix+coatings+for+the+promotion+of+cell+proliferation+and+maintenance+of+cell+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific extracellular matrix coatings for the promotion of cell proliferation and maintenance of cell phenotype.</a> Biomaterials. 30 (23-24), 4021-4028 (2009).</li>
<li>Xing, H., Lee, H., Luo, L., Kyriakides, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-derived+biomaterials+in+engineering+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-derived biomaterials in engineering cell function.</a> Biotechnol Adv. 42, 107421(2020).</li>
<li>Andrés-Delgado, L., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+cardiac+function+and+heart+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Interplay between cardiac function and heart development.</a> Biochim Biophys Acta. 1863 (7), Pt B 1707-1716 (2016).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10 (5), e019338(2021).</li>
<li>Castaldo, C., Chimenti, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+progenitor+cells%3A+The+matrix+has+you%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiac progenitor cells: The matrix has you.</a> Stem Cells Transl Med. 7, 506-510 (2018).</li>
<li>Nurzynska, D., Iruegas, M. E., Castaldo, C., Müller-Best, P., Di Meglio, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+biotechnology+in+myocardial+regeneration-tissue+engineering+triad%3A+cells%2C+scaffolds%2C+and+signaling+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Application of biotechnology in myocardial regeneration-tissue engineering triad: cells, scaffolds, and signaling molecules.</a> Biomed Res Int. 2013, 236893(2013).</li>
<li>Giacca, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+regeneration+after+myocardial+infarction%3A+An+approachable+goal%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cardiol+Rep%22%5BJournal%5D)">Cardiac regeneration after myocardial infarction: An approachable goal.</a> Curr Cardiol Rep. 22 (10), 122(2020).</li>
<li>Spedicati, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+design+of+bioartificial+scaffolds+for+the+in+vitro+modeling+of+human+cardiac+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biomimetic design of bioartificial scaffolds for the in vitro modeling of human cardiac fibrosis.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 983782(2022).</li>
<li>Souders, C. A., Bowers, S. L., Baudino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblast%3A+The+renaissance+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblast: The renaissance cell.</a> Circ Res. 105 (12), 1164-1176 (2009).</li>
<li>Castaldo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblast-derived+extracellular+matrix+%28biomatrix%29+as+a+model+for+the+studies+of+cardiac+primitive+cell+biological+properties+in+normal+and+pathological+adult+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblast-derived extracellular matrix (biomatrix) as a model for the studies of cardiac primitive cell biological properties in normal and pathological adult human heart.</a> Biomed Res Int. 2013, 352370(2013).</li>
<li>Nurzynska, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+produced+cardiac+extracellular+matrix+for+studies+of+myocardium+regeneration+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">In vitro produced cardiac extracellular matrix for studies of myocardium regeneration potential.</a> Tissue Eng Part A. 21, 77(2015).</li>
<li>VanWinkle, W. B., Snuggs, M. B., Buja, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+ECM%3A+A+biosynthetic+extracellular+matrix+for+cardiomyocyte+culture%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Cardiac ECM: A biosynthetic extracellular matrix for cardiomyocyte culture.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 478-485 (1996).</li>
<li>Santhakumar, R., Vidyasekar, P., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+ECM%3A+A+nano-matrix+scaffold+with+potential+application+in+cardiac+regeneration+using+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cardiac ECM: A nano-matrix scaffold with potential application in cardiac regeneration using mesenchymal stem cells.</a> PLoS One. 9 (12), e114697(2014).</li>
<li>Gopal, S., Multhaupt, H. A. B., Couchman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+in+cell-extracellular+matrix+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Calcium in cell-extracellular matrix interactions.</a> Adv Exp Med Biol. 1131, 1079-1102 (2020).</li>
<li>Hellewell, A. L., Rosini, S., Adams, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid%2C+scalable+method+for+the+isolation%2C+functional+study%2C+and+analysis+of+cell-derived+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Rapid, scalable method for the isolation, functional study, and analysis of cell-derived extracellular matrix.</a> J Vis Exp. (119), e55051(2017).</li>
<li>Nurzynska, D., Di Meglio, F., Montagnani, S., Castaldo, C. Cardiac stem cells derived from epithelial-mesenchymal transition of epicardial cells: role in heart regeneration (method). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNurzynska%2C+D+%22Stem+Cells+and+Cancer+Stem+Cells%2C+vol.+5%3A+Therapeutic+Applications+in+Disease+and+Injury%22">Stem Cells and Cancer Stem Cells, vol. 5: Therapeutic Applications in Disease and Injury</a>. Hayat, M. A. , Springer. New York. 109-115 (2012).</li>
<li>Pagano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+versus+pathological+cardiac+fibroblast-derived+extracellular+matrix+differentially+modulates+cardiosphere-derived+cell+paracrine+properties+and+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Normal versus pathological cardiac fibroblast-derived extracellular matrix differentially modulates cardiosphere-derived cell paracrine properties and commitment.</a> Stem Cells Int. 2017, 7396462(2017).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+regulates+the+profibrotic+activity+of+fibroblasts+in+in+vitro+replica+settings+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Vitamin C regulates the profibrotic activity of fibroblasts in in vitro replica settings of myocardial infarction.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 8379(2023).</li>
<li>Jaffré, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+angiotensin+receptors+in+cardiac+fibroblasts+coregulate+adrenergic-dependent+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Serotonin and angiotensin receptors in cardiac fibroblasts coregulate adrenergic-dependent cardiac hypertrophy.</a> Circ Res. 104 (1), 113-123 (2009).</li>
<li>Błyszczuk, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+cardiac+fibroblasts+control+contraction+of+human+fibrotic+cardiac+microtissues+by+a+%CE%B2-adrenoreceptor-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Activated cardiac fibroblasts control contraction of human fibrotic cardiac microtissues by a β-adrenoreceptor-dependent mechanism.</a> Cells. 9 (5), 1270(2020).</li>
<li>Duval, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+physiological+events+in+2D+vs.+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol%22%5BJournal%5D)">Modeling physiological events in 2D vs. 3D cell culture.</a> Physiol. 32 (4), 266-277 (2017).</li>
<li>Ungerleider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+and+characterization+of+injectable+hydrogels+derived+from+decellularized+skeletal+and+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Fabrication and characterization of injectable hydrogels derived from decellularized skeletal and cardiac muscle.</a> Methods. 84, 53-59 (2015).</li>
<li>Seo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+heart+ECM+hydrogel+using+supercritical+carbon+dioxide+for+improved+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Decellularized heart ECM hydrogel using supercritical carbon dioxide for improved angiogenesis.</a> Acta Biomater. 67, 270-281 (2018).</li>
<li>Liguori, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biomechanical+clues+from+cardiac+tissue+decellularized+extracellular+matrix+drive+stromal+cell+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biomechanical clues from cardiac tissue decellularized extracellular matrix drive stromal cell plasticity.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8, 520(2020).</li>
<li>Silva, A. C., Pereira, C., Fonseca, A. C. R. G., Pinto-do-Ó, P., Nascimento, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bearing+my+heart%3A+The+role+of+extracellular+matrix+on+cardiac+development%2C+homeostasis%2C+and+injury+response%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Bearing my heart: The role of extracellular matrix on cardiac development, homeostasis, and injury response.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 621644(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Frasco de laboratorio de 1 L&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1595</td><td>Limpiar y esterilizar en autoclave antes de usar</td></tr><tr><td>pipeta serológica de 10 ml</td><td>Falcon</td><td></td><td>357551 Estéril,&nbsp; placa de vidrio de poliestireno</td></tr><tr><td>de 100 mm&nbsp;</td><td>VWR</td><td>391-0578</td><td>Limpiar y esterilizar en autoclave antes de usar</td></tr><tr><td>Placas de 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td>Placa de cultivo celular estéril tratada y estéril</td></tr><tr>Tubos<td>estériles de 15 mL Centrífuga</td><td>Falcon</td><td>352097</td> tubos <td>estériles, polipropileno</td></tr><tr><td>22 mm x 22 mm cubreobjetos</td><td>VWR</td><td>631-1570</td><td>Autoclave antes del uso</td></tr><tr><td>Pipeta serológica de 25 mL</td><td>Falcon</td><td>357525</td><td>Estéril, &nbsp; frasco de laboratorio de poliestireno</td></tr><tr><td>250 mL&nbsp;</td><td>VWR</td><td>215-1593</td><td>Limpiar y esterilizar en autoclave antes de usar</td></tr><tr><td>placas de 35 mm</td><td>Falcon</td><td></td><td>353001 Placa de cultivo celular estéril</td></tr> tratada <tr><td>pipeta serológica de 5 ml</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td>Estéril, poliestireno</td></tr><tr><td>50 mL tubos estériles</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td>Centrífuga tubos estériles, polipropileno</td></tr><tr><td>Frasco de laboratorio de 500 mL</td><td>VWR</td><td>215-1594</td><td>Limpio y Autoclave antes de usar</td></tr><tr><td>placas de 60 mm</td><td>Falcon</td><td></td><td>353004 Placa de cultivo celular estéril tratada</td></tr><tr><td>Hidróxido de amonio (NH4OH)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>338818</td><td>Líquido</td></tr><tr><td>Bisturíes desechables</td><td>VWR</td><td>233-5526</td><td>Estériles y desechables</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>D6429-500ml</td><td>Almacene a 2-8 &deg; C; evite la exposición a la luz</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>F9665-500ml</td><td>Almacene a -20 &deg;C. El suero debe alícuota en volúmenes de trabajo más pequeños</td></tr><tr><td>Pinza fina</td><td>VWR</td><td>232-1317</td><td>Limpiar y esterilizar en autoclave antes</td></tr><tr><td>de usar Gelatina de piel porcina</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>G1890-100G</td><td>Polvo comercial</td></tr><tr><td>Solución salina equilibrada de Hank's (HBSS)</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>H1387-1L</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Tijeras quirúrgicas grandes</td><td>VWR</td><td>233-1211</td><td>Limpiar y autoclave antes de usar</td></tr><tr><td>tijeras de microdisección&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S3146</td><td>Limpiar y esterilizar en autoclave antes de usar</td></tr><tr><td>Penicilina y estreptomicina&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>P4333-100ml</td><td>Tienda a -20&deg;C. La solución&nbsp; debe alícuota en volúmenes de trabajo más pequeños</td></tr><tr><td>Cloruro de potasio</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>P9333</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Fosfato de potasio monobásico</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>P5665</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio&nbsp;</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S7653</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Fosfato de Sodio Dibásico</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>94046</td><td>Polvo</td></tr><tr><td>Stericup Filtros</td><td>Millipore</td><td>S2GPU05RE</td><td>Membranas filtrantes estériles y desechables de 0,22 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina Líquida-EDTA</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T4049-100ml</td><td>Almacenar a -20 &deg;C. Debe alícuota en volúmenes de trabajo más pequeños</td></tr></tbody></table>

producción de matriz extracelular cardíaca a partir de fibroblastos humanos adultos para el recubrimiento de placas de cultivo

Production of Cardiac Extracellular Matrix from Adult Human Fibroblasts for Culture Dish Coating

El crecimiento de los fibroblastos a partir de los pequeños fragmentos de miocardio nativo colocados en cultivo se observó en un plazo de 3 a 5 días (Figura 1).
En los días siguientes, el número de fibroblastos continuó aumentando, posiblemente debido al crecimiento sostenido de la muestra de tejido cardíaco y la proliferación de fibroblastos migrados en la superficie de la placa. No debe esperarse que todos los fragmentos de miocardio obtenidos por disgregación mecánica con un bisturí produzcan el mismo número de fibroblastos en el mismo tiempo, ya que los fragmentos de tejido resultantes pueden tener volúmenes y tasas de supervivencia celular ligeramente diferentes. En particular, los fragmentos de miocardio con actividad de excrecencia confirmada pueden retenerse y replatearse, lo que permite utilizarlos al menos dos veces para el aislamiento de fibroblastos.
Los fibroblastos se pueden subcultivar en varios pasajes para aumentar el número de células disponibles para experimentos posteriores. Sin embargo, una vez que alcanzan la confluencia, los fibroblastos dejan de proliferar in vitro y asumen actividad de síntesis y secreción, depositando matriz extracelular. La descelularización posterior deja la superficie de la placa recubierta con una malla de MEC cardíaca (Figura 2). La observación visual de la placa de cultivo, a simple vista y utilizando un microscopio de contraste de fase invertida, durante la extracción de fibroblastos es esencial para minimizar el tiempo de incubación en la solución de descelularización al mínimo necesario y suficiente. La presencia de un velo flotante durante la incubación indica permeabilización y desprendimiento de la monocapa de fibroblastos, y la solución de descelularización debe diluirse y eliminarse inmediatamente después.
La composición de la MEC cardíaca derivada de fibroblastos depende de la fuente de los fibroblastos. En nuestros experimentos, la MEC cardíaca producida por fibroblastos aislados de corazones humanos normales y de corazones humanos con cardiopatía isquémica tenía diferentes contenidos de proteínas y ejercía diferentes influencias sobre la proliferación, apoptosis y migración de células cardíacas primitivas11,12. Aunque la pérdida de proteínas de la MEC es inevitable durante el proceso de descelularización, el método empleado en el presente protocolo preservó en gran medida la composición y la arquitectura de la MEC cardíaca producida in vitro (Figura 3).
En este protocolo, se utilizó tejido auricular porque se puede obtener tanto de corazones normales (donantes) como patológicos (receptores). Si bien todo el corazón patológico (receptor) puede seccionarse y utilizarse para la investigación (siguiendo los principios de la Declaración de Helsinki y con la aprobación del comité de ética local), no es posible obtener muestras de ventrículos del corazón del donante en el momento del trasplante. Por esta razón, si el objetivo del estudio es investigar las diferencias entre el tejido cardíaco en condiciones normales y patológicas, la mejor fuente de muestra es la pared auricular. Dependiendo de la disponibilidad de otras fuentes viables de tejido cardíaco, se pueden utilizar muestras de las paredes auriculares o ventriculares de los corazones normales o patológicos siguiendo el mismo protocolo para el recubrimiento de la placa de MEC cardíaca.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig01.jpg"> Figura 1: Aislamiento de fibroblastos cardíacos. Crecimiento de fibroblastos a partir de fragmentos de miocardio después de 4 días (A), 8 días (B) y 12 días (C) de cultivo. Barras de escala: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig02.jpg"> Figura 2: Descelularización de la matriz extracelular. Fibroblastos después de aproximadamente 10 s (A), 20 s (B), 30 s (C), 40 s (D), 50 s (E) y 60 s (F) de incubación en la solución de descelularización. Barras de escala: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66160/66160fig03.jpg"> Figura 3: Composición de la matriz extracelular antes y después de la descelularización. Tinción inmunofluorescente indirecta de proteínas representativas de la matriz extracelular cardíaca, incluyendo colágeno, laminina (C,G) y fibronectina (D,H) de tipo III (A,E) y tipo IV (B,F), antes (A-D) y después (E-H) de la extracción de fibroblastos. Los núcleos celulares se tiñeron con DAPI (azul). Barras de escala: (A-C,E-G) 50 μm; (D,H) 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66160/66160fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Soluciones</td>
			<td colspan="2">Composición de las soluciones</td>
			<td>Volumen final</td>
			<td>Comentarios</td>
		</tr><tr><td>Solución salina equilibrada de Hank (HBSS)</td>
			<td colspan="2">Sales comerciales + agua estéril bidestilada + 0,35 g de bicarbonato de sodio</td>
			<td>1 L</td>
			<td>Esterilizado por filtración/almacenamiento a 4 °C</td>
		</tr><tr><td>Solución de descelularización</td>
			<td colspan="2">0,25% Triton X-100 + 10 mM NH4OH+ PBS</td>
			<td>50 mL</td>
			<td>Esterilizado por filtración/almacenamiento a 4 °C</td>
		</tr><tr><td>Medio de águila modificada de Dulbecco (DMEM)</td>
			<td colspan="2">223,75 mL DMEM + 25 mL de suero fetal bovino + 1,25 mL de solución de penicilina/estreptomicina</td>
			<td>250 mL</td>
			<td>Conservar a 4 °C</td>
		</tr><tr><td>Solución de gelatina</td>
			<td colspan="2">0,2 g de gelatina en polvo + 100 ml de solución salina tamponada con fosfato</td>
			<td>100 mL</td>
			<td>Esterilizado por filtración/almacenamiento a 4 °C</td>
		</tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (1x PBS)</td>
			<td colspan="2">0,1 g de fosfato potásico monobásico + 0,1 g de cloruro potásico + 4,0 g de cloruro sódico + 0,575 g de fosfato sódico dibásico + agua estéril bidestilada</td>
			<td>500 mL</td>
			<td>Esterilizado por filtración/almacenamiento a 4 °C</td>
		</tr><tr><td>Solución de parada de tripsina (TSS)</td>
			<td colspan="2">5 mL de suero fetal bovino + 45 mL de solución salina balanceada de Hank's</td>
			<td>50 mL</td>
			<td>Conservar a 4 °C</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 1: Los componentes y las concentraciones respectivas para cada solución utilizada en el estudio.

Producción de Matriz Extracelular Cardíaca a partir de Fibroblastos Humanos Adultos para el Recubrimiento de Placas de Cultivo

The myocardium is composed of cardiomyocytes and an even greater number of fibroblasts, the latter being responsible for extracellular matrix production. ...

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Research

Investigación

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Biology

Biología

Los cultivos primarios de cardiomiocitos de ratón son una de las herramientas fundamentales para la investigación de la organización miofibrilar y la función. El siguiente protocolo describe el aislamiento y cultivo de cardiomiocitos primarios de corazones de ratón neonatales. Los cultivos de cardiomiocitos resultantes pueden usarse posteriormente para una variedad de ensayos biomecánicos, bioquímicos y de células biológica.

Aislamiento y cultivo de cardiomiocitos neonatales Ratón

Este manuscrito describe la creación de tejidos cardíacos de ingeniería definidos utilizando la expresión de marcadores de superficie y la clasificación de células. Los tejidos definidos se pueden utilizar en un biorreactor multitejido para investigar los mecanismos de la terapia celular cardíaca con el fin de proporcionar un sistema modelo funcional, pero controlado, del corazón humano.

Construcción de Engineered Definido Humanos cardíacos tejidos para estudiar los mecanismos de la terapia celular cardiaca

En estos estudios, se entrega metodología para la novela, andamios cardiacos neonatales, murinos para su uso en estudios de regeneración.

Los andamios neonatal cardíaca: Matrices novedosos para Estudios regenerativos

Este protocolo describe la descelularización completa del miocardio humano conservando sus componentes de matriz extracelular. Tratamiento posterior de los resultados de la matriz extracelular en la producción de micropartículas y un hidrogel de uno mismo-montaje de citoprotectores.

Procesamiento de tejido cardiaco humano hacia la matriz extracelular autoensamblada hidrogel para aplicaciones In Vivo y In Vitro

La matriz extracelular cardiaca (ECM) es una compleja red de moléculas que orquestar procesos clave en los tejidos y órganos mientras aguantando remodelación fisiológica durante toda la vida. Descelularización estandarizado del corazón fetal y adulto permite estudios experimentales comparativos de ambos tejidos en un contexto 3D mediante la captura de arquitectura original y propiedades biomecánicas.

Descelularización comparable de explantes de tejido cardíaco Fetal y adulto como 3D-como plataformas para estudios In Vitro

Este protocolo describe un método neto basado en el molde para crear los tejidos cardiacos libre de andamio tridimensionales satisfactoria integridad estructural y comportamiento síncrono de la paliza.

Un método basado en el molde neto creación libre de andamio tridimensional de tejido cardiaco

El objetivo de este protocolo es la producción de fibras de la matriz extracelular todo destinados a la reparación de la herida que son adecuados para la evaluación preclínica como parte de un implante de andamio regenerativa. Estas fibras se producen por la cultura de los fibroblastos en las membranas de fibra hueca y extraídas por disolución de las membranas.

Producción de fibras de la matriz extracelular mediante cultivo de células de membrana de fibra hueca sacrificio

El objetivo de este método es obtener matrices 3D derivadas de fibroblastos como un andamio natural para ensayos celulares posteriores. Los fibroblastos se sembran en una placa de cultivo pretratada y se estimulan con ácido ascórbico para la generación de matrices. Las matrices se descelularizan y se bloquean para cultivar células relevantes (por ejemplo, células endoteliales).

Sistema de matriz 3D derivado de fibroblastos aplicable al ensayo de formación de tubos endoteliales

El presente protocolo genera tejidos cardíacos de ingeniería en forma de malla que contienen células cardiovasculares derivadas de células madre pluripotentes inducidas por el hombre para permitir la investigación de la terapia de implantación celular para enfermedades del corazón.

Preparación de tejidos cardíacos de ingeniería en forma de malla derivados de células iPS humanas para la reparación del miocardio In Vivo

Aquí, describimos una metodología fácil de usar para generar matrices de microtejidos cardíacos autoensamblados en 3D compuestos por cardiomiocitos derivados de células madre pluripotentes prediferenciadas inducidas por humanos, fibroblastos cardíacos y células endoteliales. Esta técnica fácil de usar y de baja capacidad de células para generar microtejidos cardíacos se puede implementar para el modelado de enfermedades y las primeras etapas del desarrollo de fármacos.

Fabricación de matrices de microtejidos cardíacos 3D utilizando cardiomiocitos humanos derivados de iPSC, fibroblastos cardíacos y células endoteliales

Aquí se presenta un protocolo para generar tejidos conectivos diseñados para un cultivo paralelo de 48 tejidos en una placa de múltiples pocillos con polos dobles, adecuado para estudios mecanicistas, modelado de enfermedades y aplicaciones de detección. El protocolo es compatible con fibroblastos de diferentes órganos y especies y se ejemplifica aquí con fibroblastos cardíacos primarios humanos.

Tejido conectivo de ingeniería humana derivado de fibroblastos para aplicaciones de detección

Aprenda a producir matriz extracelular cardíaca a partir de fibroblastos humanos adultos mediante decelularización. Este método permite estudiar interacciones célula-matriz para ingeniería tisular cardiaca.

Producción de Matriz Extracelular Cardíaca a partir de Fibroblastos Humanos Adultos para el Recubrimiento de Placas de Cultivo

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