Name: Monitorización de la glucosa en sangre en crías de ratón después de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: Aprenda a monitorizar la glucosa en sangre en crías de ratón tras la inyección intracitoplasmática de espermatozoides. Este protocolo evalúa los efectos metabólicos a largo plazo de la técnica ICSI en descendencia.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modelo de ratón ICSI-ET para estudiar los impactos a largo plazo en el metabolismo de la glucosa

<ol><li>Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+after+intracytoplasmic+injection+of+single+spermatozoon+into+an+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte.</a> Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).</li>
<li>Flurkey, K. M., Currer, J., Harrison, D. E. Vol. III Mouse models in aging research. Ch. 20. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFlurkey%2C+KM+%22The+mouse+in+biomedical+research+%28second+edition%29%22">The mouse in biomedical research (second edition)</a>. Fox, J. G., et al. , Academic Press. Burlington. 637-672 (2007).</li>
<li>Chen, M., Heilbronn, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+health+outcomes+of+human+offspring+conceived+by+assisted+reproductive+technologies+%28art%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Orig+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">The health outcomes of human offspring conceived by assisted reproductive technologies (art).</a> J Dev Orig Health Dis. 8 (4), 388-402 (2017).</li>
<li>Heber, M. F., Ptak, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+assisted+reproduction+technologies+on+metabolic+health+and+diseasedagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">The effects of assisted reproduction technologies on metabolic health and diseasedagger.</a> Biol Reprod. 104 (4), 734-744 (2021).</li>
<li>Ma, R. C. W., Ng, N. Y. H., Cheung, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assisted+reproduction+technology+and+long-term+cardiometabolic+health+in+the+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Assisted reproduction technology and long-term cardiometabolic health in the offspring.</a> PLoS Med. 18 (9), e1003724(2021).</li>
<li>De Waal, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cumulative+effect+of+assisted+reproduction+procedures+on+placental+development+and+epigenetic+perturbations+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">The cumulative effect of assisted reproduction procedures on placental development and epigenetic perturbations in a mouse model.</a> Hum Mol Genet. 24 (24), 6975-6985 (2015).</li>
<li>Carlin, J., George, R., Reyes, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+donor+supplementation+blocks+the+adverse+effects+of+maternal+high+fat+diet+on+offspring+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Methyl donor supplementation blocks the adverse effects of maternal high fat diet on offspring physiology.</a> PLoS One. 8 (5), e63549(2013).</li>
<li>Hiraoka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo-icsi+for+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Piezo-icsi for human oocytes.</a> J Vis Exp. (170), e60224(2021).</li>
<li>Sullivan-Pyke, C. S., Senapati, S., Mainigi, M. A., Barnhart, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fertilization+and+adverse+obstetric+and+perinatal+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">In vitro fertilization and adverse obstetric and perinatal outcomes.</a> Semin Perinatol. 41 (6), 345-353 (2017).</li>
<li>Luke, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+birth+defects+with+conception+by+art%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">The risk of birth defects with conception by art.</a> Hum Reprod. 36 (1), 116-129 (2021).</li>
<li>Norrman, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease%2C+obesity%2C+and+type+2+diabetes+in+children+born+after+assisted+reproductive+technology%3A+A+population-based+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease, obesity, and type 2 diabetes in children born after assisted reproductive technology: A population-based cohort study.</a> PLoS Med. 18 (9), e1003723(2021).</li>
<li>Goldsmith, S., Mcintyre, S., Badawi, N., Hansen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+palsy+after+assisted+reproductive+technology%3A+A+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cerebral palsy after assisted reproductive technology: A cohort study.</a> Dev Med Child Neurol. 60 (1), 73-80 (2018).</li>
<li>Hansen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intellectual+disability+in+children+conceived+using+assisted+reproductive+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Intellectual disability in children conceived using assisted reproductive technology.</a> Pediatrics. 142 (6), e20181269(2018).</li>
<li>Chang, R. C., Wang, H., Bedi, Y., Golding, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preconception+paternal+alcohol+exposure+exerts+sex-specific+effects+on+offspring+growth+and+long-term+metabolic+programming%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics+Chromatin%22%5BJournal%5D)">Preconception paternal alcohol exposure exerts sex-specific effects on offspring growth and long-term metabolic programming.</a> Epigenetics Chromatin. 12 (1), 9(2019).</li>
<li>Grasemann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parental+diabetes%3A+The+akita+mouse+as+a+model+of+the+effects+of+maternal+and+paternal+hyperglycemia+in+wildtype+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Parental diabetes: The akita mouse as a model of the effects of maternal and paternal hyperglycemia in wildtype offspring.</a> PLoS One. 7 (11), e50210(2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,25% avertin (2,2,2-tribromoetanol)</td><td>Nanjing Aibei</td><td>M2960</td><td>para anestesia</td></tr><tr><td>Placas de Petri bacteriológicas Estilo de 35 x 10 mm con tapa hermética, poliestireno virgen de grado cristalino,</td><td>estéril BD</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri bacteriológicas Estilo de 50 x 9 mm con tapa hermética, poliestireno virgen de grado cristalino, estéril</td><td>BD</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>Gabinete de bioseguridad</td><td>ESCO</td><td>class <img alt="Ecuación 1" src="/files/ftp_upload/66212/66212eq01.jpg" style="margin: auto; "> BSC</td><td>Operaciones asépticas, fabricación de placas de cultivo, reactivos alícuotas, etc.</td></tr><tr><td>Incubadora de CO2</td><td>Thermo</td><td>8000DH</td><td>Cultivo de embriones</td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Uso en la transferencia de embriones de ratón</td></tr><tr><td>Fluorinert Fc-770</td><td>SIGMA</td><td>F3556</td><td>Fluorinert FC-770 es un líquido totalmente fluorado térmicamente estable con alta rigidez dieléctrica y resistividad, utilizado como fluido de funcionamiento</td></tr><tr><td>glucómetro de mano</td><td>Roche</td><td>AccuChek performa</td><td>Blood medición de glucosa</td></tr><tr><td>HTF</td><td>Merck</td><td>MR-070-D</td><td>El EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), líquido diseñado para su uso con FIV en ratones, está disponible en un formato de 50 mL y ha sido optimizado y validado para el cultivo de embriones.</td></tr><tr><td>Microinyector hidráulico</td><td>Eppendorf</td><td>CellTram 4r Aceite, 5196000030</td><td>para inyección de esperma</td></tr><tr><td>Microscopio invertido</td><td>Nikon</td><td>TI2-U Anfitrión de</td><td>observación de micromanipulación</td></tr><tr><td>KSOM</td><td>Merck</td><td>MR-020P-D</td><td>(1x), Polvo, sin Rojo Fenol, 5 x 10 mL</td></tr><tr><td>M2</td><td>Merck</td><td>MR-015-D</td><td>EmbryoMax M2 Medio (1x), Líquido, con Micromanipulador de Rojo Fenol</td></tr><tr><td></td><td>NARISHIGE</td><td>NTX-N4</td><td>Aceite mineral del brazo</td></tr><tr><td>de micromanipulación </td>El aceite mineral <td>SIGMA</td><td>M8410</td><td>es adecuado para su uso como capa de cobertura para controlar la evaporación y la contaminación cruzada en diversas aplicaciones de biología molecular.</td></tr><tr><td>Cortador de agujas</td><td>Nanjing Aibei</td><td>Sutter MF-800</td><td>Uso para la fabricación de agujas de micromanipulación</td></tr><tr><td>Tirador de agujas</td><td>Nanjing Aibei</td><td>Sutter modelo p-100</td><td>Uso para la fabricación de agujas de micromanipulación</td></tr><tr><td>Piezo Drill Trip Mouce ICSI</td><td>Eppendorf</td><td>5195000.087</td><td>Aplicación de aguja de inyección ICSI.</td></tr><tr><td>Micromanipulador piezoeléctrico (rompedor de membranas)</td><td>Eppendorf</td><td>Eppendorf PiezoXpert</td><td>Uso de micropulsos para romper la zona pelúcida y el oolema del ovocito</td></tr><tr><td>Microinyector neumático</td><td>Eppendorf</td><td>CellTram 4r Air, 5196000013</td><td>Para la fijación del ovocito</td></tr><tr><td>Gonadotropina coriónica humana (Hcg) lista para</td> <td>usarNanjing Aibei</td><td>M2520</td><td>Reactivo de esterilización, inyección intraperitoneal. 50 UI/mL</td></tr><tr><td>Gonadotropina sérica de yegua embarazada (PMSG)</td><td>Nanjing Aibei</td><td>M2620</td><td>Reactivo de esterilización, inyección intraperitoneal. 50 UI/mL</td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Olympus</td><td>SZX7</td><td>Extracción de ovocitos y observación del desarrollo embrionario</td></tr></tbody></table>

monitorización de la glucosa en sangre en crías de ratón después de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides

Monitoring Blood Glucose in Mouse Offspring After Intracytoplasmic Sperm Injection

En nuestro laboratorio, hemos conseguido una tasa de fecundación del 89,57% y una tasa de 2 células del 87,38% utilizando ICSI con espermatozoides caudales del epidídimo en ratones. La tasa de natalidad de las crías después de la ET es de aproximadamente el 42,50%. Sorprendentemente, todas las tasas de fertilización, las tasas de 2 células y las tasas de nacimiento de descendientes son comparables a los niveles alcanzados en la TAR humana, lo que permite una simulación completa de las diferentes etapas de las técnicas de TAR humanas en ratones. En los cuadros 1 y 2 se ofrecen más detalles. No hubo fluctuaciones significativas en los niveles aleatorios de glucosa en sangre entre los ratones nacidos de forma natural y los ratones ICSI durante el proceso de crecimiento y desarrollo (Figura 2). Sin embargo, los ratones machos ICSI mostraron niveles continuamente altos de glucosa en sangre en ayunas durante todo el experimento (Figura 3), lo que indica una alteración de la homeostasis de la glucosa en sangre en ayunas. Curiosamente, los ratones hembra ICSI no mostraron cambios en comparación con el grupo de control. En el GTT, el nivel de glucosa en sangre mostró un cambio significativo entre los ratones machos ICSI y el grupo control (Figura 4), y no hubo tal diferencia en los ratones hembra. Estos resultados sugirieron que la descendencia obtenida mediante la tecnología ICSI podría padecer diabetes, y el resultado estaba relacionado con el sexo. Aunque los ratones hembra no mostraron el fenotipo de diabetes, el fenotipo de sobrepeso de los ratones ICSI machos y hembras fue consistente (Figura 5).
Utilizando el protocolo de inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) descrito aquí, logramos altas tasas de fertilización y desarrollo embrionario en ratones. En un experimento representativo, el 89,57% de los ovocitos fueron fecundados después de la ICSI, como lo demuestra la formación de dos pronúcleos. A las 24 h después de la ICSI, el 87,38% de los cigotos evolucionaron hasta el estadio embrionario de 2 células. Después de la transferencia embrionaria a las hembras receptoras, la tasa de natalidad de las crías vivas fue del 42,50% (resultados positivos). Utilizando el protocolo optimizado de inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) descrito aquí, generamos descendencia de manera eficiente a partir de ovocitos y espermatozoides de ratón. Es importante destacar que una caracterización exhaustiva de los animales derivados de ICSI reveló perturbaciones metabólicas en ausencia de defectos graves del desarrollo.
En comparación con los controles criados de forma natural, los ratones machos, pero no hembras, mostraron una homeostasis de la glucosa alterada, evidenciada por un aumento de la glucosa en sangre en ayunas (Figura 3) y una tolerancia reducida a la glucosa en las pruebas de tolerancia a la glucosa intraperitoneal (Figura 4). Estas alteraciones pueden deberse a deficiencias de reprogramación durante la fertilización mediada por ICSI o a sutiles anomalías genéticas/epigenéticas incurridas durante la manipulación de espermatozoides.
Además, tanto los ratones machos como las hembras mostraron un aumento de peso corporal en comparación con los controles (Figura 5), lo que sugiere una propensión a la obesidad. Si bien la técnica ICSI en ratones modela de manera confiable los resultados humanos de ICSI, los fenotipos metabólicos observados subrayan la necesidad de interpretar con cautela los resultados de los modelos animales de ICSI. La evaluación exhaustiva del crecimiento, la salud y el comportamiento es imprescindible para determinar la idoneidad de los ratones ICSI para aplicaciones posteriores.
En conjunto, estos datos ilustran la utilidad del protocolo ICSI de ratón para generar descendencia de manera eficiente para los estudios, al tiempo que destacan la importancia de evaluar exhaustivamente los resultados fenotípicos en animales derivados de ICSI. Las anomalías metabólicas específicas del sexo observadas en este ejemplo subrayan la necesidad de una interpretación cuidadosa de los resultados de los modelos de ratón ICSI.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig01.jpg"> Figura 1: Diagrama de la preparación de la placa para la inyección intracitoplasmática de espermatozoides en ratones. La tapa de la placa de cultivo celular se dividió en mitades superior e inferior. La mitad superior contenía gotas de solución de polivinilpirrolidona al 10% para la colocación de espermatozoides. La mitad inferior contenía gotas de medio M2 para llevar a cabo el procedimiento ICSI. Todas las gotas se cubrieron con aceite mineral para evitar la evaporación. Esta configuración de la placa permitió la transferencia secuencial de espermatozoides y ovocitos entre PVP y gotas M2 para permitir el proceso ICSI. Las áreas separadas evitaron la mezcla de medios durante el procedimiento. Abreviaturas: ICSI = inyección intracitoplasmática de espermatozoides; PVP = polivinilpirrolidona. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig02.jpg"> Figura 2: Niveles aleatorios semanales de glucosa en sangre en ratones control (n = 5) e ICSI (n = 5) criados naturalmente durante el desarrollo postnatal. Los niveles de glucosa en sangre se midieron semanalmente después del ayuno nocturno desde la vena de cola de los ratones control e ICSI utilizando un glucómetro. Los datos se presentan como media ± SEM. La significación estadística se evaluó mediante un ANOVA de dos vías, ns, P &gt; 0,05. Abreviaturas: SEM = Error estándar de la media; ICSI = inyección intracitoplasmática de espermatozoides; ns = no significativo; NM = apareamiento natural. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig03.jpg"> Figura 3: Niveles semanales de glucosa en sangre en ayunas en ratones de control criados naturalmente (n = 7 para machos, n = 7 para hembras) y tratados con ICSI (n = 7 para machos, n = 7 para hembras) durante el desarrollo postnatal. Después del ayuno nocturno, los niveles de glucosa en sangre se midieron semanalmente desde la vena de la cola de los ratones de control en ayunas y tratados con ICSI utilizando un glucómetro. Se observó que los ratones machos tratados con ICSI, pero no las hembras, exhibieron niveles significativamente elevados de glucosa en sangre en ayunas en comparación con sus controles emparejados por sexo a partir de las 8 semanas de edad. Los datos se presentan como media ± SEM. La significación estadística se evaluó mediante un ANOVA de dos factores, ns, P &gt; 0,05, ***P &lt; 0,001,****P &lt; 0,0001). Abreviaturas: SEM = Error estándar de la media; ICSI = inyección intracitoplasmática de espermatozoides; ns = no significativo; NM = apareamiento natural. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig04.jpg"> Figura 4: Prueba de tolerancia a la glucosa intraperitoneal en ratones control criados naturalmente (n = 5) y ratones machos tratados con ICSI (n = 5) a las 16 semanas de edad. Después de un ayuno nocturno, los ratones recibieron una inyección intraperitoneal de glucosa (2 g/kg de peso corporal). A continuación, se midieron los niveles de glucosa en sangre a los 0, 30, 60 y 120 minutos después de la inyección. Los ratones machos tratados con ICSI mostraron niveles de glucosa en sangre significativamente más altos a los 30, 60 y 120 minutos durante la IPGTT en comparación con el control criado de forma natural. Los datos se presentan como media ± SEM y los análisis se realizaron mediante ANOVA de dos vías. ns, P &gt; 0,05. *P &lt; 0,05. Abreviaturas: IPGTT = Prueba de tolerancia a la glucosa intraperitoneal; SEM = error estándar de la media; ICSI = inyección intracitoplasmática de espermatozoides; ns = no significativo; NM = apareamiento natural. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66212/66212fig05.jpg"> Figura 5: Seguimiento del peso corporal de ratones de control criados naturalmente (n = 5 machos, n = 5 hembras) y tratados con ICSI (n = 5 machos, n = 5 hembras) de 4 a 20 semanas de edad. Las mediciones semanales revelaron que tanto los ratones machos como las hembras tratados con ICSI exhibieron un aumento significativo del peso corporal en comparación con sus controles emparejados con el género, a partir de las 8 semanas de edad. Los datos se presentan como media ± SEM y los análisis se realizaron mediante ANOVA de dos vías. P &lt; 0,001. P &lt; 0,0001. Abreviaturas: SEM = Error estándar de la media; ICSI = inyección intracitoplasmática de espermatozoides; ns = no significativo; NM = apareamiento natural. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66212/66212fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:font-size="8px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td style="min-width: 60px;"></td>
			<td style="min-width: 60px;">Ovocitos</td>
			<td style="min-width: 60px;">Cigotos</td>
			<td style="min-width: 60px;">Tasa de fertilización (%)</td>
			<td style="min-width: 60px;">2 celdas</td>
			<td style="min-width: 60px;">Tasa de 2 celdas (%)</td>
			<td style="min-width: 60px;">4-8 celdas</td>
			<td style="min-width: 60px;">Tasa de 4-8 celdas (%)</td>
			<td style="min-width: 60px;">Mórula</td>
			<td style="min-width: 60px;">Tasa de mórula</td>
			<td style="min-width: 60px;">Blastocistos</td>
			<td style="min-width: 60px;">Tasa de blastocistos</td>
		</tr><tr><td style="min-width: 60px;">Esperma de cauda ICSI1</td>
			<td style="min-width: 60px;">90</td>
			<td style="min-width: 60px;">84</td>
			<td style="min-width: 60px;">93.33</td>
			<td style="min-width: 60px;">76</td>
			<td style="min-width: 60px;">90.48</td>
			<td style="min-width: 60px;">72</td>
			<td style="min-width: 60px;">85.71</td>
			<td style="min-width: 60px;">69</td>
			<td style="min-width: 60px;">82.14</td>
			<td style="min-width: 60px;">64</td>
			<td style="min-width: 60px;">76.19</td>
		</tr><tr><td style="min-width: 60px;">Cauda esperma ICSI2</td>
			<td style="min-width: 60px;">80</td>
			<td style="min-width: 60px;">72</td>
			<td style="min-width: 60px;">90</td>
			<td style="min-width: 60px;">62</td>
			<td style="min-width: 60px;">86.11</td>
			<td style="min-width: 60px;">59</td>
			<td style="min-width: 60px;">81.94</td>
			<td style="min-width: 60px;">53</td>
			<td style="min-width: 60px;">73.61</td>
			<td style="min-width: 60px;">46</td>
			<td style="min-width: 60px;">63.89</td>
		</tr><tr><td style="min-width: 60px;">Cauda espermática ICSI3</td>
			<td style="min-width: 60px;">60</td>
			<td style="min-width: 60px;">50</td>
			<td style="min-width: 60px;">83.33</td>
			<td style="min-width: 60px;">42</td>
			<td style="min-width: 60px;">84</td>
			<td style="min-width: 60px;">37</td>
			<td style="min-width: 60px;">74</td>
			<td style="min-width: 60px;">32</td>
			<td style="min-width: 60px;">64</td>
			<td style="min-width: 60px;">28</td>
			<td style="min-width: 60px;">56</td>
		</tr><tr><td style="min-width: 60px;">Total</td>
			<td style="min-width: 60px;">230</td>
			<td style="min-width: 60px;">206</td>
			<td style="min-width: 60px;">89.57</td>
			<td style="min-width: 60px;">180</td>
			<td style="min-width: 60px;">87.38</td>
			<td style="min-width: 60px;">168</td>
			<td style="min-width: 60px;">81.55</td>
			<td style="min-width: 60px;">154</td>
			<td style="min-width: 60px;">74.76</td>
			<td style="min-width: 60px;">138</td>
			<td style="min-width: 60px;">66.99</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 1: Resultados del desarrollo después de la ICSI en ratones. Abreviatura: ICSI = inyección intracitoplasmática de espermatozoides.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>No.</td>
			<td>No. de embriones transferidos</td>
			<td>No. de nacimiento (%)</td>
			<td>Masculino</td>
			<td>Hembra</td>
			<td>Tasa de natalidad (%)</td>
		</tr><tr><td>1</td>
			<td>6</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>2</td>
			<td>6</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>3</td>
			<td>5</td>
			<td>2</td>
			<td>0</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>4</td>
			<td>8</td>
			<td>4</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>5</td>
			<td>8</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>6</td>
			<td>7</td>
			<td>5</td>
			<td>3</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>Total</td>
			<td>40</td>
			<td>17</td>
			<td>10</td>
			<td>7</td>
			<td>42.5</td>
		</tr></tbody></table>Tabla 2: Resultados del parto tras el trasplante uterino de embriones de ratón ICSI. Abreviatura: ICSI = inyección intracitoplasmática de espermatozoides.

Monitorización de la glucosa en sangre en crías de ratón después de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides

Human lifespan is considerably long, while mouse models can simulate the entire human lifespan in a relatively short period, with one year of mouse life ...

monitoring-blood-glucose-mouse-offspring-after-intracytoplasmic-sperm

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Este video demuestra el efecto de la infusión continua de medicamentos en el cerebro del ratón sobre los niveles de glucosa en la sangre. El metabolismo de la glucosa se evalúa mediante la recolección de sangre de la cola de un ratón en ayunas y la medición de los niveles de glucosa antes y después de la administración oral de glucosa. La tolerancia a la insulina se evalúa inyectando insulina en el ratón, con niveles de glucosa registrados a intervalos específicos.

Evaluación del efecto de la infusión continua de fármacos en el cerebro de ratón sobre los niveles periféricos de glucosa

Este protocolo estudia el papel de la quimiocina ligando de (motivo C-C) 5 (CCL5) en el hipotálamo mediante la entrega de un antagonista, CCL5 Met, en el cerebro de ratón utilizando un sistema de infusión de cerebro de bomba micro-osmótico. Esta inhibición transitoria de la actividad CCL5 interrumpido insulina hipotalámica señalización, conduce a la intolerancia a la glucosa y sensibilidad a la insulina sistémica periférica.

Estudio de la señal de insulina hipotalámica a la intolerancia de la glucosa periférica con un sistema de infusión continua de medicamentos en el cerebro de ratón

En este estudio, describimos un sistema en la ovo como una herramienta prometedora para probar compuestos de insulina-mimético en un organismo vivo. Las principales ventajas incluyen velocidades de rendimiento adecuados y los costos aceptables, que permitan la identificación de sustancias fitoquímicas con propiedades insulina-mimético.

Un modelo de Ovo para probar compuestos de insulina-mimético

Aquí describimos un nuevo método para detectar el establecimiento exitoso de circulación sanguínea compartida de dos parabiontes a través de una inyección de glucosa en venas caudales, que causa un daño mínimo y no es mortal para los parabionts.

Detectar el establecimiento de suministro de sangre compartido en ratones parabióticos mediante inyección de glucosa en vena caudal

Este estudio describe la medición directa de la producción hepática de glucosa en un modelo de ratón con síndrome de ovario poliquístico mediante el uso de un trazador de glucosa isotópico estable a través de la vena de la cola en estados de ayuno y ricos en glucosa en tándem.

Evaluación de la producción hepática de glucosa en un modelo de ratón con síndrome de ovario poliquístico

La infección materna es un factor de riesgo para los trastornos del desarrollo neurológico. Los modelos de ratón de activación inmune materna (MIA) pueden dilucidar el impacto de la infección en el desarrollo y la función del cerebro. Aquí, se proporcionan pautas generales y un procedimiento para producir crías confiablemente resistentes y susceptibles expuestas a MIA.

Generación de un modelo reproducible de activación inmune materna a mediados de la gestación utilizando Poly(I: C) para estudiar la susceptibilidad y la resiliencia en la descendencia

Este artículo describe un protocolo detallado para aumentar la concentración de glucosa en el líquido cefalorraquídeo (LCR) de ratones. Este enfoque puede ser útil para estudiar los efectos de la glucosa alta en LCR en la neurodegeneración, la cognición y el metabolismo periférico de la glucosa en ratones.

Implantación de minibomba osmótica para aumentar la concentración de glucosa en líquido cefalorraquídeo de ratón

Aquí, presentamos un método para realizar la inyección redonda de espermatida (ROSI) en ratones, una técnica con aplicaciones clínicas prometedoras y utilidad para investigar los mecanismos subyacentes al desarrollo embrionario.

Inyección de espermatida redonda de ratón

Este protocolo describe el método para reducir la ingesta dietética de ácido fólico o colina en ratones hembra antes del embarazo con el objetivo de investigar el impacto de la dieta materna en los resultados de salud de la descendencia.

Modificación de los niveles de ácido fólico o colina en la dieta materna para estudiar el impacto de las deficiencias en los resultados de salud de la descendencia

El artículo proporciona un protocolo completo para generar un modelo murino de activación inmunitaria materna (MIA) para estudiar los efectos de la inflamación gestacional temprana en el neurodesarrollo, incluyendo métricas clave para garantizar la fiabilidad y reproducibilidad.

Generación del modelo ratón de activación inmune materna gestacional temprana para evaluar la inflamación prenatal en el neurodesarrollo

Aprenda a monitorizar la glucosa en sangre en crías de ratón tras la inyección intracitoplasmática de espermatozoides. Este protocolo evalúa los efectos metabólicos a largo plazo de la técnica ICSI en descendencia.

Monitorización de la glucosa en sangre en crías de ratón después de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides

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